基于机器学习分析的浸润性乳腺癌蛋白质编码基因的标志物鉴定

目的应用随机森林(RF)、极限梯度提升算法(XGBoost)、轻量的梯度提升机(LightGBM)、类别型特征提升(CatBoost)4种机器学习算法分析浸润性乳腺癌转录组表达数据,筛选与浸润性乳腺癌预后相关的生物标志物。方法通过癌症基因组图谱公共数据库下载浸润性乳腺癌的表达数据,采用DESeq2程序包、t检验及Cox单因素分析,对人类浸润性乳腺癌样本中与生存预后相关的差异蛋白质编码基因进行筛选。基于RF、XGBoost、LightGBM、CatBoost等机器学习模型的构建与比较,挖掘浸润性乳腺癌预后相关的蛋白质编码基因标志物,并使用基因表达综合数据库的乳腺癌表达数据作为外部测试进行验证。结果共获得151个与生存预后相关的差异蛋白质编码基因,其中由C3orf80、UGP2和SPC253个基因构建的机器学习模型效果较好。结论筛选出3个(UGP2、C3orf80、SPC25)与浸润性乳腺癌预后相关的生物标志物,为诊断和治疗浸润性乳腺癌提供了新的方向。

基于铜死亡相关lncRNA构建乳腺癌预后预测模型

目的构建铜死亡相关长链非编码核糖核酸(long non-coding RNA,lncRNA)预后预测模型,并进行效能验证。方法从癌症基因组图谱数据库下载女性乳腺癌患者的转录组数据及临床信息,通过Pearson相关性分析鉴定乳腺癌组织中的铜死亡相关lncRNA。将铜死亡相关lncRNA及临床资料均完整的乳腺癌患者作为整体组,以1:1的比例随机分为训练组和验证组。在训练组中通过单因素Cox回归、Lasso回归筛选与乳腺癌患者预后关系密切的铜死亡相关lncRNA。基于上述选择的lncRNA,采用多因素Cox回归分析构建乳腺癌预后预测模型,再根据AIC值选择最佳乳腺癌预后预测模型(AIC值最小)。依据最佳乳腺癌预后预测模型计算所有患者的风险评分。以训练组患者的中位风险评分作为截断值,将所有患者分为高、低风险组,通过生存曲线、亚组生存分析验证预后预测模型的区分能力,通过ROC及一致性指数曲线验证预后预测模型的准确性,通过单因素和多因素Cox回归验证预后预测模型的独立性。通过对高、低风险组差异表达基因进行GO及KEGG富集分析,对高、低风险组患者进行免疫浸润分析验证预后预测模型的临床实用性。结果乳腺癌预后预测模型由10个铜死亡相关lncRNA(AKT3.IT1、AL137847.1、AL807757.2、AC079766.1、AL451123.1、LINC02043、AL683813.1、AC073127.1、MFF.DT和AC091588.1)构建而成,模型公式为风险评分=(-1.129216501573150×AKT3.IT1表达量)+(-1.16609568525672×AL137847.1表达量)+(0.729804497137164×LINC02043表达量)+(0.745696645441295×AL683813.1表达量)+(-0.903562388041113×AL807757.2表达量)+(1.040608675397110×AC073127.1表达量)+(2.160133554898460×MFF.DT表达量)+(1.417144256517410×AC091588.1表达量)+(-0.764700719748750×AC079766.1表达量)+(-3.608177447126010×AL451123.1表达量)。生存曲线表明高风险组患者的生存率更低(P<0.001);亚组生存分析表明除M1分期外,不同临床阶段的高、低风险组乳腺癌患者的预后差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC显示预后预测模型预测乳腺癌患者1年、3年和5年生存率的曲线下面积分别为0.807、0.739和0.709,ROC及一致性指数曲线结果显示风险评分的预测效能优于其他临床特征。单因素和多因素Cox回归分析表明风险评分是乳腺癌患者预后的独立影响因素。高、低风险组之间差异表达的基因富集于免疫和耐药相关通路;与低风险组比较,高风险组患者的免疫细胞和基质细胞评分低,M2巨噬细胞浸润丰度高(P<0.05)。结论基于铜死亡相关lncRNA构建了乳腺癌预后预测模型,其区分能力、准确性、独立性及临床实用性良好。

M2型丙酮酸激酶、自噬相关基因2B蛋白与乳腺浸润性导管癌分子亚型的关系

目的探究M2型丙酮酸激酶(pyruvate kinase M2,PKM2)、自噬相关基因2B(autophagy related gene 2B,ATG2B)蛋白与乳腺浸润性导管癌(invasive ductal carcinoma,IDC)分子亚型及临床病理特征的关系。方法选择2018年9月至2019年12月合肥市第二人民医院收治的IDC患者63例为研究对象,采用免疫组织化学法检测患者癌组织及癌旁组织PKM2、ATG2B表达,分析癌组织PKM2、ATG2B表达与临床病理特征及分子亚型的关系;所有患者均随访3年,根据其生存情况分为死亡组及生存组,分析癌组织PKM2、ATG2B表达、临床病理特征及分子亚型对患者预后的影响。结果IDC癌组织PKM2蛋白阳性表达率高于癌旁组织,ATG2B蛋白阳性表达率低于癌旁组织(P<0.05);不同月经状态、肿瘤直径、临床分期、分化程度及不同淋巴结转移、脉管侵犯情况IDC患者的PKM2阳性表达率对比差异有显著性,不同临床分期、分化程度及不同淋巴结转移、脉管侵犯情况IDC患者的ATG2B阳性表达率比较,差异有显著性(P<0.05);Luminal A型IDC患者癌组织PKM2蛋白阳性表达率高于三阴型,ATG2B蛋白阳性表达率低于三阴型(P<0.05);死亡组中临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为低分化、存在淋巴结转移、脉管侵犯的人数比例及PKM2蛋白阳性表达率高于生存组,ATG2B蛋白阳性表达率低于生存组(P<0.05);临床分期为Ⅲ~Ⅳ期、分化程度为低分化、存在淋巴结转移、脉管侵犯的人数比例及PKM2蛋白阳性是影响IDC患者预后的危险因素(P<0.05)。结论IDC癌组织PKM2蛋白阳性表达与临床病理特征及分子亚型有关,且PKM2蛋白阳性是影响IDC患者预后的危险因素。

siRNA封闭BRCAA1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响

目的:研究siRNA封闭乳腺癌抗原相关基因1(BRCAA1)对乳腺癌细胞MCF-7增殖和Rb基因表达的影响。方法:采用RNAi技术对乳腺癌细胞MCF-7细胞BRCAA1基因进行特异性抑制,用阳离子脂质体与化学合成的Pre-designedan-ti-BRCAA1 siRNA构建转染复合体,反转染MCF-7细胞株48h后提取总RNA,分为未处理(NT)组、阴性对照组、阳性对照组和BRCAA1组,经反转录荧光实时PCR检测BRCAA1和Rb基因mRNA表达情况;检测细胞增殖抑制率。结果:与阴性对照组相比,siRNA转染MCF-7细胞后实验组BRCAA1基因mRNA水平降低了42.3%;Rb基因表达较之阴性对照组上升了11.1%;实验组MCF-7细胞增殖抑制率为(81.9±6.1)%,抑制作用明显强于对照组(P<0.05)。结论:BRCAA1基因的封闭明显抑制了MCF-7细胞的增殖,BRCAA1基因与Rb基因可能存在有某种相互拮抗的作用。

Livin在乳腺癌中的表达及其与Caspase-3,Ki67表达的关系

目的:探讨Livin在乳腺癌中的表达和临床意义及其与Caspase-3蛋白表达和细胞增殖的相互关系。方法:采用免疫组化S-P法检测Livin在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中Livin蛋白和Caspase-3蛋白表达以及Ki67在乳腺癌组织中的表达。结果:Livin蛋白在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌组织中阳性率为7.1%,29.8%,65.0%,73.1%;Caspase-3蛋白分别为92.9%,71.4%,45.0%,34.6%,两者差异均有统计学意义(P<0.01)。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和年龄有关(P<0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关。Livin蛋白与Caspase-3蛋白在乳腺浸润性癌表达呈负相关(P<0.01)。在乳腺非浸润性癌中两者相当,无相关性(P>0.05)。Livin蛋白表达阳性的乳腺癌Ki67的标记细胞增殖指数(47.32±22.34)明显高于Livin蛋白表达阴性的乳腺癌细胞Ki67的标记细胞增殖指数(18.01±23.34)(P<0.01)。结论:Livin蛋白在乳腺癌中表达上调,可作为判断乳腺癌预后新的分子标记物,成为乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。Livin不仅参与细胞凋亡的调控,还促进了细胞增殖及肿瘤发生、发展。

乳腺癌Her2基因荧光原位杂交及其临床病理关系

目的探讨Her2基因过表达的比例及其与临床病理之间的联系。方法收集乳腺浸润型导管癌标本50例,总结其临床及病理资料,应用石蜡包埋组织切片,以EnVision两步法进行免疫组织化学染色标记ER、PR及HER2,以金菩嘉DNA探针试剂盒行荧光原位杂交检测HER2基因。结果患者平均年龄55.5岁,病理组织分级Ⅰ级11例,Ⅱ级30例,Ⅲ级9例。术后分期Ⅰ期13例,ⅡA期15例,ⅡB期13例,ⅢA期6例,ⅢB期2例,ⅢC期1例。淋巴结中位转移率6.91%。ER阳性33例,PR阳性32例,IHC法HER2阳性40例,FISH阳性33例,阴性17例。FISH法检测HER2基因与HER2蛋白过表达之间相关(P<0.05),其与病理分级、术后分期、淋巴结转移率及ER、PR的表达无相关(P>0.05),3例脉管内瘤栓及3例原发瘤数大于1者,FISH均为阳性。结论FISH检测HER2基因扩增和免疫组化检测HER2蛋白一致性较好,HER2基因与脉管内瘤栓及多个原发瘤有一定关系,但其作为间接预测预后的指标有待于进一步研究。

多药耐药相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与预后关系

目的:研究多药耐药相关蛋白（Multidrug resistance-associated protein 1,MRP1）在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法（IHC）检测47例手术切除的乳腺癌组织中MRP1的表达,并分析其与临床、病理特征的关系及对预后的影响。结果:（1）MRP1在乳腺癌组织中的阳性表达率为85.1％（40/47例）,其中高表达者占53.2％（25/47例）;（2）腋淋巴结阳性者MRP1表达水平明显高于腋淋巴结阴性者（P<0.05）,MRP1表达与月经状况、肿瘤大小、组织分级和激素受体状况均无关（P>0.05）;（3）Kaplan-Meier生存分析结果表明MRP1表达与无病生存期明显相关（P<0.05）,但和总生存期无关（P>0.05）;（4）Cox单因素分析显示肿瘤大小和MRP1表达与无病生存期明显相关（P<0.05）,但仅有肿瘤大小和总生存期明显相关（P<0.05）;而多因素分析却显示只有腋淋巴结转移和无病生存期（P<0.01）和总生存期（P<0.05）明显相关。结论:MRP1在乳腺癌组织中具有较高的表达水平,与乳腺癌患者的无病生存期有关,而与总生存期无关。

乳腺癌端粒酶活性与bcl-2和bax蛋白表达的相关性研究

目的 探讨端粒酶检测在乳腺癌诊断中的作用及其在乳腺癌发生中与bcl 2和bax蛋白表达的相关性。方法 用原位杂交方法检测端粒酶的表达及其活性 ,采用免疫组织化学技术SABC法检测bcl 2和bax。结果 端粒酶在乳腺癌中的表达率明显高于癌前病变 (P <0 .0 1 )和乳腺良性肿瘤。端粒酶活性与bcl 2表达负相关 ,与bax表达显著负相关 ,与bcl 2 /bax比值明显正相关。结论 bcl 2 /bax表达失衡 (比值增大 )可能是端粒酶激活的重要途径之一。

反义HSP70对人乳腺癌细胞的抑瘤效应

目的：观察反义热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）RNA对人乳腺癌细胞的生物学特性的影响，探讨其抗肿瘤作用。方法：将逆转录病毒真核表达载体介导的反义HSP70重组质粒pX-AHSP70和空载体pLXSN-neo转染至MCF7/Adr人乳腺癌细胞，通过细胞生长曲线和软琼脂集落实验以及裸鼠移植瘤实验观察转染反义HSP70重组质粒细胞的体内外抑瘤作用。结果：建立了稳定表达反义HSP70 RNA的MAp70细胞，与空载体细胞相比，HSP70蛋白的表达下降了48％。细胞群体生长速度明显减慢，软琼脂集落形成率和抑制率分别为6.08％和62.14％，裸鼠皮下接种的平均出瘤时间为15天，最终平均瘤重为108 mg，以上参数与空载体细胞相比，均有显著差异。结论：反义HSP70 RNA能够有效地抑制HSP70表达，进而抑制乳腺癌细胞的体外增殖和体内移植瘤的形成与发展。

p53基因第7外显子点突变与乳腺癌的关系

目的：研究ｐ５３基因点突变与乳腺癌发生发展的关系。方法：应用多聚酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）检测７５例人乳腺癌标本ｐ５３基因第７外显子内２４８、２４９位密码子的点突变。结果：７５例乳腺癌标本ｐ５３基因第７外显子全长序列ＰＣＲ扩增产物经限制性内切酶ＭｓｐＩ酶切后，发现有２例为突变型，用ＨａｅⅢ酶切后未发现有突变。结论：上述结果提示ｐ５３基因第７外显子内２４８位密码子的突变为乳腺癌ｐ５３基因突变热点之一。

nm23基因在乳腺癌中的表达及与远处转移相关性的研究

应用免疫组化方法，对１０１例有８年随访结果的乳腺癌病例，进行了ｎｍ２３基因蛋白表达的检测。结果显示，ｎｍ２３基因蛋白表达与血行转移、淋巴结转移的发生呈负相关，与其它临床指标无关。生存率分析表明：ｎｍ２３基因高表达组患者的生存率明显高于低表达组（Ｐ＜０．０５）；腋淋巴结阴性组中，ｎｍ２３基因高、低表达的患者生存率差别显著，提示若将腋淋巴结阴性组中具有潜在转移危险性的ｎｍ２３低表达患者筛选出来，加强治疗，将会有助于提高生存率。应用Ｃｏｘ比例风险模型进行的多因素分析显示，ｎｍ２３基因表达与腋淋巴结转移、肿瘤大小均为乳腺癌的预后因素，其中ｎｍ２３基因高表达患者死亡的相对危险度较低表达患者低５４％。本研究结果提示，ｎｍ２３基因表达可以作为一项独立的预后指标，用以指导乳腺癌的临床治疗。

抑制RhoA基因表达诱导乳腺癌细胞凋亡的实验研究

目的探讨抑制RhoA基因表达诱导乳腺癌(BC)细胞凋亡的作用。方法通过已建立的RhoA腺病毒载体系统,感染BC MCF-7细胞。经过细胞培养、病毒滴度等,将收集的样本分别用Western blot、RT-PCR技术检测RhoA蛋白表达和基因表达变化;对感染Adsi RNA-RhoA的BC细胞进行MTT检测及细胞内DNA片段化检测。结果腺病毒siRNA-RhoA感染BC细胞能明显抑制RhoA基因表达(抑制率为75.64%),降低RhoA基因的mRNA转录水平69.44%。MTT检测结果表明,感染腺病毒Adsi RNA-RhoA组的肿瘤细胞生长、增殖被明显抑制。TUNEL检测显示,抑制RhoA基因表达能明显导致BC细胞凋亡。结论利用siRNA抑制BC细胞中RhoA基因表达,能诱导BC细胞凋亡。

乳癌组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达

目的:检测乳癌组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达。方法:收集人乳腺浸润性导管癌标本40例、癌周不典型增生组织40例及癌周正常乳腺组织40例,采用Westernblot法检测3种组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达情况。结果:3种组织中BCSG1、MMP-2及ETS-1蛋白的表达差异有统计学意义(FBCSG1=105.032,FETS-1=81.343,FMMP-2=112.570,P均<0.001),且乳癌组织中以上3种蛋白的表达均高于癌周不典型增生组织及癌周正常乳腺组织(P<0.05)。有淋巴结转移的乳癌组织中3者的表达均高于无淋巴结转移的乳癌组织(P<0.05)。乳癌组织中BCSG1的表达与ETS-1及MMP-2的表达呈正相关(r=0.664、0.810,P<0.05)。结论:BCSG1、MMP-2及ETS-1与乳癌的浸润转移密切相关。

乳腺浸润性导管癌组织激素受体和Cyclin D1及Bcl-2表达的研究

目的:研究生物标志ER、PR、Cyclin D1、Bcl-2和Bax在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其与乳腺癌患者无瘤生存时间和总体生存时间的关系,探寻这些生物标志对化疗患者预后的提示作用。方法:用HE及SP免疫组化染色法对100例乳腺浸润性导管癌作回顾性分析。结果:各生物标志的阳性率分别为ER60%,PR58%,Cyclin D1 55%,Bcl-250%,Bax34%。其中ER的阳性率与患者的绝经与否有关,ER、PR和Bcl-2的表达均与组织学分级负相关。Cyclin D1阴性的患者总体生存时间要短于Cyclin D1阳性的患者,χ2=7.77,P=0.0053。ER、PR阳性者与阴性者无瘤生存时间差异有统计学意义(χ2=4.59,PER=0.0322;χ2=6.19,PPR=0.0129),ER、PR阳性者无瘤生存时间更长。Bcl-2阳性者平均无瘤生存时和平均总体生存时间均长于Bcl-2阴性者。ER为阳性表达者,化疗后平均无瘤生存时间(55.4个月)长于ER阴性者(35.8个月),χ2=6.10,P=0.0135;Bcl-2为阳性表达者,化疗后平均无瘤生存时间(54.8个月)长于Bcl-2阴性者(41.6个月),χ2=10.11,P=0.0015。结论:ER、PR和Bcl-2的表达与患者的无瘤生存时间相关,Bcl-2和Cyclin D1的表达和患者的总体生存时间相关。ER和Bcl-2阳性表达患者化疗后无瘤生存时间较长。

端粒酶基因与凋亡相关基因在乳腺导管非典型增生中表达的相关性研究

背景与目的:近年研究表明端粒酶的激活及凋亡抑制基因的过度表达与多种肿瘤发生有关,本研究观察端粒酶基因(hTR,hTRT)、凋亡相关基因(p53,bcl-2)在乳腺导管非典型增生中的表达及相互关系,旨在探讨端粒酶活性及凋亡相关基因的变化在乳腺导管非典型增生上皮癌变过程中的作用和意义。方法:应用原位杂交方法检测端粒酶基因(hTR,hTRT)和凋亡相关基因(p53,bcl-2)mRNA在44例乳腺导管非典型增生组织中的表达,应用免疫组化方法检测p53蛋白在上述病例中的表达,并与6例良性乳腺增生及26例乳腺癌病例进行了比较。结果:端粒酶基因(hTR,hTRTmRNA)在乳腺导管重度非典型增生组织中表达增强(60.9%,52.1%),其表达与在轻、中度非典型增生(22.2%,11.1%;33.3%,25.0%),乳腺癌(88.5%,80.8%)组织中的表达差异显著(P<0.05)。p53mRNA在乳腺导管非典型增生组织中的表达随着异型性的增加而下降(轻度:55.6%;中度:41.7%;重度:26.1%),而p53蛋白则相应增加(轻度:11.1%;中度:25.0%;重度:34.8%)。bcl-2在乳腺导管非典型增生组织中呈中度表达,其中以在重度非典型增生组织中表达明显。结论:端粒酶基因(hTR,hTRT)的表达与乳腺非典型增生细胞的恶性转化密切相关,同时可检测到p53mRNA的表达缺失、p53蛋白突变及bcl-2mRNA的过表达。

Livin在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2和激素受体的关系

目的探讨Livin基因在乳腺癌中的表达及与c-erbB-2基因和激素受体之间的表达关系。方法采用免疫组化S-P法及原位杂交技术检测Livin mRNA和其蛋白在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌中表达及ER/PR和c-erbB-2的表达。结果Livin蛋白和mRNA在正常乳腺组织、乳腺增生性病变、乳腺非浸润性癌和乳腺浸润性癌的表达阳性率之间差异显著(P<0.01),Livin蛋白与mRNA表达之间差异不显著(P>0.05)。Livin表达与临床分期、淋巴结转移和患者年龄有关(P<0.05),与肿瘤大小和组织学分级无关;Livin蛋白与c-erbB-2基因在乳腺癌中的表达无相关性(P>0.05)。Livin表达阳性的乳腺癌ER标记指数(32.25±34.90)%明显低于Livin表达阴性的乳腺癌(59.29±34.04)%(P<0.01),而PR的标记指数在两者之间差异不显著(P>0.05)。结论Livin基因及蛋白在乳腺癌中表达上调,提示在乳腺癌的发生、发展中起重要作用,有望成为一种有效、敏感的肿瘤标记物,可作为判断乳腺癌预后的新分子标记物和乳腺癌诱导凋亡治疗的新靶点。

乳腺癌组织cystatinM基因的表达及其临床病理意义

背景与目的探讨cystatin M基因在人乳腺癌组织中的表达及生物学意义。材料与方法采用半定量RT-PCR方法和免疫组织化学法检测50例乳腺癌组织和配对癌旁乳腺组织半胱氨酸蛋白酶抑制剂cystatin M mRNA和蛋白表达及其与临床病理特征的关系。结果乳腺癌组织cystatin M mRNA表达阳性率为62%(31/50),其配对癌旁乳腺组织为94%(47/50),在乳腺癌细胞系MDA-MB-435S中未见其表达。乳腺癌组织cystatin M mRNA的表达指数为0.412±0.021,明显低于配对的癌旁乳腺组织(0.541±0.020),二者差异有统计学意义(P<0.01)。cystatin M蛋白在乳腺癌及癌旁组织表达阳性率分别为58%(29/50)和92%(46/50);其平均光密度值为0.318±0.058,显著低于癌旁乳腺组织(0.428±0.064,P<0.01);cystatin M表达下调与乳腺癌淋巴结转移和临床TNM分期显著相关(P<0.05),而与肿瘤的大小、病理分级、ER和PR状况无关(P>0.05)。结论人乳腺癌组织存在cystatin M基因表达显著下调且与肿瘤的浸润和转移有关。

乳腺浸润性小叶癌中的PCNA和p53蛋白表达及临床意义

目的 :探讨乳腺浸润性小叶癌PCNA、p5 3的表达及意义。 方法 :采用免疫组化S -P法 ,对 5 4例浸润性小叶癌进行检测 ,用有关统计学方法结合随访资料进行分析。结果 :浸润性小叶癌PCNA阳性率为 90 74% (49/5 4) ,PCNA平均指数 5 1 5 0 %± 2 2 49% ,PCNA指数与临床分期、淋巴结转移有密切关系 (P <0 0 1)。随PCNA指数升高 ,浸润性小叶癌患者生存期缩短 (P <0 0 1)。但浸润性小叶癌p5 3阳性率仅为 3 70 % (2 / 5 4)。结论 :1)PCNA可作为反映浸润性小叶癌增殖活性 ,预测预后的重要指标。 2 ) p5 3免疫组化检测不能作为浸润性小叶癌的有用指标 ,需探讨其它的检测方法。 3)进一步显示浸润性小叶癌与来源于导管上皮的乳腺癌的某些生物学特征可能不同。

乳腺癌组织中核转录因子NF-κB和抑癌基因p53的表达及其意义

目的探讨乳腺癌组织中核转录因子NF-κB和抑癌基因p53的表达及意义。方法用免疫组织化学方法检测NF-κB p65和p53蛋白在58例乳腺癌和20例乳腺增生症组织中的表达。结果乳腺癌中NF-κB表达明显高于乳腺增生症组织,NF-κB表达强度与组织学分级和腋窝淋巴结转移有关,与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型无关。乳腺癌中p53蛋白表达明显高于乳腺增生症,p53蛋白的表达与乳腺癌组织学分级有关,与患者年龄、肿瘤大小、组织学分型、淋巴结转移无关。NF-κBp65与p53蛋白在乳腺癌组织中表达呈正相关(r=0.302,P<0.05)。结论提示乳腺癌中NF-κB和p53蛋白的表达与乳腺癌的发生发展有关。

人乳腺癌全套抗体可变区基因的扩增与克隆

目的 扩增人乳腺癌抗体全套可变区基因 ,将其克隆到T载体来构建T载体文库。方法 收集乳腺癌患者外周转移淋巴结 30例 ,TRIzol法提取总RNA、纯化mRNA ,行RT PCR扩增 ,制备T载体 ,用于PCR产物的克隆。结果 总RNA纯度高 ,完整性好 ,mRNA获得率为 1%。经RT PCR ,VH、Vλ、Vκ的每一条 5 '端引物均与其相应的 3'端引物成功地扩增出了可变区基因片段 ,轻、重链T载体库分别为 1.7× 10 8和 3.5× 10 8。结论 所采用的引物能够10 0 %扩增目的片段 ,T载体过渡能显著提高克隆效率 ,为噬菌体抗体库的构建和筛选奠定了基础。