人胚胎干细胞在血清和无血清培养体系中的特性比较

目的探讨血清培养体系和无血清培养体系对人胚胎干细胞(hES cells)生长特性的影响。方法将人胚胎干细胞株BG02接种在丝裂霉素C处理灭活的小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,分别在含血清hES完全培养基或无血清培养基中连续培养25～30代。在不同培养体系下比较人胚胎干细胞形态、集落贴壁率;运用BrdU掺入法检测人胚胎干细胞增殖,用细胞计数法计算细胞倍增时间;采用免疫荧光染色检测人胚胎干细胞特异性分子标志的表达;用流式细胞仪检测人胚胎干细胞Oct-4,Nanog阳性的比例;RT-PCR检测成纤维细胞生长因子(FGFs)家族基因的表达。结果在两种培养体系的BG02细胞都具有人胚胎干细胞的形态特征。在含血清培养体系下,BG02细胞集落贴壁率和表达OCT-4,Nanog的阳性细胞明显高于无血清培养体系(P<0.05)。无血清培养体系中,BG02细胞生长速度明显高于含血清培养体系,细胞倍增时间分别为(33.8±4.3)h、(45.9±5.7)h,(P<0.05)。无血清培养体系的BG02细胞高表达FGF2、FGFR2、FGFR4。结论两种不同培养体系中人胚胎干细胞的体外培养特性存在一定的差异,可能与BG02细胞FGFs家族基因激活有关。

红景天对皮肤创伤治疗的作用及机制

目的:探讨红景天促进皮肤创伤愈合的作用及机制。方法:将培养获得的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)分为含药血清高、中、低剂量组,正常血清高、中、低剂量组,采用Brd U掺入法检测HUVEC细胞增殖;40只BALB/c小鼠采用打孔法制作背部皮肤损伤模型,将小鼠随机分为红景天高、中、低剂量组及正常对照组,分别给予高、中、低剂量红景天混悬液及0.5%羧甲基纤维素灌胃,于创伤第3、5、7、9、11及13天测量背部创伤面积,计算愈合率;第13天取皮肤组织做病理切片观察组织愈合情况。结果:4%含药血清对HUVEC的增殖促进作用显著高于同浓度正常血清(P<0.05);红景天灌胃高、中、低剂量组小鼠创面面积与对照组比较明显减小;第7天、9天、11天及13天红景天高、中、低剂量组小鼠创面愈合率高于对照组(P<0.05);组织学检查发现毛细血管及胶原增生与红景天灌胃呈一定剂量依赖关系。结论:红景天可以显著促进皮肤创伤的修复,机制与其促进血管内皮细胞增殖,促使血管新生,改善创伤部位新生肉芽组织血供有关。

碱性成纤维细胞生长因子对成年大鼠嗅黏膜成鞘细胞增殖的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)对于纯化后的嗅黏膜成鞘细胞 (OECs)增殖的促进作用 ,探讨嗅黏膜OECs的增殖特性。 方法 应用差速贴壁和酶消化法对原代培养的嗅黏膜OECs进行纯化 ,用BrdU掺入法观察bFGF对嗅黏膜OECs增殖率的影响。 结果 在没有特定刺激因子作用时 ,嗅黏膜OECs本身有一定的增殖率 ,而加入 10 μg/L的bFGF对嗅黏膜OECs有一定的促增殖作用。 结论 在体外培养条件下 ,bFGF能提高嗅黏膜OECs的增殖率。

血管紧张素Ⅱ2型受体基因转染对肾间质纤维化的防治意义

目的 探讨血管紧张素Ⅱ2型受体(AT2R)基因体外转染人肾间质成纤维细胞(hRIF)后对肾间质纤维化进程的影响。方法 构建AT2R基因腺病毒载体(AdCMV-AT2R),体外转染hRIF,用流式细胞仪、BrdU掺入法检测hRIF增殖。用改良Boyden趋化小室、激光共聚焦显微镜查F-actin检测hRIF迁移。用原位末端标记(TUNEL)、bcl-2和bax mRNA表达检测hRIF凋亡。结果 hRIF转染表达AT2R。S期与G_2、M期细胞比例受血管紧张素(Aug)Ⅱ作用后无明显变化(8.1%对13.9%,P>0.05)。BrdU平均掺入量降低54.2%(P<0.05)。迁移细胞数抑制比例达62.2%(P<0.01)。F-actin表达明显受抑制。TUNEL染色法显示大量凋亡细胞、bcl-2表达无明显变化、bax表达增加76.3%(P<0.05)。结论 hRIF体外转染表达AT2R基因后,明显抑制了细胞的增殖与迁移,促进了细胞凋亡,对肾间质纤维化的防治有积极的作用。