青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)染色体G类带型研究

以青岛文昌鱼的晚期囊胚和早期原肠胚的胚胎细胞为实验材料,利用低渗处理、空气干燥法制备染色体玻片标本。在此基础上,为进一步探索显示青岛文昌鱼染色体G带的新方法,采用片龄、蛋白酶K和胰蛋白酶显带技术对青岛文昌鱼的染色体进行了初步研究,显示了青岛文昌鱼染色体的G类带型,绘制了青岛文昌鱼染色体的G类带型模式图,并对三种G类带型作了比较,进而提出了文昌鱼染色体的G带带型与片龄的相互关系。

青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheritsingtauense)染色体荧光原位杂交条件研究

采用青岛文昌鱼18SrDNA序列为探针进行荧光原位杂交,根据囊胚晚期细胞上的核杂交信号多少及特异性确立青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的最佳反应条件。结果表明适合于青岛文昌鱼染色体荧光原位杂交的条件为:预处理采用5ng/μl的胃蛋白酶处理3—5min和10ng/μlRNA酶处理1h;100—300倍探针浓度的鲑鱼精DNA进行封闭;50%甲酰胺/2×SSC,1×SSC,2×SSC,42℃的洗脱强度;3%BSA进行抗体封闭;杂交时间可以控制在12—18h;杂交温度保持37℃;PI(1.5μg/ml)的量每片20μl以内。

雌雄文昌鱼同工酶的表型差异

本文应用聚丙烯酰胺凝胶电泳结合生化染色方法分析了雌雄文昌鱼中苹果酸酶、苹果酸脱氢酶、酸性磷酸酶和酯酶四种同工酶的酶谱。首次发现苹果酸酶、苹果酸脱氢酶和酸性磷酸酶表型在文昌鱼雌性和雄性个体之间存在差异 ,而在同一性别不同个体之间无差异。酯酶表型较复杂 。

青岛文昌鱼的生活史──年龄、生长和死亡研究

于1989年8月-1990年7月对青岛文昌鱼的生活史进行研究。结果表明：（1）青岛文昌鱼种群由4个年龄组组成，它至少生活4a以上，甚至可达6a左右。（2）在Ⅰ，Ⅱ龄时生长较快，平均年生长13－15mm，Ⅲ龄后生长速度减慢，即使同一年龄组的文昌鱼，在不同季节其生长速度也不同。（3）在冬春采集的文昌鱼中Ⅲ龄组的峰值较小。（4）繁殖季节过后，老龄文昌鱼因衰老而死亡。

青岛文昌鱼的实验室培育──饵料和沙对幼虫成活的影响

于1991年6月-1992年12月对青岛文昌鱼进行室内培育研究。结果表明：1．沙是青岛文昌鱼幼虫生长发育必需的，但在实验室条件下，细沙比全沙和粗沙更有利于其生存。2．就单胞藻而言，等鞭金藻是青岛文昌鱼幼虫生长和变态较理想的饵料。

青岛文昌鱼体征变化及影响因素探究

根据1981年和2004年胶州湾口青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense Tchang et Koo)采集资料,分析了23年来青岛文昌鱼体质量、体长、生物量和栖息密度的变化,发现1981年文昌鱼个体最大体长为55 mm,平均体长为37.63 mm,而2004年个体最大体长仅42 mm,平均体长只有29.82 mm;1981年各月平均体质量范围为0.06～0.14 g,2004年为0.03～0.04 g;1981年平均栖息密度为753个/m2,2004年为1 220个/m2。采用成对数据平均数比较的假设双尾检验法进行数据统计分析结果也表明,文昌鱼的平均体长和体质量在1981年和2004年均有显著的差异,平均分布密度在显著水平a为0.01时,差异不显著,而在a为0.05时,差异显著;说明2004年采集的青岛文昌鱼个体长度和质量都明显变小而分布密度有所增加;而平均生物量,1981年和2004年没有显著性差异。不同体长个体数比例表明,1981年和2004年文昌鱼种群的年龄组成以及各年龄组的生长情况等方面也不相同。引起这些变化的原因初步分析为底质的改变、栖息地萎缩、饵料丰度和组成改变以及人类活动的干扰。

青岛文昌鱼LIM类同源框基因反义寡核苷酸对其胚胎发育的影响

研究了青岛文昌鱼LIM类同源框基因Bblim反义寡核苷酸对文昌鱼胚胎发育的影响。根据已克隆的Bblim基因序列 ,设计并合成了对应于该基因同源框区的两条反义寡核苷酸链 ,用电脉冲方法将其导入文昌鱼受精卵。结果表明 :反义寡核苷酸与随机序列寡核苷酸都不影响胚胎细胞分裂 ,而反义寡核苷酸能抑制胚胎细胞Bblim基因的表达。还发现只存在于导入反义寡核苷酸的幼体中的两种畸形———一是在幼体的腹侧近咽部有一圆形突起的结构 ;另一是在幼体色素与尾鳍之间约二分之一处的腹侧有一距状突起。这两种畸形均发生于文昌鱼幼体腹侧的近体表部位 。

文昌鱼胚胎整装荧光原位杂交技术的建立

文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)是进化发育生物学研究的重要模式生物,文昌鱼胚胎整装荧光原位杂交(WFISH,whole-mounted fluorescent in situ hybridization)技术将有助于鉴定文昌鱼胚胎发育过程中具有重要调控作用的功能基因。报告了文昌鱼胚胎整装荧光原位杂交技术,用以快速灵敏分析特定基因在文昌鱼胚胎发育过程中的时空表达图式。用体外转录合成的地高辛标记文昌鱼FGFR基因的反义RNA探针,检测到FGFR在文昌鱼原肠胚中表达于发生内陷的中内胚层细胞中,而预定发育为外胚层的细胞不表达FGFR。

文昌鱼鳃骨条的透射电镜观察

应用透射电子显微镜观察了文昌鱼 (BranchiostomabelcheritsingtauenseTchangetKoo)鳃骨条的结构。发现其鳃条骨条横切面的外部 ,有时可见两个相连的细胞密集区 ,细胞排列紧密 ,核质比大。除此之外的基质区 ,由平均直径 2 8 3nm的粗纤维构成。在该区域的外围 ,粗纤维与边缘平行排列成薄层。在内部 ,粗纤维交错排列。而鳃条骨条横切面内部及整个舌条骨条则是由平均直径分别为 13 8nm和 13 9nm的细纤维构成的。细纤维排列规则 ,与鳃骨条的长轴平行。且彼此间由横向的细丝状交联连接成为直角的方格结构。两种纤维在形态上与胶原纤维不同。显示文昌鱼的鳃骨条是一种特殊的、非胶原为基质的支持组织。这使得继无颌类七鳃鳗和盲鳗中已发现的至少 4种非胶原为基质的软骨家族又增添了新的成员 ,且文昌鱼鳃骨条与七鳃鳗和盲鳗的非胶原为基质的软骨结构都不相同 ,提示文昌鱼与无颌类可能有着长期独立的进化历史。

青岛文昌鱼肌球蛋白重链基因片段的重组表达

将青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)肌球蛋白重链基因片段亚克隆到pET-30a质粒,构建出重组表达载体并转化入大肠杆菌Escherichia coliBL21中。经SDS-PAGE和Western杂交检测表明,在IPTG诱导下含有重组载体的菌株可表达分子质量约30 ku的融合蛋白。诱导条件优化实验结果显示,该菌株经0.2 mmol/L IPTG诱导1 h就可大量表达此蛋白。可溶性实验确认该重组蛋白是可溶性蛋白。本研究为文昌鱼肌球蛋白重链特异性抗体的制备奠定了基础。

文昌鱼在中国的人工繁育

以青岛文昌鱼和厦门文昌鱼为例,对近20年来我国学者在文昌鱼的生殖生理、胚胎发育和幼虫培育等方面的研究成果进行了概述,认为文昌鱼在中国全人工繁育是可行的.

河北昌黎海域大型底栖动物群落特征及青岛文昌鱼资源现状

于2017年春季(5月)和夏季(8月)对河北昌黎黄金海岸国家级自然保护区海域大型底栖动物群落特征及青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)资源现状进行调查。结果表明,春夏两季分别鉴定出大型底栖动物56和50种,种类组成皆以环节动物为主;大型底栖动物平均栖息密度为87.11 m^-2,平均生物量为11.13 g·m^-2;青岛文昌鱼平均栖息密度为31.36 m^-2,平均生物量为1.44 g·m^-2,体长为0.50~4.45 cm,Ⅱ、Ⅲ龄青岛文昌鱼占优势地位,体重为0.3~109.4 mg,优势体重组为>20~40和0~20 mg,昌黎海域青岛文昌鱼个体偏小,与历史资料对比发现,青岛文昌鱼资源量正在逐年减少。春夏两季大型底栖动物多样性指数变化趋势相似,Shannon-Wiener多样性指数平均值显示该海域大型底栖动物生境一般;采用Bray-Curtis相似性系数聚类分析和多维排列尺度(MDS)分析相结合的方法研究春夏季大型底栖动物群落结构,结果表明春季可分为5个群组,夏季可分为2个群组,群组组成差异较大。

昌黎海域青岛文昌鱼栖息地评价及其分布特征

利用2021年调查数据,对昌黎海域青岛文昌鱼栖息地环境及其分布特征开展综合研究。研究结果表明,保护区海域水质、沉积物质量状况良好。青岛文昌鱼主要分布在中砂至细砂类型的底质中,主要粒组为0.125~0.500 mm,平均栖息密度为70.4 ind./m2,平均生物量为4.71 g/m2,Ⅲ龄青岛文昌鱼占优势地位。青岛文昌鱼密度与COD和浮游植物密度呈显著相关(p<0.05),与浮游植物种类数呈极显著相关(p<0.01);生物量与COD、沉积物铅和浮游植物种类数呈显著相关(p<0.05)。

青岛文昌鱼过氧化氢酶基因的克隆及生物信息学分析

过氧化氢酶(catalase,CAT)是一类广泛存在于动物、植物和微生物体内的末端氧化酶,是生物体内抗氧化酶体系的重要成员,因此本研究旨在克隆文昌鱼CAT基因并对其进行生物信息学分析。本研究以青岛文昌鱼(Branchiostoma belcheri tsingtauense)为材料,用RACE技术首次克隆了其CAT全长cDNA的基因序列,命名为AmphiCAT(GenBank登录号:KU058636);该序列总长为2640 bp,开放阅读框(open reading frame,ORF)为1533 bp,编码510个氨基酸,含有一个长为19个氨基酸序列的潜在活性位点和一个长为9个氨基酸序列的血红素配体信号,总分子量在线预测约为57.85 kD;经生物软件分析确定该蛋白质无信号肽序列,预测该蛋白质为非分泌性蛋白,属于单功能CAT的clade3分支;该基因的分子进化树表明青岛文昌鱼CAT同软体动物的亲缘关系较近。