Brainbow示踪小鼠心肌细胞增殖中他莫昔芬最适标记剂量的探究

目的:运用Brainbow 2.1小鼠进行心肌细胞谱系追踪,探讨用于心肌细胞增殖标记的最适他莫昔芬剂量。方法:采用4周龄的Brainbowfl/+;Myh6-MerCreMe+小鼠,通过腹腔注射的方式给予3个不同剂量(3、9和27 mg/kg)的他莫昔芬诱导Cre重组酶表达,使心肌细胞标上特定的颜色,4周后取材染色,共聚焦显微镜下定量不同剂量的他莫昔芬标记的心肌细胞数量,以及被标记的细胞中单个细胞、临近的2个细胞簇和临近的3个及以上细胞簇的比例。选择合适剂量(9 mg/kg)的他莫昔芬标记Brainbow小鼠,对比假手术组与心肌梗死(MI)模型组心肌细胞增殖情况。结果:(1)注射9 mg/kg的他莫昔芬后标记的单个细胞比例为99.13%±0.03%,临近的2个细胞簇比例为0.82%±0.09%,3个及以上细胞簇比例为0.05%±0.01%。3 mg/kg组标记总数较少;27 mg/kg组出现明显克隆扩增富集。(2)用9 mg/kg的他莫昔芬标记心肌细胞后,MI小鼠2个细胞簇和3个及以上细胞簇标记比例较假手术组均显著升高(P<0.01),MI后心肌细胞增殖比例增加。结论:9 mg/kg他莫昔芬标记的临近心肌细胞簇的比例更接近生理状态下的心肌细胞增殖比例,因此9 mg/kg为示踪心肌细胞增殖的最适他莫昔芬剂量。