用BrdU法研究γ射线外照射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因突变

用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)法检测 ,不同剂量γ射线外照射诱发正常人外周血淋巴细胞HPRT基因突变频率 (MFs) ,并研究其剂量效应关系。抽取正常成年人静脉血 ,分成 5组 ,分别用 0 .0— 4 .0Gy的不同剂量γ射线照射 ,全血培养后用BrdU法检测淋巴细胞HPRT基因MFs。结果表明 ,正常人外周血淋巴细胞的MFs随外照射剂量的增加而上升 ,且剂量效应关系符合线性平方模型。研究证明了BrdU法是一种快速、简便、较敏感的检测外照射诱发HPRT基因突变的方法 ,HPRT基因辐射突变可作为生物剂量计。

用BrdU法检测外周血淋巴细胞hprt突变的方法学探讨

目的 探索用 5 -溴脱氧尿嘧啶 (5 bromodeoxyuridine,BrdU)法检测次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶基因 (hypoxanthine guaninephosphoribosytransferasegene,hprt)突变的操作程序。 方法 用正交设计法就BrdU法的最佳检测条件进行了探讨。结果 本研究所得的最佳操作程序是 :将血样放入 4℃冰箱中冷藏2 4h ;培养基中 6 巯基鸟嘌呤 (6 thioguanine ,6 TG)最终浓度为 1×10 -4mol/L ;BrdU最终浓度用1× 10 -4mol/L ;加入BrdU后培养时间为 16h ;Giemsa染液浓度为 4 % ;染色时间为 15min。结论 BrdU法是一种较好的检测hprt突变的方法。

BrdU法研究放射性核素内照射诱发HPRT基因突变

目的 研究放射性核素内照射诱发大鼠外周血淋巴细胞HPRT基因突变的剂量效应关系。方法 大鼠尾静脉注入晚期混合裂变产物 ,5 溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)法检测不同累积剂量和不同剂量率内照射诱发外周血淋巴细胞HPRT基因突变 ,并拟合剂量效应关系。结果 随着累积剂量和剂量率的增加 ,HPRT基因突变频率不断上升 ,其剂量效应关系符合线性模型。结论 BrdU法是一种快速、简便、较敏感的检测辐射诱发HPRT基因突变的方法 。

流式细胞仪BrdU/DNA双参数分析法测定急性白血病细胞周期及其临床意义

研究白血病细胞的增殖动力学,探讨其与临床的关系。采用流式细胞仪（FCM）BrdU/DNA双参数分析法测定39例急性白血病骨髓细胞周期的各时相细胞比例及S期细胞的时限（Ts）,其中ANLL26例,ALL13例;初治31例,复发8例（ANLL、ALL各4例）。结果显示,急性白血病骨髓细胞S期比例显著低于正常,初治及复发白血病患者骨髓S期细胞比例之间相差不显著;复发白血病患者骨髓细胞的Ts比初治白血病患者及正常骨髓细胞的Ts都短。提示白血病细胞处于较正常低增殖状态;Ts时限短提示白血病细胞再生迅速,与急性白血病复发关系密切;Ts时限短为白血病预后不良因素之一。

反映成年大鼠脑组织神经发生水平显示方法的灵敏性和可靠性评价

目的评价反映成年大鼠脑组织神经发生水平的显示方法。方法采用免疫细胞化学法观察溴化脱氧尿核苷(BrdU)显示细胞增殖的可靠性、灵敏性,以及寻找BrdU给药的合适剂量。结果BrdU25mg/kg剂量组与50mg/kg、100mg/kg组相比,齿状回BrdU阳性细胞数差异明显(P<0.05),50mg/kg和100mg/kg两组无显著性差异(P>0.05)。BrdU25mg/kg剂量组阳性细胞不易与周围细胞区分;50mg/kg剂量组和100mg/kg剂量组阳性细胞较易识别。且BrdU阳性细胞大多数分化为神经元。结论BrdU标记法可以准确反映成年大鼠脑组织神经发生水平。

脐带间充质干细胞对T细胞的免疫调控研究

目的:研究脐带源间充质干细胞(UC-MSCs)异源T淋巴细胞的免疫调节作用。方法:从脐带中分离和培养间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用Brdu法测定细胞增殖率,观察UC-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测共培养体系中CD4+、CD8+水平检测及UC-MSCs对T淋巴细胞转化的影响;且用ELISA法检测共培养上清细胞因子IL-4、IFN-γ的表达水平。结果:从脐带获得的MSC免疫表型分析显示,其不表达HLA-II抗原。对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞,UC-MSCs对其的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UC-MSC与脐带血单个核细胞共培养体系中,CD8+细胞比例降低,与对照组有显著性差异(P<0.01),CD4+细胞比例无明显变化(P>0.05);UC-MSC抑制了共培细胞养体系中IFN-γ分泌,然而促进了IL-4的分泌,与对照组有显著性差异(P<0.01)。结论:UC-MSCs抑制PHA刺激的T淋巴的增殖,能够改变T细胞亚群及T细胞分泌的细胞因子,这种抑制特性表明,UC-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为GVHD的防治以及自身免疫性疾病治疗提供一条新途径,有助于UC-MSC的临床应用。

成年画眉前脑新生神经细胞的增殖和定位

用BrdU标记DNA,ABC免疫细胞化学的方法,观察成年画眉前脑神经前体细胞的产生和分布特点.结果:1)在胸肌注射BrdU存活1～5 d,在前脑室带区(VZ)有大量的新生标记细胞,并形成标记细胞增殖热点区;2)注射BrdU存活15～30 d,在高级发声中枢(HVc)、HVc壳、高位发声运动中枢-古纹状体栎核(RA)、新纹状体尾端(NC)内有一些新生标记细胞,在靠近LVZ的区域有较多的迁移细胞.结论:新生神经细胞起源于前脑VZ,并且每天都有一些新生细胞迁移到HVc、HVc壳、NC和RA内,提示这些核团内不断地产生新生细胞,可能与它们需要学习新的鸣啭语句有关.

雌百灵端脑新生神经前体细胞的产生和分布并与白腰文鸟的比较

用BrdU标记DNA的ABC免疫细胞化学方法,观察雌性蒙古百灵端脑神经前体细胞的产生和分布特点,并与白腰文鸟作比较。结果如下:1.在百灵和白腰文鸟胸肌注射BrdU短时程组(存活1天),在端脑室带区外侧壁(LVZ)有大量的标记细胞,新生神经细胞起源于端脑室带区(VZ)中的增殖细胞层,并在纹状体腹侧的VZ形成标记细胞增殖热点,如在百灵和白腰文鸟靠近中缝线处的外侧纹状体(LSt)与内侧纹状体(MSt)腹侧的LVZ形成标记最多的‘第1增殖热点’区;在靠近中缝线处LVZ的头端形成密集的新生标记细胞,形成‘第2增殖热点’区;在百灵LSt尾端的LVZ标记细胞形成‘第3增殖热点’,但白腰文鸟此脑区的标记细胞较少。2.在百灵胸肌注射BrdU长时程组中5天起,大量的LVZ的标记细胞开始迁移,存活5-30天期间在高级发声中枢(HVc)和高位发声运动中枢-古纹状体栎核(RA)有新生标记细胞,在端脑靠近LVZ的区域有较多的标记细胞。但在雌性白腰文鸟胸肌注射BrdU存活30天期间,在HVC、RA内未见到标记细胞。结果提示雌百灵端脑HVc和RA不断地产生新生神经细胞,这可能与雌性需要不断地感知、识别雄百灵鸣唱的新语句有关,而白腰文鸟不需要这种功能。

脐血间充质干细胞对T细胞分泌因子调节作用的实验研究

从脐血中分离和培养间充质干细胞(UCB-MSCs),流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用B rdu法测定细胞增殖率,观察UCB-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;且用ELISA法检测共培养上清细胞因子IL-4、INF-γ的表达水平。发现从脐血获得的MSCs免疫表型分析显示,其不表达HLA-Ⅱ抗原。UCB-MSCs对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UCB-MSCs抑制了共培养体系中INF-γ分泌,然而促进了IL-4的分泌,与对照组比较具有统计学差异(P<0.01)。认为UCB-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为移植物抗宿主病(GVHD)的防治提供一条新途径。

脐血间充质干细胞对T淋巴细胞增殖和激活影响的实验研究

目的研究脐血源间充质干细胞(UCB-MSCs)对T淋巴细胞激活和增殖的影响。方法2006—2007年广西壮族自治区人民医院从脐血中分离和培养间充质干细胞,流式细胞术检测其表面标志以鉴定纯度;用B r-du法测定细胞增殖率,观察UCB-MSCs对异体T淋巴细胞增殖的影响;流式细胞仪检测共培养体系中CD6+9细胞水平。结果从脐血获得的MSCs免疫表型分析显示,其不表达HLA-II抗原。对PHA刺激的脐带血T淋巴细胞,UCB-MSCs对其的增殖反应具有抑制作用,呈细胞数量剂量依赖性;UCB-MSCs与脐带血单个核细胞共培养体系中,CD+69细胞比例降低,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论UCB-MSCs抑制PHA刺激的T淋巴的增殖及激活,这种抑制特性表明,UCB-MSCs对免疫反应具负调节作用,可能为GVHD的防治提供一条新途径。

乳鼠窦房结细胞的原代培养与鉴定

目的 :建立一套可靠的窦房结细胞培养与鉴定技术。方法 :取Wistar乳鼠的窦房结组织 ,用差速贴壁技术及BrdU处理法进行原代细胞培养 ;对培养细胞进行形态学观察 ,用电生理技术记录细胞的动作电位。结果 :在培养的窦房结细胞中观察到有 3种不同形态的细胞 ,即梭形细胞、三角形细胞与不规则形细胞 ,其中梭形细胞最多 ,且形态结构与电生理特征符合窦房结起搏细胞的特点。三角形细胞与心房肌三角形细胞特征相似。结论 :①用差速贴壁技术及BrdU处理法进行乳鼠的窦房结细胞培养 ,是一种可靠的窦房结细胞培养技术。