靶向药物甲磺酸伊马替尼的分子标志物BCR-ABL融合基因定量检测平台的质量评价方法的研究

目的:使用BCR-ABL定量标准品,评价BCR-ABL融合基因检测试剂盒(数字PCR法)的性能。方法:提取BCR-ABL定量标准品的RNA,测定其浓度和纯度。使用BCR-ABL融合基因定量检测试剂盒(数字PCR法)和数字PCR仪进行检测,得到标准品的BCR-ABL融合基因的分子学反应。结果:用于准确度项目检测的标准品WS2和WS3的BCR-ABL融合基因的MR绝对偏差均不超过±0.5 log,用于检出限项目检测的标准品WS4能检出BCR-ABL融合基因突变阳性,用于重复性项目检测的标准品WS1和WS4的BCR-ABL融合基因的MR的变异系数(CV)均<3.0%。结论:BCR-ABL融合基因定量检测试剂盒(数字PCR法)的准确度、检出限和重复性的性能指标符合制定的《断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因检测试剂盒》标准的相应要求,为标准的实施提供了技术支撑。

BCR-ABL融合基因定性检测试剂盒的性能评价

目的使用BCR-ABL参考品,评价BCR-ABL融合基因定性检测试剂盒的性能。方法提取参考品的RNA,测定其浓度和纯度。使用白血病融合基因检测试剂盒(荧光PCR法)进行PCR扩增。使用不同平台的荧光定量PCR仪进行检测,并使用仪器软件进行分析,获得参考品的BCR-ABL融合基因结果。结果阳性参考品在BCR-ABL反应通道扩增曲线有明显对数增长期且Ct值<试剂盒的阳性界值,为BCR-ABL融合突变阳性,BCR-ABL融合基因突变阴性和其他白血病融合基因突变的阴性参考品在BCR-ABL反应通道没有扩增曲线,为BCR-ABL融合突变阴性,不高于100拷贝/反应的检测限参考品在BCR-ABL反应通道扩增曲线有明显对数增长期且Ct值<阳性界值,为BCR-ABL融合突变阳性,重复性参考品的BCR-ABL反应通道Ct值的变异系数(CV,%)为0.4%~1.8%。结论BCR-ABL融合基因定性检测试剂盒能够准确检出参考品的BCR-ABL融合基因突变,符合《断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因检测试剂盒》标准中的阳性参考品符合率、阴性参考品符合率、检出限和重复性项目的要求。

BCR⁃ABL融合基因检测试剂盒(荧光PCR法)的评价

目的评价不同公司的BCR⁃ABL融合基因检测试剂盒(荧光PCR法)的性能。方法提取BCR⁃ABL定量标准品WS1~WS4的RNA,分别加入BCR⁃ABL反应液和ABL反应液,然后使用荧光定量PCR仪进行检测。通过软件分析获得标准品的BCR⁃ABL融合基因检测结果。结果准确度标准品WS2和WS3的融合比例绝对偏差均不超过±0.5个对数数量级,检测限标准品WS4能检出BCR⁃ABL融合突变阳性,重复性标准品WS1和WS4的Ct值变异系数(CV,%)均<5.0%,WS1~WS4标准品的线性相关系数︱r︱不低于0.9800。结论BCR⁃ABL融合基因检测试剂盒(荧光PCR法)能够准确检出BCR⁃ABL定量标准品,符合断裂点簇集区⁃艾贝尔逊白血病病毒(BCR⁃ABL)融合基因检测试剂盒标准的准确度、检出限、重复性和线性要求。

BCR-ABL融合基因阴性的骨髓增殖性肿瘤血栓形成相关因素及治疗的研究进展

断裂点簇集区-艾贝尔逊白血病病毒(BCR-ABL)融合基因阴性的骨髓增殖性肿瘤(MPNs)具有血栓形成的风险,是导致患者高致残率和高病死率的重要原因。虽然近年来关于BCR-ABL融合基因阴性的MPNs患者血栓形成相关因素及治疗的研究较多,但其发病机制目前尚未完全明确。基因突变、血细胞相关参数、凝血相关因素、生化指标以及某些特殊的临床表现等均可能是BCR-ABL融合基因阴性的MPNs患者血栓形成的相关因素。放血疗法、抗血小板治疗、细胞减少性治疗、Janus激酶2抑制剂及抗凝治疗等是BCR-ABL融合基因阴性的MPNs最常用的治疗方法。未来希望通过对BCR-ABL融合基因阴性的MPNs患者血栓形成相关因素及治疗研究的深入,可进一步降低BCR-ABL融合基因阴性的MPNs患者的血栓发生率。