芜菁酸性多糖体内抗肿瘤活性研究

目的:探究芜菁酸性多糖一组分(BRAP-1)对非小细胞肺癌H226细胞荷瘤小鼠的影响。方法:将60只小鼠分为模型组(0.1 mL/10 g)、阳性药物顺铂组[3 mg/(kg·2 d)]、BRAP-1低剂量组[50 mg/(kg·d)]、BRAP-1中剂量组[100 mg/(kg·d)]和BRAP-1高剂量组[200 mg/(kg·d)]。试验期间观察小鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率、脏器指数;酶联免疫法检测各组小鼠血清中的白细胞介素18(IL-18)、IL-1β和肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;实时荧光定量核酸扩增法(q-PCR)、免疫印迹试验检测IL-18、IL-1β、受体相互作用蛋白1(RIP-1)、RIP3、混合谱系激酶结构域样蛋白(MLKL)基因表达情况。结果:与模型组相比较,BRAP-1低、中剂量组抑瘤效果明显(P<0.05),阳性组和BRAP-1高剂量组抑瘤率效果显著(P<0.01);模型组与其他各组相比较,阳性组和BRAP-1高剂量组小鼠血清中IL-1β含量显著增加(P<0.01),IL-18、TNF-ɑ在阳性组中明显降低(P<0.05),BRAP-1各剂量组中显著增加(P<0.01);q-PCR、免疫印迹试验结果显示,与模型组相比IL-1β随给药剂量增加mRNA相对表达量减少(P<0.01),而IL-18、MLKL、RIP1、RIP3的mRNA及蛋白相对表达量增加(P<0.01)。结论:BRAP-1可以通过调节免疫细胞因子水平,上调坏死性凋亡相关蛋白MLKL、RIP1、RIP3抑制肺鳞癌H226细胞体内生长。

芫根多糖的提取及其抗缺氧能力研究

为充分利用芫根资源,采用水提醇沉的方法提取芫根多糖,根据单因素试验和正交试验研究并优化芫根多糖提取工艺,并初步探究芫根多糖对急性缺氧小鼠血清中生化指标的影响。研究结果表明,芫根多糖的最佳提取工艺为料液比1∶20、提取温度100℃、提取时间4 h和提取次数4次。对于低压低氧环境中的小鼠,在给予芫根多糖干预后,小鼠血清中的氧化应激指标水平有所改善,表明芫根多糖具有一定的抗高原缺氧的作用。该研究结果将有助于深入研究芫根多糖的生物活性,为其在医学和保健食品工业等领域的应用提供科学支持。

芜菁中性多糖对PC12细胞氧化损伤保护作用机制的初步研究

以H_(2)O_(2)诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,研究芜菁中性多糖(neutral polysaccharide from Brassica rapa L.,BRNP)对PC12细胞氧化损伤保护及初步作用机制。采用CCK-8法检测细胞存活率;乳酸脱氢酶(LDH)检测H_(2)O_(2)对PC12细胞氧化损伤的保护作用;JC-1法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞线粒体膜电位的影响;Western blot法检测BRNP对H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞Bax、Bcl-2和Caspase-3蛋白表达水平。结果表明,BRNP对PC12细胞无明显细胞毒性;H_(2)O_(2)的造模浓度和时间分别为300μmol/L、4 h;BRNP在一定程度上可减轻H_(2)O_(2)对PC12细胞的氧化损伤;BRNP可降低H_(2)O_(2)对PC12细胞线粒体膜电位的损伤;以不同剂量BRNP干预PC12细胞后,Bax、Caspase-3蛋白表达水平均有显著降低(P<0.05);而Bcl-2蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。综上所述,BRNP能够改善H_(2)O_(2)诱导的PC12细胞氧化应激损伤及保护其细胞功能,其作用机制可能与抑制细胞内LDH生成、提高抗氧化酶活性及其凋亡蛋白表达水平有关。

芜菁中性多糖对A549荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的探究芜菁中性多糖对A549小鼠移植瘤模型肿瘤微环境及凋亡相关蛋白、细胞因子水平的影响。方法实验采用酶联免疫法、HE染色法、免疫组化法,检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3,caspase-3)、白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素12(interleukin-12,IL-12)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)含量及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X protein,Bax)相对表达水平,计算免疫器官指数、抑瘤率。结果芜菁中性多糖中、高剂量组能使A549荷瘤小鼠肿瘤组织caspase-3蛋白含量显著增加(P<0.01);使小鼠血清中IL-2、IL-6、IL-12、TNF-α含量升高(P<0.01);Bcl-2蛋白表达水平降低,Bax蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论芜菁中性多糖对人肺腺癌细胞A549生长具有抑制作用,可提高A549荷瘤小鼠的脾脏指数和胸腺指数,下调Bcl-2蛋白,上调Bax蛋白的表达,减轻荷瘤小鼠脏器病理损伤。

芜菁多糖除蛋白及抑制RAW264.7巨噬细胞焦亡作用研究

目的 考察芜菁多糖两种方法除蛋白效果,并探讨其对RAW264.7巨噬细胞焦亡的抑制作用。方法 采用AB-8大孔吸附树脂法、Savage法去除蛋白,苯酚-硫酸法测定多糖含量,采用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)及三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)建立细胞焦亡模型,细胞毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK8)检测芜菁多糖对RAW264.7细胞增殖率的影响,免疫印迹实验(Western-Blot,WB)检测消皮素D (gasdermin D,GSDMD)相对表达量,酶联免疫吸附测定法检测白细胞介素-18 (interleukin18,IL-18)、IL-1β、肿瘤坏死因子-α (tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-6水平。结果 AB-8大孔吸附树脂除蛋白,多糖保留率为85.9%,蛋白去除率为91.0%;Savage法多糖保留率为77.6%,蛋白去除率为72.8%,精密度、稳定性、重复性和加样回收率的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均小于2.0%。与模型组相比,芜菁多糖各剂量能显著下调GSDMD的表达(P<0.05),减少LPS/ATP诱导的RAW264.7细胞炎性因子IL-18、IL-1β、TNF-α、IL-6的释放(P<0.05)。结论 AB-8大孔吸附树脂法较Savage法,蛋白去除率及多糖保留率更高;芜菁多糖对LPS/ATP诱导的RAW264.7细胞焦亡具有抑制作用,能在一定程度上减轻细胞损伤,这可能与其抑制LPS/ATP诱导焦亡过程中的炎性反应和调控GSDMD蛋白的表达有关。

芜菁多糖提取工艺及清除自由基活性的研究

在单因素实验的基础上,应用响应面法对芜菁多糖的提取工艺进行优化。测定了芜菁多糖清除自由基的活性。结果表明:芜菁多糖的最佳提取工艺为,浸提温度80℃,浸提时间2.5 h,液料比(30∶1)(mL∶g)。此条件下芜菁多糖的得率为8.858%,接近于理论值。芜菁多糖的体外清除自由基活性实验证明,芜菁多糖(WJc)对羟自由基的清除活性较好。

芜菁水溶性多糖的结构分析

采用水提醇沉的方法提取芜菁粗多糖,经酸性乙醇分级和DEAE-52、Sephadex G-100纯化得芜菁多糖WJdp4-b。采用Sepharose CL-4B柱层析、HPLC法检测WJdp4-b的均一性,通过纸层析(PC)、气相色谱(GC)、红外光谱(IR)、核磁共振(NMR)、部分酸水解、高碘酸氧化和Smith降解、甲基化分析等分析方法对WJdp4-b的结构进行解析。结果表明:WJdp4-b为均一性多糖,相对分子质量约为10 840。其单糖组成为鼠李糖(Rha)、阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc),各单糖的摩尔比为1.0∶1.0∶10∶9.0。结构分析表明:WJdp4-b为多分支结构,分子的主体是由Glc构成,连接方式为,Glc以1→3链接构成了WJdp4-b的主链,在Glc的6位处有分支,每17个Glc有12个分支。支链由Ara以1→4或1→5连接,Man的1→3、1→6连接构成,Rha和Glc构成了末端。

藏药延根中粗多糖提取和含量分析

采用水提醇沉的方法提取了藏药延根中的粗多糖,并用酚硫酸法测定了样品中粗多糖的含量,结果发现延根中粗多糖的收率为16.16%,其中总糖含量为67.90%.

新疆芜菁酸性多糖分离纯化、抗氧化活性研究及红外表征

目的 检测分离纯化的芜菁酸性多糖(Brassica rapaL.acidic polysaccharide,BRAP)的含量和纯度,并对其进行抗氧化能力检测和红外表征。方法 (1)经阴离子交换柱DEAE-650M、HW-55F色谱柱以及Sephacryl S-300色谱柱洗脱分离纯化芜菁多糖;(2)采取紫外-可见分光光度法及苯酚-硫酸法测定芜菁酸性多糖的含量;(3)经由测定芜菁酸性多糖羟基自由基(·OH)清除能力,1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基(·DPPH)清除能力、金属Cu^(2+)还原能力来评价其抗氧化活性,并与VC抗氧化能力进行对比;(4)应用红外光谱分析芜菁酸性多糖的化学键或官能团信息,通过高效凝胶渗透色谱法对芜菁酸性多糖的均一性分析。结果 芜菁酸性多糖的含量为55.47%;芜菁酸性多糖对·DPPH和·OH有一定清除能力,对金属Cu^(2+)也有还原能力,但均比VC弱,红外光谱分析显示,芜菁酸性多糖中有多羟基醛糖的特征吸收峰以及与抗氧化活性相关的羟基。高效凝胶渗透色谱图显示芜菁酸性多糖为高纯度多糖。结论 新疆芜菁中有含量较为丰富且纯度较高的酸性多糖组分,且该成分具有较好的抗氧化活性。

新疆芜菁多糖降血糖作用的研究

【目的】检测新疆芜菁多糖的组分结构与对血糖的作用。【方法】采用常规的水提法从芜菁中提取粗多糖,并用Sevag法对其进行脱蛋白,再通过回流、透析等步骤把粗多糖纯化获得芜菁精制多糖。用芜菁精制多糖进行小白鼠血糖实验。对芜菁精制多糖进行DEAE-52离子交换柱层析纯化,对第一个洗脱组分BRPS1再进行Sephadex G-200凝胶柱层析纯度鉴定。此外,用红外光谱法分析BRPS1,并且对离子交换柱层析的7种洗脱组分分别进行了GC-MS分析。【结果】当芜菁精制多糖剂量为400 mg/kg体重时,3 d后的受试小鼠血糖值下降差异显著(P<0.05);6和9 d后的血糖值下降差异极显著(分别是P<0.01和P<0.001);通过DEAE-52离子交换柱层析共分离出7种组分。对第一个洗脱组分BRPS1的Sephadex G-200凝胶柱层析的结果表明,BRPS1是单一的多糖组分;其红外图谱结果表明BRPS1具有多糖的一般结构。对7种洗脱组分的GC-MS分析表明芜菁精制多糖含有6种单糖。【结论】芜菁多糖具有显著的降血糖效果;作为芜菁多糖主要成分的BRPS1为单纯的多糖,具有多糖的一般结构。

芜菁精制多糖的提取、鉴别及含量测定

目的提取芜菁精制多糖并且对分离得到的精制多糖进行鉴别与含量测定。方法采用水提醇沉法提取粗多糖后,采用DEAE-650纤维素柱对芜菁粗多糖洗脱,从而得到芜菁精制多糖;对分离得到的精制多糖进行理化鉴别;采用紫外-可见分光光度法测定芜菁精制多糖含量。结果分离得到的精制多糖由Molish反应的结果可知组分为糖类物质;由斐林反应结果可知多糖组分中含具有还原性的基团;由三氯化铁反应结果可知多糖组分中不含酚类化合物,且醋酐-浓硫酸反应结果可知不含皂苷类化合物;精制多糖的平均含量为581mg/g。结论该提取工艺经济,简单,稳定,可作为芜菁精制多糖的提取分离方法,而且得到的精制多糖含量高,为后续进一步利用提供基础。

恰玛古多糖的抗氧化功能及其片剂的制备工艺

目的研究恰玛古多糖的抗氧化能力和片剂制备的加工工艺。方法使用水提醇沉法提取恰玛古粗多糖,并用Savege法除蛋白,活性炭脱色精制多糖。用提取的恰玛古多糖进行2组抗氧化实验,并使用单因素法筛选制备恰玛古多糖片剂所需的粘合剂、填充剂、崩解剂和润滑剂来确定最佳成型工艺。结果恰玛古多糖具有较好的抗氧化活性;80%乙醇做粘合剂、乳糖作为填充剂、5%用量的CMS-Na作为崩解剂和硬脂酸镁作为润滑剂为恰玛古多糖片剂的最佳成型工艺。结论恰玛古多糖具有较好的抗氧化活性,将多糖制成片剂为进一步利用这一传统维吾尔药食两用药物、开发天然的免疫调节剂奠定基础。

维药恰麻古儿多糖提取工艺研究及含量测定

目的建立恰麻古儿多糖的最佳提取工艺并测定其含量。方法采用正交实验法L9(34)筛选提取条件,用硫酸-蒽酮法对其含量进行测定。结果恰麻古儿中多糖的平均含量为11.53%,平均回收率为99.82%,RSD为2.53%。结论优选得到的工艺经济,简单,稳定,可行,该法可作为恰麻古儿中多糖的含量测定方法。

新疆阿克苏恰麻古多糖的提取及含量测定

文章研究恰麻古中多糖的含量。采用紫外-可见分光光度法测定恰麻古多糖的含量,以葡萄糖为对照品,以苯酚-浓硫酸为显色剂,在486nm处测定样品溶液的吸光度。标准曲线为A=8.445x+0.0381,r=0.9998,回收率为101.7%,RSD=2.0%,恰麻古多糖的含量为9.01%。本方法具有操作简单,灵敏度高,可作为恰麻古多糖的含量测定方法。

苯酚-硫酸法测定恰麻古儿中多糖的含量

目的建立苯酚-硫酸法测定红、白皮2种恰麻古儿中多糖的含量。方法采用水提醇沉法分离纯化红、白皮2种恰麻古儿多糖,苯酚-硫酸法测定红、白皮2种恰麻古儿多糖的含量。结果在0.174 8～0.911 2 mg/ml内,浓度与吸收度呈良好线性。回归方程:A=4.602 5C-0.009 3,r=0.999 8。白、红皮2种恰麻古儿多糖的平均回收率分别为99.1%(RSD=2.5%),99.4%(RSD=2.9%),含量分别为10.21%,10.07%。结论本法简便、快速、准确,适用于测定恰麻姑儿中多糖的含量。

芜菁中性多糖降血糖作用研究的初步探讨

目的初步探讨芜菁中性多糖对糖尿病大鼠的降血糖作用。方法选取造模成功的SD大鼠,随机分为6组,分别为空白组、模型组、阳性对照组(0.20 g/kg)以及芜菁中性多糖高剂量组(0.20 g/kg)、中剂量组(0.10 g/kg)、低剂量组(0.05 g/kg)。连续灌胃4周,空白组喂养普通饲料,其余组喂养高脂高糖饲料,每周测一次体重与空腹血糖,测定各组大鼠口服葡萄糖0、30、60、120 min后的血糖值,计算曲线下面积(area under curve,AUC),测定肝糖原含量。结果芜菁中性多糖高、中、低剂量可明显改善STZ与高糖饲料所致糖尿病大鼠的糖代谢功能(P<0.05或P<0.01),显著降低模型大鼠血糖(P<0.05),多饮多尿症状明显改善,可显著增加大鼠的糖耐量(oral glucose tolemnce,OGT)(P<0.01)。结论芜菁中性多糖对糖尿病模型有降血糖作用,高剂量组降血糖效果略强于中、低剂量组。

新疆芜菁多糖含量测定及提取工艺优化

目的探究芜菁水溶性成分多糖的最佳提取工艺及含量测定。方法通过正交实验设计来选择芜菁水溶性成分多糖的最佳水提工艺;以葡萄糖为对照品,使用紫外-分光光度法测定其含量。结果水提的最佳提取工艺:回流时间为2 h,回流温度为90℃,回流次数为3次,料液比为1:30 g/mL。新疆芜菁多糖在0.02~0.10 mg/mL范围内呈良好线性关系,回归方程为Y=0.819X+0.0029, r=0.9995,平均回收率为98.3%,相对标准偏差为2.0%,并测得多糖总含量为8.99%。结论该提取方法方便、合理,满足多糖的分析方法要求;紫外-分光光度法简便易行,精密度、稳定性、重现性均良好。

新疆芜菁中均一多糖的分离纯化及结构分析

目的测定分离纯化后的芜菁多糖均一组分BP1和BP2含量及纯度,并对其进行结构分析。方法经DEAE-纤维素52和sephadex-G150柱层析分离纯化BP1和BP2,采用蒽酮-硫酸法在紫外-可见分光光度计进行纯度测定;采用比旋光度法、气相色谱法、傅里叶红外光谱法、核磁共振法等方法进行结构分析。结果BP1和BP2在分离得到的7种多糖组分中含量较高,纯度测定结果中在260 nm和280 nm处未见到蛋白质和核酸的吸收峰。BP1组分相对分子质量为110662,[α]为+18.83;BP2组分相对分子量为37844,[α]为+12.00。BP1、BP2均由阿拉伯糖(Ara)、甘露糖(Man)、葡萄糖(Glc)和半乳糖(Gal)组成,其摩尔比分别为为1∶2.90∶16.48∶1.52和1.24∶2.03∶15.24∶1。BP1主链由α-D-Man-(1→,→6)α-D-Glc-(1→跟→2,6和1→连接的β-D-Gal组成,α-D-Man-(1→,→6)α-D-Glc-(1→组成支链;BP2主链由→6)α-D-Ara-(1→,→6)α-D-Man-(1→和→6,1→)连接的β-D-Glc组成,→6和1→)连接的β-D-Glc组成支链。结论本研究初步成功推测出多糖均一组分BP1、BP2的结构特征并给后期芜菁多糖的结构鉴定提供了可靠的理论基础。

恰玛古多糖提取工艺及药理活性研究进展

恰玛古是维吾尔族传统的药食两用植物,主要含有多糖、脂肪酸类、黄酮等化合物,而恰玛古多糖是恰玛古的主要活性成分。文章通过查阅国内外相关文献,对恰玛古多糖的提取工艺、成分组成及药理活性进行系统的归纳,结果显示恰玛古多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖5种单糖组成;在药理活性方面,其具有抗氧化、抗疲劳、抗肿瘤、降血糖、抗炎和免疫调节等作用,具有广泛的应用价值和开发前景。文章将对其应用前景进行讨论与展望,为合理开发恰玛古多糖医疗保健产品奠定基础,为综合利用恰玛古多糖资源提供参考依据。

响应面法优化新疆芜菁多糖提取工艺及体外抗氧化活性研究

在单因素实验结果上,采用响应面法(RSM)的Box-Behnken design(BBD)实验对新疆芜菁多糖的提取工艺进行优化,并利用DPPH自由基清除能力和还原力评价其体外抗氧化能力。结果表明:最优的提取条件为提取温度93℃,液料比为75 m L/g,提取时间4.3 h,提取次数3次,在该最优提取条件下进行验证实验,测得的新疆芜菁多糖得率为23.72%±0.33%。此外,体外抗氧化实验表明:新疆芜菁多糖的DPPH自由基清除能力和还原力具有量效依存关系,其在两种体系中的EC50值分别是8.55和2.25 mg/m L,表明新疆芜菁多糖具有较强的体外抗氧化能力,可以作为天然抗氧化剂应用于功能食品或者制药工业。