儿童卡他莫拉菌感染的临床特征、耐药性及BRO基因特征分析

目的分析儿童卡他莫拉菌感染的临床特征、耐药性及BRO基因特征。方法回顾性分析2020年1月至2022年12月本院确诊为卡他莫拉菌感染儿童的临床特征,分离培养出的卡他莫拉菌耐药结果,通过PCR结合限制性内切酶分析方法对菌株进行BRO基因特征分析。结果531株卡他莫拉菌中,29 d~6个月幼儿(33.15%)和3~6岁学龄前儿童(29.76%)占比较高;秋季(9~11月)和冬季(12月至次年2月)易感染,分别占比37.48%和36.53%,差异均有统计学意义(P<0.01);531株卡他莫拉菌均检出β-内酰胺酶;氨苄西林(100%)、复方新诺明(75.14%)敏感率低,阿莫西林/克拉维酸和头孢噻肟未发现耐药;478株为BRO-1型,53株为BRO-2型;BRO-1型菌株对头孢呋辛、头孢克洛的不敏感率分别为82.64%和79.92%,高于BRO-2型的5.67%和5.67%,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论学龄前儿童(3~6岁)易在秋冬季(9~11月和12月至次年2月)发生卡他莫拉菌感染,BRO-1型为主;BRO-1型菌株对β-内酰胺类抗生素不敏感率明显高于BRO-2型菌株。

家蚕核型多角体病毒广东株bro基因家族分析

对BmNPV广东株进行了空斑纯化,并对该基因组的bro基因家族进行克隆,获得4个bro基因序列(bro-a、bc、、d),与GenBank数据库中BmNPVbro基因序列及本实验室测定的重庆株的bro基因序列进行比较分析,结果表明广东株BmNPVbro基因存在插入及缺失,其氨基酸的改变主要发生在对应蛋白的N端部分;同时进行的bro基因的系统发生分析表明,广东株bro基因分别位于3个亚组中,广东株bro-d与日本T3、重庆CQ1株bro-d以及法国SC7株bro-Ⅲ属于亚组A,广东株bro-a、c与T3、CQ1株bro-a、c以及SC7株bro-Ⅱ属于亚组B,广东株bro-b与T3、CQ1株bro-b、e以及SC7株bro-Ⅰ属于亚组C,bro基因进化与地理位置的相关性不明显。根据bro基因在四个不同株系基因组中的位置特征,进一步支持了Kang等的观点:bro-d是BmNPV生存所必需的,bro-a和bro-c相互间功能互补。同时推测:SC7株的3个bro基因可能是BmNPVbro家族出现的最简约形式。

家蚕核型多角体病毒bro基因的单核苷多态性研究

bro(baculovirus repeated ORFs)基因家族是一类存在于核型多角体病毒中比较复杂的基因家族。家蚕核型多角体病毒T3BmNPV基因组中有5个bro基因,分别为bro-a,bro-b,bro-c,bro-d,bro-e。对我国的BmNPVCQ1株进行了全基因组测序,与T3序列比较发现两个差异较大区域,分别命名为V1,V2区。在此基础上,对来自国内不同地区的另外5株BmNPV分离株对应的差异区域进行了研究,克隆了包含15个bro基因的10个DNA片段,其中包含了5个bro-c基因序列,5个bro-d基因序列,4个bro-e基因序列,加上公共数据库中已有的2个bro-c、2个bro-d、1个bro-e,合并后对bro-c、bro-d、bro-e分别进行核苷酸多态性分析,结果表明bro-c、d、e类基因都存在高密度的SNP位点。出现在这3类基因中的单核苷酸位点或核苷酸片段的插入/缺失数目分别为9、1、1。(θ,π)分析表明bro-c类基因的多态性在3类bro基因中最高。Tajima’D检验结果说明这些核苷酸变化符合中性突变假说。Pi(a)/Pi(s)分析暗示bro-c,bro-d和bro-e的N端的一些区段受到正向选择。

儿童携带卡他莫拉菌的耐药性及bro基因分型研究

目的对儿童携带214株卡他莫拉菌分离株产酶率和9种抗生素敏感性测定,研究产酶株β-内酰胺酶耐药基因特征。方法采用英国抗生素化疗学会(BSCA)琼脂稀释法进行抗生素最小抑菌浓度测定;用Nitrocefin纸片琼脂扩散法检测β- 内酰胺酶;PCR扩增结合限制性内切酶分析方法对分离株进行bro基因分型。结果214株卡他莫拉菌中β-内酰胺酶产酶率为94.4%。产酶株对β-内酰胺类抗生素:氨苄西林、头孢呋辛、头孢克洛的MlC90分别为32 mg/L、2 mg/L和8 nag/L,明显高于非产酶株的0.5 mg/L,10 mg/L和0.5 mg/L;产酶株对氨苄西林、头孢呋辛、头孢克洛耐药率分别为95%、46.5%和76 2%,明显高于非产酶株组(0%)(x2=100.889,8.159,28.961 P均<0 001);产酶株与非产酶株组对头孢噻肟、非β-内酰胺类抗生素红霉素、环丙沙星、氯霉素和四环素敏感性无显著差异,其总体敏感性分别为100%、95.8%、100%、100%、34.1%,所有分离株对复方磺胺甲(口恶)唑产生耐药(100%),MIC50和MIC90高达32 mg/L和128 mg/L。202例产酶株经bro基因分型,69.8%(141/ 202)为bro—Ⅰ型,30.2%(61/202)为bro-Ⅱ型。bro-Ⅰ型携带菌株对β-内酰胺类抗生素的MIC50和MIC90高于bro-Ⅱ型的耐药株。结论北京地区携带的卡他莫拉菌β-内酰胺酶产酶率较高。

棉铃虫单核衣壳核多角体病毒3个bro基因的原核表达与抗体制备

根据棉铃虫单核衣壳核多角体病毒(HaSNPV)基因组全序列,设计引物,用PCR的方法扩增得到bro-a、bro-b和bro-c三个全长基因。将这三个基因的片段分别克隆至原核表达载体pProExHTb,经IPTG诱导,在E.coli DH50菌株中得到了目的基因的高效表达。表达的目的蛋白大小分别为32kDa、64kDa和58kDa,经SDS-PAGE分离纯化,免疫新西兰大白兔制备了多克隆抗体。抗体经1∶2500倍稀释后用于WestemBlot分析,获得特异性显色信号,所制备的三种抗体适合用作bro基因的功能的进一步研究。

急性下呼吸道感染患儿卡他莫拉菌耐药性与bro基因分型研究

目的探讨上海地区急性下呼吸道感染患儿卡他莫拉菌分离株产酶率和耐药情况,研究产β内酰胺酶株耐药基因特征。方法对2007年1—12月上海交通大学附属儿童医院收治的下呼吸道分泌物卡他莫拉菌培养阳性的28例患儿,采用琼脂稀释法进行抗生素最低抑菌浓度测定;用Nitrocefin纸片法检测β内酰胺酶;PCR扩增结合限制性内切酶分析方法对分离株进行bro基因分型。将bro-1基因阳性和bro-2基因阳性菌株对β内酰胺类抗生素的耐药性进行比较。结果(1)28株卡他莫拉菌中β内酰胺酶产酶率为100%。产酶株对孢呋辛、头孢克洛、头孢曲松的MIC90值分别为4、8、0.5mg/L;对克林霉素及阿奇霉素的MIC90值均为64mg/L,左氧氟沙星是最敏感的抗生素。(2)bro基因分型结果:27株为bro-1型,仅1株为bro-2型。(3)β内酰胺类抗生素对bro-1型携带菌株的MIC50和MIC90值明显高于bro-2型耐药株。结论上海地区急性下呼吸道感染患儿卡他莫拉菌分离株呈高产β内酰胺酶,以携带bro-1基因为主,而β内酰胺类抗生素对bro-1型携带菌株的MIC50值明显高于bro-2型耐药株。

山东临沂地区下呼吸道感染患者卡他布兰汉菌耐药性分析及bro基因分型检测

目的：分析山东临沂地区下呼吸道感染患者痰液样本中分离的卡他布兰汉菌对常用抗菌药物的耐药性及bro基因分型对耐药性的影响。方法连续收集2010年1月至2014年12月山东省临沂市人民医院镜检合格的下呼吸道感染患者痰液样本，将其分别划线接种于4块不同琼脂培养基进行细菌分离培养及鉴定。对分离出的卡他布兰汉菌进行药敏试验和β-内酰胺酶检测，同时采用PCR扩增结合限制性内切酶分析法对分离株进行bro基因分型。采用χ^2检验比较不同bro基因型菌株对抗菌药物的耐药率。结果5年来共分离出497株卡他布兰汉菌，以冬季检出最多（共221株）。所有菌株对厄他培南和氯霉素完全敏感，对阿莫西林／克拉维酸和头孢呋辛耐药率较低（≤2.8％），对复方磺胺甲噁唑、红霉素和氨苄西林的耐药率较高，为47．6％-89．8％，且呈逐年增加趋势，但差异无统计学意义（P＞0．05）。共检出产β-内酰胺酶卡他布兰汉菌412株（412／497，82．9％），均为bro基因阳性菌株，bro基因阳性菌株对红霉素、复方磺胺甲噁唑、左氧氟沙星和氨苄西林的耐药率均高于bro阴性菌株（χ^2＝12．16、16．18、8．41和200．00，P＜0．05）。经bro基因分型发现，bro-1型菌株占94．9％（391／412），bro-2型菌株占5.1％（21／412），bro-1型与bro-2型菌株对常用抗菌药物的耐药率差异无统计学意义（P＞0．05）。结论临床分离卡他布兰汉菌产β-内酰胺酶阳性率较高，且多为bro-1型阳性株。菌株对碳青霉烯类抗菌药物、头孢菌素及β-内酰胺酶抑制剂敏感率较高，可作为治疗呼吸道卡他布兰汉菌感染的首选。

AcMNPV bro基因的表达和作用研究

bro基因(baculovirus repeated orf)是杆状病毒编码的一个独特的基因家族,一些病毒的基因组中编码有多个该基因家族的成员.研究分析了苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcMNPV)基因组仅有的一个bro基因,结果表明:AcMNPVbro基因(ac-bro)在感染后6h就开始转录,并在8h时检测到BRO表达;ac-bro基因敲除的重组病毒感染后子代病毒的效价略低于野生型病毒,且其DNA复制明显推迟.利用大肠杆菌中重组表达的Ac-BRO蛋白进行的体外实验提示其具有结合DNA的能力.这些结果提示ac-bro基因在病毒的复制中有一定的作用.

儿童呼吸道卡他莫拉菌感染状况及耐药性和耐药基因的研究

目的探讨儿童呼吸道感染卡他莫拉菌流行病学特点及其耐药性的现状,研究产β-内酰胺酶株耐药基因特征,指导临床诊断及治疗。方法对2014年3月—2015年2月份本院儿科门诊和住院部下呼吸道感染患儿的痰标本进行卡他莫拉菌分离培养,并进行鉴定及药敏试验。PCR扩增结合限制内切酶分析方法对分离株进行bro基因分型。结果(1)卡他莫拉菌分离率为13.50%,主要多见于4岁以下患儿,冬季为高发,混合感染率为46.20%,以混合肺炎链球菌最为多见。(2)分离的840株卡他莫拉菌的β-内酰胺酶的阳性率为92.50%,其中对阿莫西林/克拉维酸、复方磺胺甲恶唑、四环素的敏感性高达90%以上,但对红霉素、克拉霉素、阿奇霉素的非敏感性也在30%以上。(3)卡他莫拉菌bro基因分型结果:63株(7.50%)bro阴性,577株(68.70%)bro-1阳性,200株(23.81%)bro-2阳性。结论儿童呼吸道卡他莫拉菌的感染与年龄、季节有关,合并多种细菌的混合感染率较高,此次检出的卡他莫拉菌呈高产β-内酰胺酶,以携带bro-1基因为主。临床诊疗要密切监测卡他莫拉菌感染的流行病学特点及耐药情况。

棉铃虫核型多角体病毒Ha105的序列分析及敲除和回复菌株的构建

通过生物信息学方法对Ha105的生物功能进行预测,运用λ噬菌体Red重组系统介导的同源重组,在大肠杆菌BW25113中,用含有350 bp同源臂的氯霉素抗性基因和绿色荧光蛋白基因替换了棉铃虫病毒细菌人工染色体HaBacHZ8上的Ha105基因,然后利用Bac-to-Bac系统把Ha105回复到Ha105缺失的重组病毒上,构建了Ha105的缺失和回复重组病毒。生物信息学分析结果表明,Ha105是bro基因家族成员,含有Bro-N结构域,可能对宿主细胞的转录和病毒复制有一定影响。此外,重组病毒的PCR及酶切结果表明,成功构建了vHaHa105-KO-PH-gfp缺失菌株和vHaHa105-REP-PH-gfp、vHaHa105-REP-gfp回复菌株。该Ha105缺失及回复菌株的获得为进一步研究Ha105的功能奠定基础。

卡他莫拉菌研究进展

卡他莫拉菌是儿童上颌窦炎、中耳炎、肺炎等呼吸道感染的第3位常见致病菌，仅次于流感嗜血杆菌和肺炎链球菌，目前产酶耐药株比例已超过90％。卡他莫拉菌通过产生BRO内酰胺酶对青霉素耐药。卡他莫拉菌产生的内酰胺酶分为BRO-1、BRO-2及BRO-3，由染色体基因编码，而且编码基因较易在细菌间转移。与其他已知β内酰胺酶不同，BRO基因是卡他莫拉菌新近获取的外源基因，21个新突变发生于BRO基因的启动子。