脂多糖抑制海马神经前体细胞增殖

目的探讨脂多糖(LPS)对大鼠海马齿状回(DG)的神经发生的影响及机制。方法大鼠腹腔注射LPS(1 mg/ml)后,用免疫组织化学方法检测海马DG的颗粒下层5溴脱氧尿嘧啶(BrdU)的阳性细胞和诱发的钙接头蛋白分子Iba1蛋白的表达;用免疫荧光双标的方法检测BrdU和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、双皮质醇(DCX)的共表达;新生大鼠海马分离培养神经干细胞,采用免疫细胞法检测神经上皮干细胞蛋白(Nestin)的表达,检测LPS对神经前体细胞分化的影响和LPS受体Toll样受体(TLR)4的表达。结果LPS能使青少年雄性大鼠发育迟缓,体重增长延迟;急性抑制成年大鼠DG区的神经发生。结论LPS可能通过激活TLR4途径抑制神经前体细胞的增殖。

柔肝通络汤对MCAO大鼠内源性干细胞表达的影响

目的观察柔肝通络汤对缺血再灌注脑损伤大鼠内源性神经干细胞增殖分化表达的影响。方法采用改良Longa法制作大鼠大脑中动脉堵塞(MCAO型)所致缺血再灌注脑损伤模型;将120只SD雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组(蒸馏水灌胃)和柔肝通络汤组(柔肝通络汤灌胃),其中按照缺血2 h再灌注6 h、1 d、3 d、7 d、14 d各分为5个亚组,每组6只。动态观察各时间点大鼠神经功能学评分;腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记脑组织内增殖细胞,分别采用BrdU/NeuN神经元核抗原(Neu N)、BrdU/GFAP胶质纤维酸性蛋白(GFAP)标记大脑皮质缺血区域新生神经元和星形胶质细胞,并计算阳性细胞数目。结果与模型组比较,柔肝通络汤组术后3、7、14 d神经功能缺损评分明显降低(P<0.05);柔肝通络汤组BrdU、BrdU/NeuN的阳性细胞数目均明显升高(P<0.05),BrdU阳性细胞数在第7日达到高峰,随后呈下降趋势,BrdU/NeuN在第3~7日增加迅速,第7日后增加缓慢;给药后BrdU/GFAP的阳性细胞数较模型组减少(P<0.05)。结论柔肝通络汤可以促进缺血再灌注脑损伤大鼠内源性神经干细胞增殖,并分化为成熟神经元,同时抑制星形胶质细胞的过度增殖,促进神经再生和修复,改善神经功能。

头针对脑缺血再灌注大鼠神经干细胞增殖分化干预效果的实验研究

目的观察大鼠脑缺血再灌注损伤后反应性星形胶质细胞及神经细胞的活化增殖情况,探讨头针治疗脑缺血的可能机制。方法将Wistar雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、头针组(模型组和头针组再根据缺血再灌注时间的不同,随机分为7d、14d、28d共6个亚组)。采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型,选取顶颞后斜线、顶颞前斜线,进针后接韩氏穴位神经刺激仪。应用神经功能缺损评分(NSS)、免疫荧光双标方法观察各组缺血再灌注后不同时间点缺血侧室管膜下区及海马齿状回5-溴脱氧尿核苷(BrdU)、BrdU+胶质纤维酸性蛋白(GFAP)阳性细胞数值的变化。结果头针组与模型组各时相上的组间比较,第28天头针组的NSS显著低于模型组(P<0.01);与模型对照组比较,头针组于缺血再灌注第7天缺血侧室管膜下区、海马BrdU、BrdU+GFAP阳性细胞数基本相同,第14天、28天时均明显升高。结论大鼠缺血再灌注损伤后可引起其缺血侧室管膜下区、海马星形胶质细胞及神经细胞反应和增殖,而头针可显著增加大脑中动脉阻塞大鼠的神经干细胞增殖分化能力,实现对缺血脑组织保护的目的。

二苯乙烯苷对癫痫大鼠神经细胞增殖的影响及其机制探讨

目的观察二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对癫痫(epilepsy,EP)大鼠神经细胞增殖的影响,并探讨其可能机制。方法将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、二苯乙烯苷干预组。应用立体定向脑室内微量注射的方法建立海人酸(kainic acid,KA)诱导的大鼠癫痫模型。造模前30 min腹腔注射给药,致痫后6 h腹腔内注射TSG溶液(3 mg/kg)剂量,次日开始每日8时给予腹腔注射TSG溶液(3 mg/kg)剂量,每日1次,连续注射,共注射42 d,KA模型组动物及假手术组给予等量生理盐水腹腔内注射。用免疫组织化学技术观察TSG对大鼠海马齿状回颗粒细胞下层BrdU阳性细胞数目及海马齿状回区星形胶质细胞数目增殖的影响。结果癫痫发生后各组海马齿状回区及皮层均存在GFAP免疫反应阳性细胞,经统计分析二苯乙烯苷干预组较模型组GFAP免疫反应阳性星形胶质细胞减少,差异有统计学意义(P<0.01);BrdU免疫组织化学染色研究显示二苯乙烯苷干预组较假手术组及模型组海马齿状回区细胞增殖数目增加(P<0.01),差异有显著统计学意义。结论二苯乙烯苷存在抑制大鼠海马区星形胶质细胞增生,促进增神经细胞增殖的作用。

IGF-1对缺血性脑损伤大鼠脑内神经发生的影响

目的:建立大鼠单侧局灶脑缺血模型,观察胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对局灶脑缺血后的鼠脑神经发生及增殖后细胞生存的影响。方法:用健康雄性SD大鼠建立大脑中动脉阻塞(MCAO)模型,随机分成假手术组,缺血对照组和IGF-1治疗组。各组再按不同的治疗时间分为7d、14d、28d、42d组。免疫组化法观察BrdU、PSA-NCAM的变化,免疫双标法观察BrdU/PSA-NCAM、BrdU/MAP_2和BrdU/GFAP的共同表达变化。结果:BrdU标记细胞和PSA-NCAM标记细胞计数均在缺血后第7d最多,分别是缺血对照组的4.0倍和1.8倍。是假手术组的9.9倍和5.4倍。BrdU和PSA-NCAM双标细胞在缺血发生后双侧SVZ和DG区可以检测到,于第7d计数最多,之后逐渐降低;而BrdU和MAP_2以及BrdU和GFAP双标细胞却从第14d开始逐渐增多,直到第42d。随着BrdU/PSA-NCAM双标阳性表达的逐渐降低,BrdU/MAP_2双标阳性表达逐渐增高,呈现此消彼涨的变化。结论:IGF-1侧脑室注射后,在早期(7d内)诱导了缺血性脑损伤后神经细胞的增殖;在中期(7d-14d)诱导了新生细胞的迁移;在后期(14d后)伴随着迁移的进行新生细胞逐渐发生了分化。

芪棱汤对脑缺血后神经干细胞增殖分化作用的研究

目的从神经干细胞增殖分化的角度探讨益气养阴活血之芪棱汤对SD大鼠脑缺血再灌注后的脑神经保护作用,为其临床推广应用提供实验依据。方法将大鼠随机分为假手术组、模型组、益气活血组(芪棱汤去养阴药组)及益气养阴活血组(芪棱汤组)。采用颈内动脉线栓加环扎法复制大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。在再灌注后不同时间点采用免疫组化法检测巢蛋白(nestin)、5-嗅脱氧尿苷嘧啶(5-BrdU)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达。结果益气活血组与益气养阴活血组nestin、5-BrdU、GFAP表达明显高于模型组,且益气养阴活血组nestin、5-BrdU、GFAP表达明显高于益气活血组。结论芪棱汤能够促进nestin、5-BrdU、GFAP表达,其可能通过刺激内源性神经干细胞增殖分化以弥补脑缺血再灌注后神经元的损失、修复缺损的神经组织、恢复丧失的神经功能;且益气养阴活血法优于益气活血法。

行为学训练对海马梗死大鼠齿状回区神经干细胞分化能力的影响

目的研究行为学训练对海马梗死大鼠齿状回区神经干细胞分化能力的影响。方法将78只SD大鼠随机分为梗死训练组、单纯梗死组及正常对照组。采用光化学法将梗死训练组及单纯梗死组大鼠制成单侧海马梗死模型，梗死训练组大鼠于造模结束后次日给予水迷宫训练，单纯梗死组大鼠于造模结束后正常饲养，未给予水迷宫训练。采用免疫荧光双标法观察各组大鼠不同时间点海马齿状回区溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）、神经元核心抗原（NeuN＇）及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的标记情况。结果正常对照组海马齿状回区可见少量BrdU／NeuN、BrdU／GFAP阳性双标染色；在术后14～35d期间，梗死训练组及单纯梗死组大鼠海马齿状回区BrdU／NeuN、BrdU／GFAP阳性双标染色均较正常对照组显著增强（均P〈0．05）；并且以梗死训练组BrdU／NeuN、BrdU／GFAP的增强幅度较显著，与单纯梗死组比较，组间差异均有统计学意义（均P〈0．05）。结论行为学训练能促进脑缺血大鼠海马神经干细胞向神经元及星形胶质细胞分化，对改善其学习、记忆功能具有重要作用。