油菜花粉多糖对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α产生及其mRNA表达的影响

【目的】研究油菜花粉多糖(LBPP)对荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α的诱生及其mRNA表达的影响。【方法】通过动物抑制性肿瘤法制备肿瘤模型,采用双抗体夹心ELISA法检测IL-2、TNF-α含量,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测IL-2、TNF-α mRNA的表达。【结果】LBPP有明显抗肿瘤作用,200mg·kg-1高剂量组抑瘤率可达51.26%,明显优于环磷酰胺46.22%;LBPP可显著促进荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α分泌(P<0.01),提高荷瘤鼠脾细胞IL-2、TNF-α mRNA的表达(P<0.01),高剂量组提高率分别达56.37%、105.24%、1364%和1289%。【结论】LBPP通过提高机体IL-2、TNF-α mRNA的表达而发挥抗肿瘤作用。

甘蓝型油菜polCMS微粉控制及遗传改良研究进展

目前生产上大量应用的甘蓝型油菜polCMS普遍存在育性不稳定、容易产生微粉的现象,对其研究和应用造成一定的影响。本文介绍了甘蓝型油菜polCMS的应用现状、存在的问题及解决方法,对其在今后的研究方向和发展前景进行了探讨。

蜂花粉对小鼠体内外脂质过氧化的影响

本文观察了蜂花粉及其醇提取物对小鼠体内外脂质过氧化的影响。结果表明,蜂花粉醇提物在体外能抑制正常小鼠肝匀浆过氧化脂质生成,并能对抗半胱氨酸和硫酸亚铁所致过氧化脂质生成增加。蜂花粉口服对老龄小鼠及由于四氧嘧啶与饲过氧化玉米油所致血清和肝组织过氧化脂质增加有明显的抑制作用。提示蜂花粉可能有益于维持体内自由基的动态平衡,保护机体免受过氧化脂质的侵害。

油菜基因BnWRI1的克隆及RNAi对种子含油量的影响

【目的】阐明油菜基因BnWRI1对其种子含油量的影响。【方法】采用RT-PCR技术从油菜中克隆到BnWRI1基因编码区内384bp的片段,将该片段正反向插入干扰载体pGΩ4ARi中,构建成RNAi表达载体pGΩ4ARi-WRI1,通过花粉管通道法将其转入油菜受体品种中双9号中,【结果】获得3棵转基因植株,PCR扩增和基因组Southern杂交证实外源片段已整合在受体油菜基因组中。利用半定量RT-PCR和改进的索氏提取法分别检测转基因T1代植株的BnWRI1基因表达量和种子含油量,结果表明:与非转基因对照相比,转基因植株的BnWRI1基因均受抑制,种子含油量有所降低。【结论】采用RNAi技术可使油菜内源基因BnWRI1沉默,表明油菜基因BnWRI1能有效调控种子含油量。

油菜蜂花粉黄酮体外降糖活性研究

以总黄酮含量为考察指标,利用溶剂萃取和大孔树脂对油菜蜂花粉乙醇提取物进行分离纯化,富集黄酮,然后对不同极性组分进行抑制α-葡萄糖苷酶实验,并利用红外光谱(IR)和液-质联用(LC-MS)对体外降糖活性最高的组分进行化学成分分析。结果表明,黄酮类物质在抑制α-葡萄糖苷酶活性中起主要作用;AB-8大孔树脂纯化得到的PEFS-3组分总黄酮含量为68.77%,IC50为72.16μg/m L,远小于阿卡波糖的IC50(1124.86μg/m L),表明其抑制效果强于阿卡波糖;PEFS-3组分中共鉴定出5种主要物质,其中4种为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3,4’-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷,第5种推断为亥茅酚苷或黄烷醇,具体结果还需进一步研究。

甘蓝型油菜花粉超低温保存及其花粉活力的研究

研究超低温方法保存油菜花粉过程中的预冻和解冻处理方式对油菜花粉的形态、大小及其活力的影响。结果表明:采用0℃(12h)→-4℃(12h)→-20℃(12h)→-80℃(12h)变温预冻处理和用-80℃(1h)→-20℃(1h)→4℃(1h)逐步解冻后对油菜花粉形态大小和活力影响最小。而经过25℃室温解冻法和42℃快速解冻法处理后油菜花粉出现破裂,破裂率分别达到7.6%和9.1%。同时液氮保存油菜花粉的时间长短对花粉的大小及活力影响不大。

利用不同液体介质对甘蓝型油菜CMS辅助授粉的研究

利用不同浓度的食用蔗糖和食用盐液体介质及制备的介质花粉,在封闭、模拟制种、开放授粉条件下研究对甘蓝型油菜CMS陕2A、陕3A的辅助授粉效果。结果表明:低浓度糖介质能够在一定程度上保持花粉活力,改善柱头环境,有利于外源花粉附着萌发。低浓度糖介质花粉辅助授粉封闭处理的平均结籽数为1.37～2.13粒/朵,有效角粒数为3.80～4.88粒/角;模拟制种、开放授粉处理均能显著和极显著地增加CMS的结实,较大幅度地提高制种产量,以0.5%糖介质花粉对模拟制种田作模拟制种授粉,可使陕2A、陕3A平均结籽数分别提高2.91粒/朵和2.70粒/朵,增产10.35%和11.52%;而4.0%糖介质和1.0%盐介质对模拟制种田辅助授粉和开放授粉处理却表现显著的负效应。

甘蓝型油菜NCa细胞质雄性不育系统花药败育前期的基因差异表达

采用cDNA-AFLP技术研究了甘蓝型油菜NCa不育系、保持系和可育F1花药败育前期的基因差异表达谱。用224对引物对不育系、保持系及育性恢复F13个材料的cDNA进行AFLP分析。回收、克隆可能与花药育性有关的差异条带、筛除假阳性,获得41条阳性差异条带(TDFs)。经测序、同源比对、功能预测,归并为35个非重复的TDFs。大多数TDFs在甘蓝型油菜中属首次报道。将已知功能的28个TDFs按其推测功能分为2大类10小类,82%的TDFs与细胞形态建成和降解、蛋白质合成、加工和转运、能量代谢、信号传导有关;基本涵盖花药发育相关的关键代谢过程。对其中7个TDFs基因进行了RT-PCR分析。结果表明,果胶甲酯酶基因和氨基酸通透酶基因都在不育系花蕾中大量表达,果胶甲酯酶基因在不育系叶片、保持系的花蕾、叶片中都没有检测到;而氨基酸通透酶基因有微量表达。驱动蛋白和乙醛脱氢酶主要在保持系花蕾中大量表达,而在不育系花蕾、叶片以及保持系叶片中都只有微量表达。玉米黄素环氧化酶和单脱氧抗坏血酸还原酶则在保持系花蕾、叶片和不育系叶片中大量表达,而在不育系花蕾中微量表达。花粉油体蛋白在不育系和保持系的花蕾中都有表达,不过保持系花蕾中的表达量约2倍于不育系花蕾;但是在两者的叶片组织中都没有检测到。本试验获得的差异表达基因对于了解油菜花药育性形成的调控机制提供了重要的分子信息。

油菜生态不育系H50S花药败育的细胞学观察

H50S是西北农林科技大学油菜生物技术育种课题组在从上海引进的油菜品种汇油50中发现的一种生态雄性不育材料,本研究采用压片和石蜡切片两种方法对该材料小孢子发育进行了观察研究。压片结果表明,H50S花药败育发生于单核早期,败育的花粉粒核已经降解,单核晚期的核质均降解且三边加厚不明显。另外在同一不育花药的雄蕊中,花粉发育进程不同步,分裂相从未分裂的花粉母细胞、中期Ⅰ和四分体都可同时观察到;切片结果证实了压片中小孢子的败育特征,其主要特点是:减数分裂正常,能形成正常的四分体,但小孢子脱离胼胝质被释放出来以后开始败育,败育小孢子无液泡,核所占区域较大,而且不明显,处于解体状态;成熟期,花粉粒壁可以发育,绒毡层消失缓慢,中层消失,败育的花粉粒只剩下外壳。

超声-微波协同萃取法提取油菜蜂花粉中黄酮类物质

采用超声-微波协同萃取法提取油菜蜂花粉中黄酮类物质,以总黄酮提取率为指标,研究分析乙醇体积分数、提取时间、料液比、微波功率4个因素对提取效果的影响,并利用正交实验优化提取工艺,确定最佳条件为乙醇体积分数90%,液料比(mL∶g)30∶1,微波功率260 W,提取时间180 s。此条件下,总黄酮提取率达3.36%。与热回流、超声法、微波法相比,超声-微波协同萃取法提取效率明显提高,同时具有节能,安全的优点。液质分析结果表明,超声-微波协同萃取得到的油菜蜂花粉黄酮类物质主要有4种,分别为槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3,4'-双-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷。

甘蓝型油菜花粉离体培养

通过对甘蓝型油菜花粉发育阶段和活力的检测确定花粉发育的时期,分离出单核晚期花粉进行离体培养。结果表明,(1)筛选出适合油菜小孢子花粉离体培养的液体培养基为T1+怀特维生素(White’s vitamins)+2%椰子汁+0.5 mol/L麦芽糖,在此培养基上花粉的成熟率可达25.1%,萌发率达6.3%。(2)筛选出适合成熟花粉离体萌发液体培养基为0.6 mol/L麦芽糖+1.6 mmol/L硼酸+2.9 mmol/L硝酸钙+29.6μmol/L VB1,在此培养基上,自然成熟花粉的萌发率可达75.2%。将离体培养成熟的花粉培养在萌发培养基,萌发的花粉占成熟花粉的66.3%。

甘蓝型油菜CMS微粉活力研究及其对杂交制种纯度的影响

通过对微粉和正常花粉在不同和同一雌蕊上的结实力比较和结实竞争研究，表明微粉虽能够授粉结实，但活力低、萌发慢，持续时间短，受精结实能力差，与正常花粉的竞争力弱，授微粉后间隔３～７２ ｈ，再授恢复系花粉，其结实表现仍可达到或超过单独授恢复系花粉的结实率，最高的还超过了只授恢复系花粉结实率的９．５７％ ；授微粉后间隔０～４８ ｈ 再授恢复系花粉仍可获得７０．３５％ ～９１．００％ 的异交率，说明微粉对油菜杂交制种过程的杂种纯度影响较小。

甘蓝型低芥酸油菜花粉萌发试验

油菜花粉萌发率与培养基中蔗糖和硼酸浓度均呈一元二次函数关系。花粉萌发率最高的蔗糖和硼酸浓度分别是12.5％和131ppm,土壤硼不足(含水溶性硼0.2ppm)时萌发率为13.1％,土壤硼适量(硼0.7ppm)时为46.2％,土壤硼过量(硼1.5ppm)时为34.8％,与硼不足的相比,差异达极显著和显著水平。

从低温贮藏的玉米花粉中分离生活精细胞

从低温（—２０℃）贮藏的玉米花粉中分离出的生活精细胞，其产量随贮藏时间的延长而降低。但是，从－２０℃贮藏２４ｈ以内的花粉，仍可分离到相当数量的生活精细胞。以新鲜花粉作对照，从贮藏８ｈ的花粉分离生活精细胞，相对产量可达６４％

甘蓝型油菜莫利CMS (Moricandia CMS)的种质创制

莫利CMS是一种重要的细胞质雄性不育系统,在油菜杂种优势利用上具有重要应用价值,目前在印度的芥菜型油菜中得到广泛应用。为了将莫利CMS引入甘蓝型油菜,本研究通过甘蓝型油菜与芥菜型油菜莫利CMS材料进行杂交、多代回交自交获得莫利CMS的甘蓝型油菜材料。根据莫利不育胞质相关分子标记orf 108-O检测、花粉活力鉴定及自交结实情况进行选择,最终选出连续2代花粉活力低于3%且自交不结实的CGZ 909作为候选不育系材料;连续2代花粉活力大于90%且自交结实正常的CGZ 924、CGZ 925作为候选恢复系材料。候选恢复系材料给候选不育系材料授粉所得F_(1)代自交结实正常,实现了莫利CMS在甘蓝型油菜中的三系配套。本研究为下一步基于莫利CMS的甘蓝型油菜杂种优势利用奠定了基础。

甘蓝型油菜花粉粒ARTP诱变及后代表型鉴定

为获得高含油量油菜的变异株系,开展了甘蓝型油菜(Brassica napus L.)花粉粒ARTP诱变试验。以甘蓝型油菜Ogu-CMS恢复系16C花粉为诱变材料,采用ARTP诱变技术分别辐照0、20、30、40 min,再将诱变后的花粉授于同一群体中自然产生的不育单株16CS。调查不同ARTP辐照时间下的诱变花粉授粉当代单角粒数及后代子粒发芽势、发芽率、不育株率和含油量的变化情况。结果表明,ARTP辐照甘蓝型油菜花粉30 min以上,能显著降低诱变花粉授粉当代单角粒数及后代M0代子粒的发芽势和发芽率,提升M0代植株的不育株率,提升M1代子粒的含油量,获得了含油量高达52.61%突变株系ARTP30-315。初步表明利用ARTP-P仪开展油菜花粉粒诱变是有效的,较为适宜的ARTP辐照时间为30~40 min。为生产上应用ARTP-P仪开展甘蓝型油菜花粉粒诱变探索出一个较为适宜的参数体系,为开展油菜种质创新提供了新的方法与思路。

甘蓝型油菜细胞质雄性不育系419A分期播种育性变化的初步研究

通过两年分期播种试验,对甘蓝型油菜细胞质雄性不育系419A的育性变化进行了初步研究。结果表明,不育系419A属于高温不育型,育性表现年度间差异较小,比较稳定。在2月27日至3月13日,不育系419A主花序出现少量花朵带微粉。微量花粉花朵的出现同时受控于孕蕾期和开花期的温度。日平均气温低于4℃,对不育系419A花蕾的发育和花的育性变化有很大影响。10月17日播种,不育系419A的净不育花率为97.5％。10月24日、10月31日和11月7日播种,不育系419A的净不育花率均达100％。考虑到对产量和育性的要求,在成都地区利用不育系419A进行杂交制种的播种期以10月17～23日为宜,繁殖不育系419A的播种期以10月24～30日为宜。

三种甘蓝型油菜CMS花药发育研究

以细胞质雄性不育系301A、212A与陕2A为材料,保持系中双2号作为对照,采用常规的石蜡组织切片技术,对三种甘蓝型细胞质雄性不育系油菜败育时期和败育特点进行细胞学研究,结果表明,不育系301A、212A与陕2A败育均发生在孢原细胞时期,在造孢细胞时期不能正常的形成药室,属于无花粉囊败育型;花粉活力分别为:81.7%、95.6%、100%;微粉率分别为:42.8%、42.8%、14.3%。新发现的细胞质雄性不育材料301A与212A、陕2A花药败育时期相同,败育特点相似;不育系301A的花粉活力和212A与陕2A比较起来差异较大、较低;不育系陕2A微粉率最低。

油菜雌雄性器官活力的比较研究

对秦油２号（杂交油菜）和中油８２１（常规油菜）花粉活力和雌蕊活力作了比较研究，结果表明：秦油２号的花粉萌发及花粉管的延伸速度快，完成受精所需时间短，受精结实率高；雌蕊活力显著高于中油８２１，表现在其柱头活力高，活力持续时间长；子房、胚珠活力和受精力等也均高于中油８２１。试验证明，秦油２号（杂交油菜）生殖活力显著高于中油８２１（常规油菜）。

花期低温对甘蓝型油菜叶片生理及雌雄蕊发育的影响

为探讨花期低温对甘蓝型油菜生长发育及生殖器官发育的影响,以甘蓝型油菜GZ恢(抗冬季寒冷强)和10B(抗冬季寒冷弱)为材料,于初花期在人工气候室进行低温(白天14 h,12℃;夜晚10 h,2℃)胁迫,设置5个处理时间:1,2,3,4,5 d,正常生长环境(白天14 h,22℃;夜晚10 h,18℃)为对照,测定了低温胁迫下植株苔茎叶和下部叶生理指标以及不同大小花蕾开放后的花粉活力和柱头可授性。结果表明:两材料在低温处理后植株叶片均表现轻微萎蔫,所有处理植株无明显受损;低温处理后叶片各生理指标变化比较复杂,以过氧化物酶(POD)敏感,多表现为显著升高,下部叶较苔茎叶升高更多,10B较GZ恢升高幅度大。渗透调节物质以可溶性糖(SS)含量变化明显,GZ恢显著增加。丙二醛(MDA)含量显著增加,10B较GZ恢升高更多,下部叶和苔茎叶两材料表现不尽一致。低温处理对两材料大于6.0 mm的花蕾花粉活力受影响均很小。小于3.0 mm的花蕾,胁迫4 d以上后期发育停止最终死亡,胁迫2~3 d花粉活力显著下降,且花蕾越小,花粉活力随处理时间增长降低越多。小于6.0 mm的各级花蕾受低温胁迫后,GZ恢花粉活力多高于10B,以3.0~6.0 mm的花蕾差异明显,因此,认为3.0~6.0 mm花蕾可作为鉴定不同品种花期耐低温指标。柱头可授性表现与花粉活力趋势一致,大于3.0 mm的花蕾低温处理3 d以内柱头可授性不受影响,处理4 d以上柱头可授性降低;小于3.0 mm的花蕾,低温处理3 d以内柱头可授性不同程度降低。这些结果表明,在植株遭受低温胁迫后,小于3.0 mm的花蕾对低温较为敏感,导致花粉活力和柱头可授性降低,甚至败育。