雄激素受体辅调节因子BAP18在大鼠睾丸细胞中的表达及其意义

目的:观察溴区PHD结构域转录因子(BPTF)相关蛋白18(BAP18)在睾丸细胞中的表达及其在雄激素受体(AR)信号通路过程中发挥的作用,阐明BAP18调控AR信号通路的具体靶基因,探讨BAP18在睾丸细胞中发挥的生物学功能。方法:收集大鼠睾丸支持细胞R2C和TM3及睾丸间质细胞TM4和15P-1,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各细胞中BAP18和AR mRNA表达水平,Western blotting法检测细胞中BAP18和AR蛋白表达水平,蛋白免疫共沉淀实验(co-IP)检测在睾丸R2C细胞中BAP18与AR之间的相互作用关系。在R2C细胞中采用带有FLAG标签的BAP18过表达质粒使BAP18过表达(BAP18过表达组)。荧光素酶双基因报告实验检测R2C细胞中荧光素酶活性。对照组采用PcDNA3空载质粒转染R2C细胞,RT-qPCR法检测BAP18过表达前后睾酮(T)和双氢睾酮(DHT)作用后R2C细胞中BAP18、AR、STAR、HSD3B1、CYP17A1和DDX25 mRNA水平,Western blotting法检测BAP18过表达前后T和DHT作用后R2C细胞中CYP17A1蛋白表达水平。结果:在睾丸间质细胞和支持细胞中均有BAP18表达,但AR主要在睾丸间质细胞中表达;在睾丸R2C细胞中BAP18与AR存在相互作用,且上调AR介导的基因转录。与对照组比较,在T和DHT作用下BAP18过表达组R2C细胞中CYP17A1 mRNA和蛋白表达水平升高(P<0.01)。在R2C细胞中同时外源转染定量BAP18表达质粒后,在DHT的作用下细胞中荧光素酶活性升高近3倍,而在T的作用下,细胞中荧光素酶活性升高1.5倍。过表达BAP18后,BAP18过表达组R2C细胞中AR、STAR、HSD3B1和DDX25 mRNA表达水平与过表达前比较差异无统计学意义(P>0.05),而CYP17A1 mRNA表达水平高于过表达前(P<0.05);T和DHT作用后,R2C细胞中CYP17A1 mRNA表达水平均高于T和DHT作用前(P<0.05)。在细胞中过表达BAP18后,T和DHT作用后细胞中CYP17A1蛋白表达水平明显高于T和DHT作用前(P<0.05),但T和DHT刺激前后细胞中DDX25蛋白表达水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:BAP18可以在睾丸间质细胞中与AR相互作用并调控AR信号通路重要靶基因CYP17A1,可能参与睾丸间质细胞的生理过程。