海藻糖高产株Brevibacterium sp SY361海藻糖磷酸化酶(EC2.4.1.64)的纯化

目的研究分离纯化海藻糖高产株Brevibacterium sp SY361中海藻糖磷酸化酶的工艺,获得高纯度的海藻糖磷酸化酶。方法大量培养细菌Brevibacterium sp SY361,超声粉碎细胞,通过硫酸铵分级沉淀、DEAE-SephadexA-25柱层析和Sephadex G-200凝胶过滤等步骤纯化其海藻糖磷酸化酶,并通过SDS-PAGE检测纯化效果。结果经纯化后的海藻糖磷酸化酶纯度提高了35.6倍,比活力达到7.48U/mg,SDS-PAGE呈1条带。结论纯化后的海藻糖磷酸化酶已达到纯度要求,可用于酶性质的研究。

微生物短杆菌(Brevibacterium sp.)选择性降解制备(R)-扁桃酸

以外消旋扁桃酸为底物,筛选出一株短杆菌Brevibacteriumsp.CCSYU10011,该菌能转化外消旋扁桃酸为(R)-扁桃酸.用全细胞转化法研究发现,其转化过程是不对称降解过程,即选择性降解了(S)-扁桃酸,进而获得(R)-扁桃酸.考察了温度、pH、底物浓度及细胞量等因素对(S)-扁桃酸降解的影响,转化结束后,收率为48.7%,对映体过量值(e.e.)可达99%.

仿刺参共附生放线菌Brevibacterium sp.中的环二肽成分的分离和鉴定

目的对仿刺参共附生放线菌Brevibacterium sp.的次生代谢产物进行研究。方法运用硅胶柱色谱、Seph-adex LH-20凝胶柱色谱、高效液相色谱(HPLC)等现代色谱技术对放线菌的乙酸乙酯提取物进行分离纯化,在核磁共振(NMR)、质谱(MS)等现代波谱技术及与文献比对的基础上对其结构进行鉴定。结果共分离得到7个环二肽类化合物,分别鉴定为:环-(L-脯氨酸-L-苯丙氨酸)(1)、环-(L-脯氨酸-L-甲硫氨酸)(2)、环-(L-脯氨酸-L-酪氨酸)(3)、环-(L-脯氨酸-L-缬氨酸)(4)、环-(L-脯氨酸-L-脯氨酸)(5)、环(L-缬氨酸-甘氨酸)(6)、环-(L-脯氨酸-L-亮氨酸)(7)。结论本研究是对仿刺参共附生微生物次生代谢产物研究的首次报道,这7个化合物均为首次从放线菌Brevi-bacterium sp.中分离得到。

谷氨酸产生菌──短杆菌（Brevibacterium sp．）的液氮保藏

以甘油作保护剂，用程序控制降温仪控制降温速率，对谷氨酸产生菌短杆菌（Ｂｒｅ－ｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍｓｐ．）Ｆ９１１４衍生菌株进行液氮保藏。分别取保藏３～５个月的菌种进行形态观察，未见明显改变。经液氮保藏的菌种和按常规分纯的菌种进行发酵生产的比较，结果表明液氮保藏的菌种较常规的菌种发酵周期短１．４７％，产酸水平和转化率分别高２％和３．９％。由于液氮保藏能使菌种的主要特性稳定，不需再次分纯，保证随时提供优良菌种用于发酵生产。同时，这种方法避免了因传代过多菌种退化之弊病。

短杆菌(Brevibacteriumsp WX-10)产酶条件研究

研究了碳源、氮源、无机盐、金属离子等培养基组成和初始pH、通风量、温度等发酵条件对短杆菌(Bre vibacteriumspWX 10)产酶的影响,通过正校试验优化得到的产酶培养基组成及发酵条件:蔗糖1%,NaCl2 5%,牛肉膏0 05%,NaNO30 05%,pH7 5,500mL三角瓶装培养基50mL,30℃于220r/min旋转式摇床上培养72h.在该培养条件下WX 10产酶量是原培养条件下的1 85倍.

COLONIZATION OF VIGNA RADIATA ROOTS BY CHROMIUM RESISTANT BACTERIAL STRAINS OF OCHROBACTRUM INTERMEDIUM,BACILLUS CEREUS AND BREVIBACTERIUM SP.

The present study deals with colonization potential of plant growth promoting bacterial strains (Ochrobactrum intermedium, Bacillus cereus and Brevibacterium sp.) on Vigna radiata roots. The roots were heavily colonized with O. intermedium and B. cereus as compared to Brevibacterium sp. O. intermedium mainly colonized rhizoplane while B. cereus occurred both on the rhizoplane and near root zone. O. intermedium and B. cereus were found to be present both on the rhizoplane and near root zone, while Brevibacterium only in the rhizosphere in the form of groups. The cells of B. cereus were found more in the sites where root exudates were existed. From the above results it was observed that the number of O. intermedium cells were large at root exudate site. Fig 2, Tab 1, Ref

一株新的拮抗细菌短杆菌(Brevibacterium)M菌株及其在作物上应用的效果初探

1985年5月在杭州市石桥乡长果种黄麻品比田土壤中,筛选出一株拮抗性细菌M菌株,经初步鉴定为短杆菌属(Brevibacterium),室内拮抗性测定及平皿土壤防病试验表明,此菌对黄麻立枯病菌(Rhizoctoni solani Kuhn)有显著的效果;大田防病试验结果,对早稻烂秧及纹枯病、黄麻立枯病、红麻炭疽病均有良好的防效,其中尤以对早稻烂秧和纹枯病更突出。

南海珊瑚montipora sp.内生细菌Brevibacterium sp.中的环二肽成分研究Ⅱ

目的对南海珊瑚montiporasp.内生细菌Brevibacteriumsp.化学成分进行研究。方法采用硅胶柱色谱,Sephadex LH-20凝胶柱色谱,高效液相柱层析等分离手段对珊瑚内生细菌Brevibacteriumsp.发酵液的乙酸乙酯提取物进行分离纯化,采用NMR、质谱(MS)等现代波谱解析手段,并与文献对照,鉴定化合物结构。结果分离得到12个已知的环二肽类化合物,其结构分别为环(色-苏)二肽(1)、环(4-羟基-脯-酪)二肽(2)、环(亮-酪)二肽(3)、环(苯丙-丙)二肽(4)、环(异亮-甘)二肽(5)、环(亮-甘)二肽(6)、环(亮-脯)二肽(7)、环(亮-丙)二肽(8)、环(异亮-丙)二肽(9)、环(亮-苏)二肽(10)、环(异亮-缬)二肽(11)、环(异亮-异亮)二肽(12)。结论所有化合物均首次从Brevibacterium属中分离得到。

低温环境微生物灌入法修复砂浆效果及性能研究

为解决低温环境下常用微生物生长活性降低而导致对混凝土的修复能力减弱的问题,本文采用灌入法研究了嗜温和耐寒细菌及两者组合在室温和低温下对砂浆裂缝的修复效果,并通过对比修复前后砂浆试件的抗折和抗压强度,对不同细菌和矿化液组合的修复效果进行了定量评价。结果表明,细菌对砂浆裂缝的修复效果与其在不同温度下的生长活性相关,与嗜温的巴氏芽孢杆菌fwzy14相比,耐寒短杆菌A779在常温和低温下均具有较强的生长活性,因此在试验温度下表现出更强的修复能力。当以硝酸钙作为钙源时,A779可以通过有氧呼吸和硝酸盐还原两种方式代谢,可以在裂缝深处缺氧区域生长代谢,从而对裂缝进行深度修复。

耐寒短杆菌SDB5对小白菜农艺性状及营养品质的影响

为了研究耐寒短杆菌SDB5对小白菜生长及营养品质的影响,本试验以小白菜(小杂55)为材料,用SDB5菌和清水分别处理种子后,播种待植株成熟后对小白菜的农艺性状、叶绿素及营养品质进行测定,探究该菌株对小白菜以上指标的影响。试验结果表明:与对照相比,使用了SDB5菌的小白菜株高、根鲜(干)重、成叶数、叶鲜(干)重、叶柄鲜(干)重、根冠比都增加,其中株高差异显著,其余差异均不显著。产量增加9.63%,说明该菌株对小白菜有一定增产效果。小白菜的主要营养品质指标中维生素C含量显著提高、硝酸盐含量显著降低,可溶性蛋白略有提高,叶绿素,还原性糖,淀粉、纤维素含量等略有降低,但差异均不显著。说明耐寒短杆菌SDB5使小白菜的营养品质在一定程度上得到了改善。

甾短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中的表达

为了实现胆固醇氧化酶在大肠杆菌中的表达,将甾短杆菌Brevibacteriumsp.DGCDC-82胆固醇氧化酶基因用PCR的方法去掉信号肽序列,连接到质粒pTrc99a,通过筛选得到了表达胆固醇氧化酶的重组菌JM109/pTrc99a-COD。经IPTG诱导后表达出相对分子质量约为5.5×104的蛋白质。分别考察了诱导温度、时间、IPTG浓度等因素对重组菌表达的胆固醇氧化酶的影响。在优化条件下,该胆固醇氧化酶的酶活可以达到700 U/L。酶学特性分析表明其反应的最适pH为7.5,最适温度为40℃。

胆固醇氧化酶基因的克隆及在E.coli中的表达

根据NCBI中报道的BrevibacteriumsterolicumATCC21387胆固醇氧化酶基因序列,采用PCR方法以Brevibacteriumsp.DGCDC-82的基因组为模板,扩增得到了编码胆固醇氧化酶的基因,该基因与来源于BrevibacteriumsterolicumATCC21387的胆固醇氧化酶基因(choB)同源性为98%。将得到的基因定向克隆到pET28a载体中,转化至含有编码argU和proL基因的大肠杆菌BL21-CodonPlus(DE3)-RP中表达。经过IPTG诱导后,经SDS-PAGE检测在约55kD处有一蛋白表达条带,目的蛋白表达量约占总蛋白的16%,经测定酶活为340U/L。

信号肽对短杆菌胆固醇氧化酶基因在大肠杆菌中表达的影响

从Brevibacterium sp.DGCDC-82染色体DNA中扩增出含信号肽序列的胆固醇氧化酶结构基因,插入大肠杆菌表达载体pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-COD(s+)。以pET28a-COD(s+)为底物,扩增出不合信号肽的胆固醇氧化酶结构基因,构建成重组质粒pET28a-COD(s-)。两种重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)通过IPTG诱导均获得活性表达,SDS-PAGE分析,目的产物表达量都占到了细胞总蛋白的50%以上,Brevibacterium sp.DGCDC-82胆固醇氧化酶的信号肽对重组酶的空间构象和表达量并没有太大的影响。

胆固醇氧化酶的发酵条件及酶学性质研究

Brevibacterium sp．可以发酵生产胆固醇氧化酶,实验中对该菌种进行了底物诱导及发酵条件的优化, 确定其最适培养基为(%)：蔗糖0．3,酵母膏0．2,蛋白胨0．3,牛内膏0．3,K_2PO_4 0．1,MgSO_4 0．05,pH6．8。最适培养条件为：接种量5%,24℃培养20h,通气量为50mL 培养基/250mL 三角瓶,200r/min。在最适培养基及最适条件下,胆固醇氧化酶的酶活力可达到24．01U/mg,比未优化前1．71U/mg 提高了14倍。该酶具有较强的酸碱稳定性和热稳定性,最适 pH 为6．5,最适温度为54℃。在最适 pH 和温度条件下测得该酶 km 值为7．1 ×10^(-5)mol/L。

一株乙二醇氧化酶菌株的筛选及催化特性的初步研究

利用富集培养技术从土壤中筛选获得1株高活性二醇氧化活性菌株Brevibacterium sp.CCZU12-1。以Brevibacterium sp.CCZU12-1静息细胞为催化剂,最适催化反应温度、反应pH和金属离子添加量分别为30℃、6.5和Mn2+0.1 mmol/L。在最佳条件下,转化200 mmol/L乙二醇24 h,羟基乙酸的产率为94.6%,分批补料乙二醇5批,羟基乙酸的累积浓度为972 mmol/L。

发酵法生产L-异亮氨酸的溶氧控制策略

研究了溶氧对Brevibacterium lactofermentation分批发酵生产L-异亮氨酸(Ile)的影响,提出了前10h恒700r/min以维持溶氧在35%以上,10h后调至600r/min以维持溶氧在15%～20%的两阶段供氧控制模式。与对照相比,获得了较高的产率(0.094g/g)和糖耗速度(4.76g/L·h),在较短时间内(52h)获得较高的Ile产量(23.3g/L),比结果最好的单一搅拌转速(600r/min)提高11.6%。生产强度(0.448g/L·h)比恒定搅拌转速(500、600、700、800r/min)控制下的过程分别提高了83.6%、28.7%、44.9%、35.7%。最后采用代谢通量分析对该结果产生的原因进行了定量解释。

原生质体融合选育L-亮氨酸高产菌的研究

以黄色短杆菌TQ5 35 1(Met- +Ile- + 2 TAr+SGr)和TQ5 35 6(Met- +Ile- +α ABr+ β HLr)为亲株 ,采用原生质体融合技术 ,定向选育出一株L 亮氨酸高产菌TQ980 6(Met- +IleL + 2 TAr+SGr+α ABr+ β HLr) ,该菌株经 5L罐分批发酵 64h产L 亮氨酸2 2 7g/L。

优势短杆菌对多环芳烃的降解性能

本研究从长期被焦化废水污染的污泥中分离出一株优势短杆菌 .研究该菌株及其在无机离子存在下对蒽、菲、芘的降解性能 .结果发现该菌株对蒽、菲、芘均有良好的降解效果 ,Fe3 + 对降解过程有促进作用 ,反应 1 0h后 ,蒽、菲、芘转化率分别可达约 75 % ,87% ,及 62 % .总有机碳 (TOC)的测定结果表明 ,该菌株在 1 0 6h内能分别将反应瓶中加入的蒽、菲、芘所产生的总有机碳去除 5 0 %、90 %及 5 0 %

营养及环境条件对黄色短杆菌WL-10发酵生产L-异亮氨酸的影响

研究了能积累 L 异亮氨酸的黄色短杆菌WL 10的菌体生长规律 ,并讨论了葡萄糖、玉米浆以及磷酸盐等几个主要的营养物质对其积累L 异亮氨酸的影响 ,确定了较优的发酵条件为 :葡萄糖 12 % ,(NH4) 2 SO42 % ,玉米浆 2 % ,KH2 PO40 1% ,MgSO40 0 5 % ,CaCO33% ,种龄 9h ,接种量为 6 %。在此条件下 72h摇瓶产酸可达 2 3%左右。在上述基础上 ,研究了不同温度对WL 10积累L 异亮氨酸的影响 ,提出了分阶段变温控制的操作模式 ,即 0～2 5h ,培养温度为 31℃ ,2 5h后将温度降为 2 8℃ ,采用 5L罐实验 6 0h可积累L 异亮氨酸2 5 %。