陡脉冲电场对肝癌细胞线粒体跨膜电位的影响

为研究陡脉冲电场的凋亡效应,以人肝癌细胞为实验对象,采用激光共聚焦扫描显微镜观察陡脉冲电场作用下细胞内线粒体跨膜电位的实时变化。实验结果表明,陡脉冲电场能使线粒体跨膜电位下降,较高的电压峰值、较窄的脉冲宽度(600 V/100 ns)比较低的电压峰值、较宽的脉冲宽度(200V/1.6μs)能使线粒体跨膜电位更快地下降,并且在停止施加陡脉冲电场后线粒体跨膜电位仍然在不断下降,进而有可能使线粒体跨膜电位崩溃,从而诱导肝癌细胞凋亡,为陡脉冲杀伤肿瘤细胞提供了理论依据。

ATM蛋白在不同放射敏感性大肠癌细胞株中的表达

目的 ATM(ataxia-telangiectasia mutant)蛋白与细胞放射敏感性密切相关。该研究探讨ATM蛋白在不同放射敏感性的大肠癌细胞系HM7和HT29中的表达。方法应用免疫荧光标记技术,对HM7和HT29中的ATM蛋白进行激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)分析。结果 ATM蛋白定位于细胞核及胞浆中,并以细胞核为主,且HM7细胞核中ATM蛋白阳性细胞的荧光强度较HT29强;半定量分析,HM7中ATM蛋白表达的积分吸光度值为8×106,HT29中为3×106。结论 ATM蛋白的表达在HM7和HT29中有差别,这种差别可能与它们所具有的不同放射敏感性有关。

激光扫描共聚焦技术分析中药8892对U_（14）癌细胞的作用

我们证明中药８８９２对小鼠生存率和抑瘤率有明显效果的同时，并应用激光扫描共聚焦显微镜观察了中药８８９２对纯小鼠Ｕ１４癌细胞的作用，实验结果证明中药８８９２能直接破坏癌细胞ＤＮＡ、ＲＮＡ，抑制癌细胞增殖，这为中药抗癌作用的临床应用提供有力的依据。本文还讨论了激光共聚焦显微镜（ＣＬＳＭ）的功能，细胞断层抄描光切片（细胞ＣＴ），三维重建，立体旋转等等，这在普通显微镜下是见不到的。因此应用这种新技术会促进中医药研究的发展。

LSM下乳癌、乳腺囊性增生症早期恶变及乳腺增生细胞荧光特性的观察

本文报道了乳癌、乳腺囊性增生症早期恶变及乳腺增生细胞在单色激光激发下的自体荧光。结果发现乳癌细胞浆内荧光最强，囊性增生早期恶变细胞次之而乳腺增生细胞浆无荧光。这一荧光特征可为肿瘤早期诊断提供重要依据。

P物质对体外培养的胃癌细胞内游离钙浓度的影响

目的研究P物质(substance P,SP)对体外培养的人低分化胃癌细胞MKN45内游离钙浓度的影响。方法在RPMI1640培养液中培养人胃癌细胞系MKN45,应用钙特异性荧光指示剂Furu-3/AM负载细胞,用ASN-1377642(NK-1受体拮抗剂)、尼卡地平和不同浓度的SP作用于人胃癌细胞MKN45,采用激光扫描共聚焦显微镜观测胃癌细胞内游离钙浓度的变化。结果在Hanks液(含钙离子)中加入10、50及100nmol/L SP可以显著升高胃癌细胞内钙离子浓度(P<0.05),并且呈剂量依赖性(P<0.05);在无外钙时,SP引起细胞内钙离子浓度升高的幅度低于有外钙时(P<0.05);在Hanks液中加入NK-1受体拮抗剂ASN-1377642和钙通道阻滞剂尼卡地平孵育后,SP引起胃癌细胞内钙离子浓度升高的幅度显著降低,与Hanks液组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论SP可以显著升高胃癌细胞内钙离子浓度,细胞内钙离子浓度的升高源于内钙释放和外钙内流。

nm23-H_1基因转染前后人肺癌细胞中PKC转位的研究

目的 探讨nm2 3 H1转染和蛋白激酶C(PKC)特异抑制剂CalphostinC对人高转移大细胞肺癌细胞株L9981细胞PKC信号转导通路的作用 ,以及nm2 3 H1基因对PKC激活转位的影响。方法 应用激光扫描共聚焦显微镜观察nm 2 3 H1基因转染前后和CalphostinC处理转基因细胞株L9981 nm2 3 H1前后PKC在不同的亚细胞区域的定位情况。结果 ( 1)原代细胞株L9981和空载体细胞株L9981 pLXSN中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞核及核周 ,处于激活状态 ;转染nm 2 3 H1基因后的人肺癌细胞株L9981 nm2 3 H1中PKC α、PKC βⅡ主要位于胞浆 ,处于未激活状态。 ( 2 )CalphostinC作用后所有细胞中的PKC均主要位于胞浆中 ,处于未激活状态。结论 ( 1)nm2 3 H1基因可使L9981细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。 ( 2 )CalphostinC可使L9981、L9981 pLXSN细胞株中PKC从胞核向胞浆转位 ,从而抑制PKC信号转导。

人膀胱癌细胞纤维肌动蛋白共聚焦激光扫描显微镜观察

探讨膀胱癌细胞纤维肌动蛋白 (F- actin)的空间结构。采用共聚焦激光扫描显微镜光学切片技术结合异硫酸氢荧光素 -鬼笔环肽 (FITC- phalloidin)标记纤维肌动蛋白和碘化丙啶 (PI)标记核酸的荧光探针双重标记技术对膀胱癌细胞纤维肌动蛋白进行形态学观察 ,结果可见膀胱癌细胞内纤维肌动蛋白微丝形态完整 ,成细束或细丝状 ,平行排列贯穿于整个细胞或细胞突起 ,在胞质边缘处较密集。

CLSM对乳癌细胞荧光特性的研究

本文报道了用共焦激光扫描显微镜（ＣＬＳＭ）对乳癌细胞及与其作为对照的乳腺囊性增生症早期恶变细胞和乳腺增生细胞自发荧光的观察结果。结果发现在单色激光激发下，细胞浆内自发荧光的强度与细胞的癌变程度成正相关，即乳癌细胞胞浆内荧光最强，囊性增生症早期恶变细胞胞浆次之，而乳腺增生症细胞胞浆无荧光。这一荧光特性可为肿瘤早期诊断提供重要依据。

脉冲磁场对人卵巢癌SKOV3细胞内Ca^(2+)和细胞膜电位的影响

目的研究脉冲磁场(8 Hz,200 m T)对卵巢癌细胞SKOV3细胞内Ca2+和细胞膜电位的影响及其作用机制。方法将SKOV3细胞分为对照组、脉冲磁场组、脉冲磁场+维拉帕米组。对照组不施加任何处理,其余2组给予脉冲磁场照射1 h,脉冲磁场+维拉帕米组同时加入维拉帕米50μmol/L。分别用荧光探针Fluo-3/AM及Di BAC4(3)及标记细胞内Ca2+和细胞膜电位,应用激光共聚焦显微镜检测磁场作用后细胞内平均荧光强度的变化,并采用流式细胞仪检测磁场作用后细胞凋亡情况。结果脉冲磁场诱导Fluo-3/AM荧光强度增加,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),维拉帕米干预后Ca2+荧光强度较脉冲磁场组明显减弱(P<0.05)。脉冲磁场诱导Di BAC4(3)荧光强度增加,细胞膜发生去极化,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);维拉帕米对脉冲磁场的去极化效应无明显影响(P>0.05)。脉冲磁场组凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论脉冲磁场作用于SKOV3细胞膜,使其发生去极化,从而激活电压依赖型钙离子通道,引起细胞内Ca2+浓度升高。而目前的脉冲磁场实验条件下,未促进细胞凋亡的发生。

用荧光图像示踪不同分化的食管癌细胞Cx43的空间分布

研究不同分化的食管癌细胞Cx43蛋白的表达和空间定位及其对食管癌细胞的生物学行为的影响。应用合适的荧光探针和激光扫描共聚焦显微镜,通过单粒子跟踪图像分析,检测Cx43蛋白荧光团在食管癌细胞中的表达和分布。Cx43在高分化食管鳞癌EC9706中的分布与EC109细胞相似,特别是细胞膜呈现明显的荧光团;近细胞膜Cx43蛋白含量相对细胞质增高,具有在细胞膜构建细胞通信的结构基础,预示着细胞向良性发展的趋势。低分化食管鳞癌KY150细胞和食管癌SHEEC细胞中Cx43蛋白的荧光团主要分布在近核膜的细胞质中,较少分布在细胞膜附近;近核膜的Cx43蛋白含量比近细胞膜的含量高,说明Cx43蛋白在细胞质中的滞留状态。研究显示SPT图像可以直观地示踪Cx43蛋白荧光团在食管癌细胞中的分布,从而确定Cx43蛋白在不同分化的食管癌细胞中表达及定位的痕迹。

光动力疗法对人膀胱癌细胞胞内游离钙的影响

目的 :探讨光动力学作用后的膀胱癌细胞 (T -2 4和SCaBER)胞内钙离子浓度的变化。 方法 :采用MTT比色分析法判断光动力学对体外人膀胱癌T -2 4和SCaBER细胞的杀伤效应。同时应用激光共聚焦显微镜和Fluo -3 /AM探针技术测定光动力学作用后细胞内钙离子的浓度。 结果 :T -2 4和SCaBER细胞内钙离子有明显升高 ,与对照组比较差异有显著意义 (P <0 0 0 1)。 结论