Nestin/SOX2及SOX2/BrdU在成年小鼠室周器官细胞的表达

目的:原位检测神经干细胞/祖细胞在成年小鼠室周器官分布.方法:成年BALB/c雄性小鼠,7～8周龄,连续腹腔注射BrdU(50 mg/kg)3 d,4d后取脑组织,连续冷冻切片,用免疫荧光显色检测Nestin/SOX2及SOX2/BrdU在成年小鼠室周器官细胞的双表达.结果:在成年小鼠正中隆起(ME)、穹隆下器(SFO)及最后区(AP)均可见大量SOX2、中量巢蛋白及少量BrdU阳性细胞,并可见一些Nestin/SOX2及SOX2/BrdU双阳性细胞.成年小鼠室周器官Nestin/SOX2及SOX2/BrdU与脑室下区Nestin/SOX2及SOX2/BrdU双阳性细胞比较具有差异.结论:成年小鼠室周器官存在有一定数量的Nestin/SOX2及SOX2/BrdU双阳性细胞,这表明成年小鼠室周器官可能存在具有增殖和分化潜能的神经干细胞/祖细胞.

BrdU标记检测大鼠垂体前叶细胞的增殖功能

目的:为了观察大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞的增殖水平,建立一种快速、准确、灵敏、无同位素污染的检测垂体前叶细胞增殖的方法。方法:应用原代培养大鼠垂体前叶细胞,加入5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)标记细胞增殖,用抗BrdU抗体进行免疫细胞化学染色,观察大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞增殖能力。结果:大鼠垂体前叶细胞可见Br-dU阳性标记内分泌细胞,其细胞核内可见棕褐色阳性颗粒,核浆比例增大,呈颗粒状,提示处于细胞增殖期。免疫细胞双重染色表明,体外培养垂体前叶的生长激素细胞、催乳素细胞、促肾上腺皮质激素细胞均具有一定的增殖能力。结论:BrdU标记是一种有效的标记垂体前叶细胞增殖的方法,为探究大鼠垂体前叶细胞中各类激素细胞增殖能力提供了理论基础。

豚鼠前庭椭圆囊器官在庆大霉素损伤后离体培养的细胞增殖

目的 在离体状态下对豚鼠前庭椭圆囊器官进行培养,观察庆大霉素损伤毛细胞后细胞的增殖情况。方法采用白色健康豚鼠36只,体重300-450克,随机分为4组:(1)正常对照组;(2)正常加BrdU(5-溴基脱氧尿核苷BrdU)组;(3)庆大霉素组;(4)庆大霉素加BrdU组。应用体外组织培养、5—溴基脱氧尿核苷(BrdU,3μg/ml)掺入及免疫组织化学染色和Epon树酯包埋半薄切片等方法,在不同时间(2、3、5、15天)光镜观察庆大霉素(2.0mM)损伤后毛细胞及支持细胞增殖情况。结果 用庆大霉素48小时后,可见到椭圆囊感觉上皮中的毛细胞溶解破坏。加入BrdU继续培养,BrdU免疫组织化学染色显示了第5和15天被BrdU标记的阳性细胞核,阳性细胞核多位于椭圆囊感觉上皮中基底层,从细胞的形态和分布位置上看为支持细胞;感觉上皮的表层,也可观察到BrdU反应阳性的上皮细胞,细胞核较圆,形态和位置类似毛细胞。结论 提示损伤后的椭圆囊感觉上皮支持细胞可以进行细胞的有丝分裂,支持细胞可能是修复毛细胞的前体细胞。

BrdU-ELISA法测定四逆汤及组方药提取物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 观察四逆汤 (SNT)及组方药提取物对大鼠主动脉血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响。方法采用 MTT比色法和 Brd U- EL ISA法观察药物对离体大鼠 VSMC增殖的影响。结果 Brd U- EL ISA法结果表明四逆汤总提取物 (EST)对 VSMC的 Brd U掺入 DNA没有显著影响 ,而 MTT测定表明 EST可以提高 VSMC的脱氢酶活性。甘草 (L E)、附子 (AE)、干姜 (GE)、甘草加附子 (L AE)、干姜加附子 (AGE)提取物显著提高VSMC的脱氢酶活性 ,同时提高 VSMC的 Brd U掺入 DNA的水平。结论 EST可以增加 VSMC的脱氢酶活性 ,但对 VSMC的 Brd U掺入 DNA的水平无影响。而其他组方药提取物可以增加 VSMC的脱氢酶活性 ,同时提高VSMC的 Brd U掺入 DNA的水平。