短发夹状RNA抑制GCS基因在人乳腺癌细胞的表达及逆转其多药耐药

目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用。方法设计2对GCS基因编码的反向重复序列,中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER。转染乳腺癌细胞,Westernblot和免疫细胞化学方法测定GCS表达。Westernblot、比色法检测细胞内caspase-3的表达,流式细胞仪分析细胞凋亡率。四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度。结果酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功。转染后GCS蛋白含量分别下降80%和82%,GCS表达阳性率降低为18·1%和16·7%。caspase-3表达和活性均显著增强,细胞凋亡率明显增加,细胞对化疗药物耐药性有明显下降。结论shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达,并可提高其对多种化疗药物的敏感性。

DNA甲基化抑制物对雌激素受体β在乳腺癌细胞中表达的影响及意义

目的:研究甲基化抑制物作用于乳腺癌细胞后对其ER-β表达的影响及意义。方法:抽取细胞总RNA,采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7与MDA-MB-231中ER-β的表达状况。在两种细胞中按作用浓度加入甲基化抑制药物5-AZA-CdR,反应一定时间后用RT-PCR的方法测定药物处理后ER-β的表达情况,分析影响及意义。结果:MCF-7的ER-β平均表达水平(0.54±0.44),药物处理后平均表达水平(0.76±0.53),较未经药物处理的细胞明显升高(P<0.05);MDA-MB-231是雌激素受体阴性的细胞株,不表达ER-β,药物处理后ER-β出现表达平均水平为(0.32±0.11),P<0.05。结论:DNA去甲基化可以诱导ER-β表达增强或再表达,对于提高乳腺癌的内分泌治疗疗效和指导新辅助化学治疗有重大意义。

人类白细胞分化抗原133与乳腺浸润性导管癌临床病理特征的关系

目的 研究肿瘤干细胞标志物人类白细胞分化抗原（CD）133在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系.方法 收集2001年1月至2005年12月间承德市肿瘤医院和承德医学院附属医院肿瘤科的102例乳腺浸润性导管癌组织,采用免疫组织化学方法检测其CD133蛋白表达,并用χ^2验或Fisher确切概率法分析CD133表达与临床病理因素的关系.结果 乳腺浸润性导管癌组织不同程度地表达CD133.不同肿瘤直径组间CD133阳性表达率差异有统计学意义（χ^2=7.476,P=0.024）,其中肿瘤直径〉2～5 cm组CD133阳性表达率明显高于肿瘤直径≤2 cm组[56.72%（38/67）比26.09%（6/23）,χ^26.429,P＆lt;0.012].不同组织学分级间相比,CD133阳性表达率的差异也有统计学意义（χ^26.274,P=0.043）.并且,有淋巴结转移者CD133阳性表达率比无淋巴转移者高[64.71%（22/34）比39.71%（27/68）,χ^25.675,P=0.017）].乳腺浸润性导管癌组织中,CD133阳性表达率在不同年龄、不同临床分期之间差异无统计学意义（χ^20.177,P=0.674;χ^22.874,P=0.242）.结论 CD133有可能作为判断乳腺浸润性导管癌侵袭转移的指标.