广谱拮抗菌B96-Ⅱ的分子鉴定及GFP标记

用PCR方法扩增的广谱拮抗菌B96-Ⅱ的16S rDNA经序列测定和BLAST同源序列比较,结合传统的形态观察、生理生化特征鉴定,确定了B96-Ⅱ分类地位为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。将含有绿色荧光蛋白基因和氯霉素抗性基因标记的大肠杆菌一枯草芽孢杆菌穿梭表达载体(pNW33N-gfp-B96-Ⅱ-N)通过原生质体法转化B96-Ⅱ,获得表达GFP的4株标记菌株,在荧光显微镜下发出明亮的绿色荧光。室内平板抑菌试验结果表明,GFP标记对B96-Ⅱ的广谱抑菌活性没有影响。

以原生质体融合技术构建广谱抗噬菌体菌株

利用１５株不同品系的噬菌体作筛子筛选的噬菌体抗性自发突变株只对其相应的筛于噬菌体具抗性，为窄谱抗株。利用原生质体融合技术把北京棒杆菌７３３８与钝齿棒杆菌Ｔｓ－Ｌｉ进行融合得融合于ＺＧ８８，通过噬菌体吸附试验，血清学试验证明ＺＧ８８细胞表面结构发生了较大的改变，失去了噬菌体的吸附位点。因此ＺＧ８８是广谱稳定的噬菌体抗性菌株。