一株云南木霉菌培养条件的优化及其对茶炭疽病的防控研究

为优化对茶炭疽病菌Colletotrichum camelliae有拮抗作用的云南木霉菌Trichodema yunnanense的发酵培养条件,并明确发酵液对茶炭疽病的防控效果,以对C.camelliae的抑菌率为评价指标,通过单因素和响应面试验,优化云南木霉菌的发酵条件并获得发酵液,比较其对茶炭疽病的抑菌活性、离体叶片和盆栽茶树叶片防效及茶树生长的影响。结果显示,T.yunnanense的最佳发酵条件为马铃薯200 g·L^(-1)、甘露醇18.85 g·L^(-1)、酵母浸膏4.73 g·L^(-1)、装液量372.60 mL·L^(-1)、培养温度25℃、pH 6.6、12L∶12D。10%的发酵液对C.camelliae的抑菌率达92.61%,对感染茶炭疽病的离体茶树叶片与盆栽茶树叶片的防效分别为63.71%与68.95%,均显著高于哈茨木霉菌(T.harzianum)可湿性粉剂与多菌灵的防效。同时,10%发酵液处理后的茶树幼苗根长提升69.16%,根鲜重提升215.70%,株高增加42.13%,地上部鲜重增加212.11%。表明T.yunnanense发酵液兼具抗菌和促生作用。研究结果为T.yunnanense在茶炭疽病生物防治中的应用奠定了一定的理论基础。

比较3种微量肉汤稀释法检测念珠菌对氟康唑的敏感度

目的比较3种肉汤稀释药敏检测方法检测念珠菌对氟康唑敏感度的检测能力。方法收集河北医科大学第二医院临床分离的念珠菌84株,采取经典微量肉汤稀释法、ATB FUNGUS 3方法和Yeast One真菌药敏板方法检测念珠菌对氟康唑的敏感度。结果84株念珠菌中,白念珠菌26株,热带念珠菌34株,光滑念珠菌22株以及近平滑念珠菌2株。以经典微量肉汤稀释法为参考方法,ATB FUNGUS 3方法的敏感度为87.5%,特异度为100.0%;基本一致性为95.2%,分类一致性为92.9%;假耐药率为7.1%,假敏感率为0。Yeast One方法的敏感度为100.0%,特异度为94.4%;基本一致性和分类一致性均为97.6%,假敏感率和假耐药率均为0。结论Yeast One真菌药敏板方法检测氟康唑对念珠菌活性优于ATB FUNGUS 3方法。

响应面法优化枇杷发酵液发酵条件

该试验以枇杷汁为原料、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)为发酵菌株,制作枇杷发酵液。在单因素试验基础上,以感官评分为响应值,利用响应面法优化枇杷发酵液的发酵条件。结果表明,枇杷发酵液最佳发酵条件为白砂糖添加量6%、发酵时间72 h、发酵温度37℃、接种量6%,以此优化条件得到的枇杷发酵液感官评分为91分,总黄酮含量为8.90 mg/100 mL,维生素C含量为1.05 mg/100 g,总酚含量为11.56 mg/100 mL,超氧化物歧化酶(SOD)活力为36.70 U/mL,制备的枇杷发酵液澄清透明,酸甜可口,具有较高的营养价值,为枇杷的深加工产业及其衍生产品的开发提供参考依据。

MALDI-TOF MS直接靶板微滴生长测定法在CRKP快速检测中的应用

目的探讨基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的直接靶板微滴生长测定(DOT-MGA)法快速筛查碳青霉烯类耐药肺炎克雷伯菌(CRKP)的准确性和临床应用价值。方法收集2020—2021年连云港市第一人民医院肺炎克雷伯菌临床分离株251株,其中美罗培南敏感123株,CRKP128株。采用DOT-MGA法对4和6μL 2种取样量的所有菌株进行美罗培南耐药性检测。采用微量肉汤稀释法测定菌株的美罗培南最小抑菌浓度(MIC)。以微量肉汤稀释法耐药性分析结果为标准,评价DOT-MGA法耐药性检测结果的准确性。结果以微量肉汤稀释法为标准,孵育生长4 h后,DOT-MGA法2种取样量的敏感性和阴性预测值均为100.0%,其中4μL取样量检测CRKP的特异性为92.5%,阳性预测值为92.8%;6μL取样量检测CRKP的特异性为89.8%,阳性预测值为90.1%。123株美罗培南敏感株的美罗培南MIC_(50)为0.125μg·mL^(-1),MIC_(90)为0.25μg·mL^(-1);128株美罗培南耐药株的MIC_(50)和MIC_(90)均为≥128μg·mL^(-1)。DOT-MGA法与微量肉汤稀释法的一致性分析结果显示,4μL加样量Kappa值为0.88,6μL加样量Kappa值为0.83。结论基于MALDITOF MS的DOT-MGA法筛查CRKP具有较高的准确性,且简便、快捷,可用于快速检测CRKP。

肉汤微量稀释法对耐多药结核分枝杆菌敏感性检测的评价

目的评价肉汤微量稀释(BMD)法在耐多药结核分枝杆菌(MDR-MTB)敏感性检测中的应用效果。方法采用罗氏比例法和BMD法对海南省108株MDR-MTB及11株非MDR-MTB菌株进行药敏试验,并对两种药敏方法检测结果不一致菌株进行全基因组测序(WGS)。结果罗氏比例法和BMD法药敏结果平均判读时间分别为28.0、8.5 d。罗氏比例法检测异烟肼、利福平、乙胺丁醇、卡那霉素和卷曲霉素的耐药率高于BMD法(均P<0.001);BMD法检测丙硫异烟胺和对氨基水杨酸的耐药率高于罗氏比例法(均P<0.001)。以罗氏比例法药敏结果为金标准,BMD法检测耐药性的灵敏度和特异度分别为50.00%~100%、95.69%~100%,除EMB(87.39%)、INH(94.96%)外,BMD法检测其他药物的耐药性符合率均≥95%。罗氏比例法药敏结果与WGS总符合率为76.19%(32/42),BMD法药敏结果与WGS总符合率为23.81%(10/42),差异具有统计学意义(χ^(2)=23.048,P<0.001)。两种药敏方法检测结果不一致的MTB共34株,罗氏比例法耐药+BMD法敏感的26株MTB中,22株(84.62%)相关耐药基因发生突变;罗氏比例法敏感+BMD法耐药的11株MTB中,5株(45.45%)相关耐药基因发生突变。结论BMD法是一种准确、快速的MDR-MTB敏感性检测方法,但仍需要进一步改进和优化,耐药性与相关耐药基因的突变密切相关。

蒙古蒿挥发油面膜乳液的美白和祛痘作用

利用微量肉汤稀释法和兔耳痤疮模型试验考察添加蒙古蒿挥发油面膜乳液的祛痘功效,并采用体外生物化学法检测其美白作用。结果显示,该面膜乳液对痤疮丙酸杆菌和金黄色葡萄球菌具有良好的抑制作用,对兔耳痤疮模型具有良好的治疗和修复皮损效果。美白验证试验结果表明该面膜乳液对DPPH自由基和酪氨酸酶具有较强的抑制作用。因此,蒙古蒿挥发油面膜乳液在化妆品市场上具有潜在的开发利用价值。

两种不同检测方法在孕晚期妇女B 族链球菌筛查中的应用

目的探讨不同检测方法在孕晚期妇女B族链球菌(GBS)筛查中的应用。方法选取在2022年1月~2023年4月于产前门诊进行B族链球菌筛查的孕妇,用随机数字表法筛选其中900例作为研究对象。以细菌培养法结合组合型特异性试验判断孕产妇的B族链球菌感染情况,采用GBS肉汤增菌培养法联合荧光定量聚合酶链反应(PCR)法+尿培养检测,对孕晚期妇女B族链球菌进行筛查。结果以细菌培养法为金标准,检出阳性103例,检出率为11.44%,阴道分泌物GBS肉汤增菌培养法联合荧光PCR检测检出阳性101例,检出率为11.22%。尿液GBS培养检出阳性82例,检出率为9.11%。阴道分泌物GBS肉汤增菌培养法联合荧光PCR检测、尿液GBS培养的敏感度分别为95.14%、69.90%,特异度分别为99.62%、98.74%,Kappa值分别为0.955、0.753,具有一致性。阴道分泌物GBS肉汤增菌培养法联合荧光PCR检测的敏感度、特异度及准确率明显高于尿液GBS培养(P<0.05)。结论阴道分泌物GBS肉汤增菌培养法联合荧光PCR检测的敏感度、特异度较尿液GBS培养高,诊断效能较高,能明显提升GBS的检出率。

响应面法优化天麻发酵液发酵工艺

以Box-Behnken中心组合响应面试验设计法,优化天麻发酵液的最优发酵工艺。以鲜天麻为原料,在单因素试验的基础上,建立发酵时间、菌种添加量以及初始pH值对活菌数影响的二次多项回归模型,并验证模型的有效性。结果显示,天麻发酵液的最优发酵工艺条件为发酵时间42 h、菌种添加量1.26%、初始pH5.5,以此条件得到的天麻发酵液中活菌数为8.7 lg(CFU/mL),与模型预测值基本吻合。实测结果与回归模型的相对误差为0.73%,说明采用响应面法优化得到的发酵条件可靠,有助于天麻发酵液衍生产品的深度开发。

湖南部分地区乳源金黄色葡萄球菌耐药性及溶血性分析

为调查湖南省部分地区奶牛场生鲜乳源金黄色葡萄球菌的耐药性及耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的检出情况,同时调查金黄色葡萄球菌溶血素基因型与溶血表型的分布情况及二者的关系。采用肉汤稀释法对分离自湖南省部分地区奶牛场生鲜乳的54株金黄色葡萄球菌进行18种常见抗菌药物耐药性检测,采用绵羊血琼脂平板检测细菌溶血性,并采用PCR方法扩增分离菌株mecA基因及5个溶血素基因。结果显示,54株金黄色葡萄球菌均表现不同程度的耐药,耐药谱型达21种;21株金黄色葡萄球菌表现为多重耐药,最高耐药重数为9重;对青霉素耐药最严重,耐药率达85.19%,对头孢西丁、苯唑西林、克林霉素、庆大霉素及大环内酯类药物(红霉素、替米考星)耐药率在20%~30%之间,对多西环素与万古霉素敏感;从24株分离菌中检出mecA基因,鉴定为MRSA。54株分离株在羊血琼脂平板上主要以β和γ溶血为主,α、β及γ溶血率分别为12.9%、44.4%和42.6%;各溶血素基因检出率分别为98.1%(hla)、94.4%(hlb)、96.3%(hld)、40.7%(hlg1)和98.1%(hlg2),所有菌株均能检测到3种及以上的溶血素基因。结果表明,湖南省部分地区生鲜乳源金黄色葡萄球菌耐药情况较为严重,存在部分比例的MRSA,且金黄色葡萄球菌溶血素基因型与溶血表型之间无明显对应关系。

患病牦牛和藏猪源沙门菌对氨基糖苷类、喹诺酮类和β-内酰胺类药物敏感性试验

为了解川西北高原牦牛和藏猪源沙门菌对氨基糖苷类、喹诺酮类和β-内酰胺类抗生素的耐药情况,本研究采用沙门菌选择培养基对采集的样本进行沙门菌分离,利用PCR扩增保守基因invA的方法进行沙门菌鉴定。采用微量肉汤释法对分离鉴定的沙门菌进行氨基糖苷类(庆大霉素、大观霉素、卡那霉素、妥布霉素、链霉素和阿米卡星)、喹诺酮类(沙拉沙星、环丙沙星、达氟沙星、恩诺沙星和萘啶酸)和β-内酰胺类(头孢噻呋)抗生素敏感性实验。试验结果显示,从198份肛拭子样本中分离鉴定得到24株沙门菌,分离率为12.12%。24株沙门菌对庆大霉素的耐药率最高,为66.7%,对链霉素和阿米卡星敏感。对大观霉素、萘啶酸、沙拉沙星、环丙沙星、达氟沙星、卡那霉素、妥布霉素、头孢噻呋和恩诺沙星耐药率分别为33.3%、33.3%、29.2%、25.0%、25.0%、16.7%、16.7%、16.7%和4.2%。分离的24株沙门菌牦牛和藏猪源沙门菌耐药性严重并存在多重耐药现象,临床上应强调加强沙门菌的耐药性检测以合理选用抗菌药物。

杜仲叶乙醇提取物抑菌试验

以大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、炭疽杆菌、枯草芽孢杆菌4种细菌和根霉、黑曲霉、青霉3种真菌为研究对象,通过打孔法和二倍稀释法探究了杜仲叶乙醇提取物在不同洗脱组分处理下,对上述细菌和真菌的抑菌效果和最大有效稀释倍数。结果表明:杜仲叶乙醇提取物乙酸乙酯部分、正丁醇部分各极性洗脱成分能够抑制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和炭疽杆菌生长,其中,对炭疽杆菌的抑制作用最好,最大抑菌圈直径可达到22.0 mm,但对枯草芽孢杆菌和3种真菌效果不明显。乙酸乙酯部分和正丁醇部分各极性洗脱成分的抑菌作用差别不大,对炭疽杆菌的最大有效稀释倍数可以达到32倍。

一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌临床菌株药物敏感性的效果评价

目的评价一种最小抑菌浓度检测试剂盒检测结核分枝杆菌(MTB)临床分离菌株对11种一、二线抗结核药物敏感性的效能。方法从2017年1月至2018年12月期间来自新疆不同地区4家结核病院的住院/门诊结核病患者的847株MTB临床分离菌株中,随机选取188株,采用一种最小抑菌浓度检测试剂盒(MYCOTB)检测其对11种一、二线抗结核药物的耐药性,以常规微孔板微量肉汤稀释法为对照方法,结合全基因组测序技术,评估MYCOTB法检测药物耐药性的灵敏度、特异度及两种表型药敏方法的一致性。结果以常规微孔板微量肉汤稀释法为标准,MYCOTB检测RFP、ETH、RFB、SM、INH、PAS、OFX、AMK、MFX、EMB和KM等11种药物耐药性的灵敏度分别为92.0%、88.6%、86.7%、84.6%、84.3%、75.0%、67.7%、57.4%、56.7%、56.5%和40.0%,特异度分别为97.1%、96.7%、96.2%、97.3%、90.0%、95.6%、96.1%、99.5%、91.1%、96.4%和100.0%,符合率分别为95.7%、95.2%、94.7%、94.7%、87.2%、94.7%、91.0%、97.9%、85.6%、91.5%和96.8%,Kappa值分别为0.89、0.84、0.81、0.84、0.75、0.52、0.68、0.66、0.47、0.57和0.87。对于两种表型药敏方法结果不一致的菌株,基因测序结果更支持MYCOTB的检测结果。结论MYCOTB检测MTB对11种一、二线抗结核药物耐药性具有良好的灵敏度和特异度,可用于MTB菌株耐药性的检测。

响应面法优化甘蔗芭蕉复合发酵液的制备工艺

以甘蔗和芭蕉为主要原料,利用酵母菌和乳酸菌复合发酵,以感官评分为评价指标,在单因素试验的基础上探究酵母菌和乳酸菌发酵对甘蔗芭蕉复合发酵液品质的影响,再分别通过响应面法和正交试验法对发酵工艺进行优化,并对该复合发酵液进行了抗氧化性能测定。结果表明:酵母菌发酵最优工艺条件为初始糖度16%,酵母菌添加量0.5%,发酵温度30℃,发酵时间22h;乳酸菌发酵最优工艺条件为乳酸菌添加量3.0%,发酵时间12h,发酵温度43℃。在此条件下制备的甘蔗芭蕉复合发酵液呈淡黄色,酸甜适口,香气协调,组织状态良好,产品的pH、可溶性固形物、总酸分别为4.2、13.5%、3.95 g/100mL,DPPH自由基清除率60.97%,对羟自由基清除率45.09%,超氧阴离子自由基清除率50.7%,说明该复合发酵液具有一定的抗氧化能力。

抗生素联合对反硝化细菌作用效果的确定方法

抗生素在地下水环境中被频繁检出,其对硝酸盐降解的反硝化作用产生不同程度影响已被多项研究证实,多种不同功能的抗生素联合作用越来越受到关注.本研究选取甘度反硝化细菌进行单一及联合药敏试验,探究了反硝化菌对喹诺酮类、四环素类、磺胺类、大环内酯类、林可霉素类抗生素的敏感性及抗生素的联合抑菌效果,对确定联合作用的方法进行了讨论.结果表明,微量肉汤稀释法与纸片扩散法测得反硝化细菌对单一抗生素的敏感性具有一致性,敏感性大小主要与抗生素的种类有关.在抗生素联合作用的试验中,纸片扩散法抑菌图形报告存在结果依赖于两圆盘之间的距离的问题,而微量肉汤稀释法存在结果解释方法及部分抑菌指数(FIC)标准不统一的问题.以棋盘法的实验结果为基础,通过比较单一与复合抗生素各孔中微生物差异确定抗生素作用关系,优化了微量肉汤稀释法.此外,进一步提出了微生物量测定法,解决了抗生素浓度设定的局限性问题.新方法通过拟合微生物生长曲线,可以更直观、更准确地解释复合抗生素之间的关系.本研究结果可为复合抗生素对水土环境中反硝化作用影响研究方法的选择和结果的确定提供参考.

肉汤纸片洗脱法和全自动药敏系统应用于黏菌素药敏试验的方法学评价

目的评估黏菌素肉汤纸片洗脱法(CBDE)和全自动药敏系统检测肠杆菌目细菌对黏菌素体外药敏结果的可靠性。方法选取2021年1—6月该院临床分离的肠杆菌目细菌133株,根据欧洲抗菌药物敏感性试验委员会(EUCAST)公布的黏菌素的折点判断标准,使用CBDE和两种全自动药敏系统检测分离株对黏菌素的最低抑菌浓度(MIC),以肉汤微量稀释法(BMD)为参考方法,分析3种方法和BMD的基本一致率(EA)、分类一致率(CA)、重大误差(ME)和非常重大误差(VME)。结果与BMD比较,CBDE、Phoenix NMIC-413和Vitek CompactⅡ-GN335检测大肠埃希菌对黏菌素敏感性的EA分别为98.5%、97.0%和98.5%,CA分别为100.0%、97.0%和98.5%,ME均为0.0%,VME分别为0.0%、28.6%和14.3%。与BMD比较,CBDE、Phoenix NMIC-413和Vitek CompactⅡ-GN335检测肺炎克雷伯菌对黏菌素敏感性的EA分别为97.0%、92.4%和92.4%,CA分别为100.0%、92.4%和92.4%,ME均为0.0%,VME分别为0.0%、10.9%和10.9%。结论CBDE可以作为微生物室检测肠杆菌目细菌对黏菌素敏感性的可靠方法。由全自动药敏分析系统判读为对黏菌素敏感的肠杆菌目细菌需使用BMD进行复核。

凯氏定氮法检测肉汤中蛋白质含量优化

目的优化凯氏定氮法检测肉汤中蛋白质含量的条件。方法采用控制变量法研究肉汤取样均匀性、取样量、消化条件等实验条件对凯氏定氮法检测肉汤中蛋白质含量的影响,以变异系数、精密度、加标回收率方法来评价优化方法的稳定性和准确性。结果优化后实验条件是肉汤过滤标准筛目数为40目、取样量为10 g、消化时间为90 min(420℃),加标平均回收率在99.66%~100.68%,离散系数小于2%。结论优化条件后检测肉汤中蛋白质含量的变异系数小,准确性良好,操作简单易行,适用于肉汤中蛋白质的含量的测定,对烹饪后食物测试方法的优化具有借鉴意义。

发酵液中HA含量分析方法的研究

比较了咔唑法、地衣酚法、阿利新蓝法和Bitter_Muir法等 4种分光光度法应用于分析透明质酸质量浓度的准确度和精确度 ,发现Bitter_Muir法适用于测定透明质酸质量浓度 ;同时探讨了糖分、蛋白质、酵母膏、无机盐等发酵液组成对Bitter_Muir法分析透明质酸质量浓度的影响 .结果表明 。

不同地区猪源和禽源大肠杆菌耐药性监测

2003--2005年自我国6省1市分离鉴定出133株猪源和455株禽源大肠杆菌临床株．采用微量肉汤稀释法测定了对20种抗菌药物的敏感性．结果表明，无论猪源还是禽源大肠杆菌对12种喹诺酮类药物耐药率非常高（耐药率范围34．96％-96．71％），对8种非喹诺酮类药物（除阿米卡星呈较低的耐药率外）也呈较高的耐药率（22．42％-94．07％）；多重耐药现象十分严重，3耐及3耐以上菌株占总菌株94％以上；不同地区来源菌株的耐药模式总体一致，但存在耐药水平高低的差异．

248株念珠菌和新型隐球菌对四种抗真菌药的敏感性

目的 检测 2 48株念珠菌和新型隐球菌对四种抗真菌药氯康唑、两性霉素B、5 氟胞嘧啶和酮康唑的耐药状况。方法 收集临床菌株新型隐球菌 6 0株和念珠菌 188株 ,采用NCCLSM2 7 A微量稀释法测定新型隐球菌和念珠菌临床分离株对四种抗真菌药物的最低抑菌浓度 (MIC)。结果 对 16 0株白念珠菌 ,氟康唑的MIC为 0 .0 6～≥ 6 4μg/ml,敏感 135株 ( 84.38% ) ,中度敏感 10株 ( 6 .2 5 % ) ,耐药 15株 ( 9.37% ) ;5 氟胞嘧啶的MIC为 0 .0 6～ 16 μg/ml ,敏感 15 6株 ( 97.5 % ) ,中度敏感 2株 ( 1.2 5 % ) ,耐药 2株 ( 1.2 5 % ) ;两性霉素B的MIC为 0 .0 6～ 4μg/ml全部敏感 ;酮康唑的MIC为 0 .0 3～ 32 μg/ml ,敏感 93.75 % ,中度敏感 6 .2 5 %。对 6 0株新型隐球菌 ,氟康唑的MIC 1～≥ 6 4μg/ml,敏感 35株 ( 5 8.4% ) ,中度敏感 2 0株 ( 33.3% ) ,耐药 5株( 8.3% ) ;5 氟胞嘧啶MIC 0 .2 5～ 8μg/ml,敏感 5 3株 ( 88.3% ) ,中度敏感 7株 ( 11.7% ) ;两性霉素B的MIC为 0 .0 6～ 0 .5 μg/ml全部敏感 ;酮康唑MIC 0 .0 3～ 4μg/ml全部敏感。热带念珠菌和光滑念珠菌对氟康唑耐药率分别为 10 %和2 2 .2 %。结论 新型隐球菌和念珠菌对氯康唑的耐药率趋高 ,临床不容忽视。

细菌药物敏感性实验方法研究进展

致病菌的耐药性已成为世界范围内的公共卫生和安全问题,如何对致病菌的耐药性进行准确快速的检测是许多微生物科研人员和医疗工作者共同面临的难题。根据近年国内外有关研究资料与报道,对于细菌耐药性的检测和分析主要通过对细菌进行药物敏感性实验来执行。目前用于细菌药敏性实验的方法主要包括:肉汤稀释法、琼脂稀释法、K-B纸片法和E-test实验等。文中就以上几种细菌药敏性实验方法的原理、步骤及优缺点进行了概述,并对各种实验方法的应用进行了举例分析。