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环介导等温扩增技术与横向流动试纸条法快速检测布鲁氏杆菌 被引量:5
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作者 李秀梅 梁智选 +4 位作者 李颖 郭恋 王健春 赵静 王红军 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1276-1282,共7页
将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检测方法。针对布鲁氏杆菌OMP25基因设计4条特异性引物和1条异硫氰酸... 将环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)与横向流动试纸条技术(Lateral flow dipstick,LFD)联合应用,建立了一种快速、便捷的布鲁氏杆菌检测方法。针对布鲁氏杆菌OMP25基因设计4条特异性引物和1条异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记的探针。生物素标记LAMP扩增产物能够特异性地与FITC标记的探针杂交,杂交产物经LFD检测。优化后的扩增温度和时间为63℃反应50 min,加上样品的前处理,完成检测仅需80 min。LAMP-LFD方法可特异性地检出布鲁氏杆菌,其最低检测限为5.4×100CFU/mL,是利用外引物建立的PCR方法的100倍。试验结果表明,本研究建立的LAMP-LFD方法能够快速、特异地检测布鲁氏杆菌;简单经济,不需要其他辅助仪器,结果即可直观判断;适合基层实验室、应急检测或现场监测等使用,具有较高的推广价值。 展开更多
关键词 布鲁氏杆菌 OMP25基因 环介导等温扩增 横向流动试纸条 检测
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布鲁氏菌表面抗原研究进展 被引量:16
2
作者 梅建军 石慧英 王兴龙 《动物医学进展》 CSCD 2005年第10期13-18,共6页
布鲁氏菌表面最主要的抗原是脂多糖(LPS)和外膜蛋白(OMPs),R-LPS是R型布鲁氏菌主要的表面抗原,S型布鲁氏菌的S-LPS已被证明是一个主要的毒力因子,它的O链部分含有布鲁氏菌表面绝大多数的抗原位点,是一个很重要的保护性抗原;OMPs被认为... 布鲁氏菌表面最主要的抗原是脂多糖(LPS)和外膜蛋白(OMPs),R-LPS是R型布鲁氏菌主要的表面抗原,S型布鲁氏菌的S-LPS已被证明是一个主要的毒力因子,它的O链部分含有布鲁氏菌表面绝大多数的抗原位点,是一个很重要的保护性抗原;OMPs被认为是布鲁氏菌表面潜在的抗原结构,在光滑型布鲁氏菌表面,由于OMPs受到了LPS-O链的干扰,致使它的抗原性没有充分地表现出来,但在绵羊布鲁氏菌表面却出现了不同的情况。未来几年,对OMPs的研究将成为该领域的热点,尤其是对Omp25突变体的研究。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 表面抗原 脂多糖 O链 外膜蛋白
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戊二醛复方消毒液对布鲁氏菌杀灭效果的观察 被引量:3
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作者 邱海燕 李元凯 《地方病通报》 2000年第1期29-30,共2页
关键词 戊二醛 复方消毒液 布鲁氏菌 卫康消毒液
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实验犬布鲁杆菌诊断试剂的制备和应用 被引量:1
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作者 邢进 王春玲 +2 位作者 范薇 隋丽华 贺争鸣 《实验动物科学与管理》 2004年第2期24-27,共4页
目的 制备犬布鲁杆菌试管凝集菌液和抗血清。方法 苯酚生理盐水冲洗在肝浸液中培养的布鲁杆菌菌苔 ,参照标准比浊管制成所需浓度菌液。采用人工接种比格犬和家兔的方法 ,试管凝集试验测定所得抗血清效价。结果 家兔抗S型血清效价达 1... 目的 制备犬布鲁杆菌试管凝集菌液和抗血清。方法 苯酚生理盐水冲洗在肝浸液中培养的布鲁杆菌菌苔 ,参照标准比浊管制成所需浓度菌液。采用人工接种比格犬和家兔的方法 ,试管凝集试验测定所得抗血清效价。结果 家兔抗S型血清效价达 1∶32 0 0以上 ,R型抗血清效价达 1∶2 5 6 0以上。比格犬抗血清效价较低 ,最高为1∶6 4 0。结论 S型布鲁杆菌通过静脉免疫即可获得效价较高的抗血清 ,而犬R型布鲁杆菌需采用加佐剂肌肉注射的方法 。 展开更多
关键词 布鲁杆菌 试管凝集试验 菌液 抗血清 效价
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牛羊猪种布鲁氏菌快速鉴别PCR方法的建立及评价
5
作者 刘志国 塔娜 +6 位作者 李晓燕 王妙 赵鸿雁 朴东日 蔚瑞平 米景川 李振军 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期399-403,共5页
目的建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219... 目的建立一种可在一个反应体系中同时鉴别布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的快速PCR鉴别方法。方法将布鲁氏菌及牛羊猪种布鲁氏菌的扩增引物进行优化组合,建立全新的BAMS-PCR方法;随后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对现场分离的219株布鲁氏菌进行鉴别,评价其在布鲁氏菌鉴别中的应用价值。最后,用该方法对临床标本中布鲁氏菌的DNA进行扩增,评价其在临床诊断中的实用性。结果 BAMS-PCR方法可在同一反应中同时鉴别布鲁氏菌及牛种(1,2,4型),羊种(1,2和3型)和猪种(1型)布鲁氏菌,并有较好的特异性和敏感性。布鲁氏菌属,牛种,猪种和羊种布鲁氏菌引物的检测灵敏度分别为10 pg/μL,100 pg/μL, 10 pg/μL和100 pg/μL。BAMS-PCR对219株临床分离菌株的鉴定结果和常规生物分型方法的鉴定符合率为100%。经BAMS-PCR检测,97份临床血清样本仅6份为阳性,全血和组织(羊脾)样本全部为阴性。结论 BAMS-PCR是一种简便、快速、高效、准确的布鲁氏菌鉴别方法,可作为临床分离菌株的首选鉴别方法。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 聚合酶链式反应 鉴别 评价
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布鲁氏菌可视化环介导等温扩增方法的建立及应用 被引量:4
6
作者 张萌 阳爱国 +9 位作者 安翠红 侯巍 郭莉 袁东波 尹杰 莫茜 郭杨 吴宣 高露 王新 《现代食品科技》 CAS 北大核心 2021年第8期317-325,共9页
布鲁氏菌病(简称布病)是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患疾病,影响了畜牧业的健康发展,甚至威胁到了人类的健康安全,造成了较严重的经济社会损失。因此,对布鲁氏菌病的防控十分必要。本研究主要基于布鲁氏菌保守基因Omp2a,利用在线网站设... 布鲁氏菌病(简称布病)是一种由布鲁氏菌引起的人畜共患疾病,影响了畜牧业的健康发展,甚至威胁到了人类的健康安全,造成了较严重的经济社会损失。因此,对布鲁氏菌病的防控十分必要。本研究主要基于布鲁氏菌保守基因Omp2a,利用在线网站设计3对引物,并优化其反应条件与反应体系,建立了一种检测布鲁氏菌的可视化LAMP方法。同时,将建立好的LAMP方法与聚合酶链式反应(PCR)检测方法相比较,并交由陕西省疾病预防控制中心进行实际样本检测。结果表明,基于羟基萘酚蓝(HNB)指示剂,LAMP扩增的结果可凭肉眼观察。建立的LAMP检测方法能准确区分布鲁氏菌与非布鲁氏菌,检测限为2.56×10^(-4) ng/μL。在实际样品检测中,LAMP检测方法相对于常规分离鉴定方法的敏感性和特异性均为100%。因此,本研究建立的LAMP检测布鲁氏菌方法具有特异性强、灵敏度高等优点,扩增45 min即可肉眼观察到检测结果,适用于现场和基层检测。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 环介导等温扩增 可视化 应用
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布氏杆菌微滴数字PCR方法的建立 被引量:6
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作者 董浩 原霖 +5 位作者 刘洋 吴同垒 陈亚娜 徐阳 王传彬 梁春南 《畜牧与兽医》 北大核心 2022年第2期97-101,共5页
为建立一种布氏杆菌微滴数字PCR qPCR方法,对布氏杆菌病的定量诊断提供技术支持,在实时荧光PCR(qPCR)检测方法(T/CVMA 20—2020)的基础上,建立了布氏杆菌微滴数字PCR方法,并对方法的反应条件进行了优化,同时对其敏感性、特异性、重复性... 为建立一种布氏杆菌微滴数字PCR qPCR方法,对布氏杆菌病的定量诊断提供技术支持,在实时荧光PCR(qPCR)检测方法(T/CVMA 20—2020)的基础上,建立了布氏杆菌微滴数字PCR方法,并对方法的反应条件进行了优化,同时对其敏感性、特异性、重复性进行了评估。结果显示:本方法的最低检测下限为2.6 copies/μL,未发现与常见的5种细菌存在交叉反应,重复性检测的变异系数小于5%;采用该微滴数字PCR和实时荧光PCR检测方法分别对76份流产牛的阴道拭子进行检测,显示该微滴数字PCR比qPCR可以多检出3份阳性样品。本研究建立的微滴数字PCR方法敏感性高、特异性强、重复性好,适用于临床样品的布氏杆菌核酸检测。 展开更多
关键词 布氏杆菌 微滴数字PCR 实时荧光PCR
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鉴别牛羊布鲁菌实时荧光定量PCR方法的建立 被引量:8
8
作者 苏娇 王艳杰 +1 位作者 智达夫 关平原 《畜牧与饲料科学》 2013年第5期7-12,共6页
[目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧... [目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧光定量PCR标准曲线,评价多重实时荧光定量PCR反应体系的敏感性、特异性、重复性。[结果]建立了鉴别牛种、羊种布鲁菌的实时荧光定量PCR方法,并用该方法对临床样品进行检测。[结论]所建立的多重实时荧光定量PCR诊断方法能够快速、准确地鉴别牛种和羊种布鲁菌。 展开更多
关键词 实时荧光定量PCR 布鲁菌 牛种布鲁菌 羊种布鲁菌 TAQMAN探针
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内蒙古鄂尔多斯地区献血者人群布氏菌感染情况调查 被引量:1
9
作者 陆锦辉 朱晓平 +7 位作者 王佳雯 沈木生 司晋鸿 张玲 李婷婷 王文敬 付涌水 黎诚耀 《中国输血杂志》 CAS 2020年第1期42-45,共4页
目的通过对内蒙古额鄂尔多斯地区矿区团体和街头的2个献血者人群,进行布鲁氏菌(简称"布菌")感染筛查,评估布菌对血液安全构成的潜在风险。方法采用侧向流动免疫分析(LFIA)、虎红平板试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)对献血者血... 目的通过对内蒙古额鄂尔多斯地区矿区团体和街头的2个献血者人群,进行布鲁氏菌(简称"布菌")感染筛查,评估布菌对血液安全构成的潜在风险。方法采用侧向流动免疫分析(LFIA)、虎红平板试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)对献血者血浆中的布氏菌抗体进行初筛;随访可疑阳性标本,进行布菌分离培养,并对可疑阳性血液标本再进行ELISA,Western Blot及PCR检测。结果 2018年7月21日-8月23日期间,共检测鄂尔多斯地区献血者血浆标本1255份,其中矿区团体献血者837份,街头献血者418份。结果显示,共计17份血清标本出现至少1种或2种以上方法的布菌抗体检测阳性,占总数的1.35%。经ELISA和Western Blot鉴定,其中14份血清标本为抗体阳性,占总数1.12%(14/1255),其中矿区抗体阳性率为0.96%(8/837),街头抗体阳性率1.44%(6/418);3份血清标本呈Nested PCR阳性,阳性率为0.24%(3/1255)。结论在布鲁氏菌病流行的地区,感染发生在非职业风险人群中。布鲁氏菌感染的特征是细胞内寄生和持续性菌血症。鄂尔多斯地区献血者人群的布菌抗体阳性率为1.35%,核酸阳性率为0.24%,对血液安全性提出了警示。 展开更多
关键词 布氏菌 流行率 献血者 鄂尔多斯地区
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布鲁菌PCR快速检测方法的建立及应用
10
作者 徐明忠 张如胜 苏良 《国际检验医学杂志》 CAS 2016年第13期1760-1761,1764,共3页
目的建立布鲁菌聚合酶链反应(PCR)方法,对其进行应用评价。方法针对布鲁菌外膜蛋白编码基因(omp-2)设计PCR引物,建立PCR方法,利用19种常见细菌和布鲁菌株DNA分别对其进行特异性和敏感度评价,对3株疑似布鲁菌株进行核酸检测,并与分离培... 目的建立布鲁菌聚合酶链反应(PCR)方法,对其进行应用评价。方法针对布鲁菌外膜蛋白编码基因(omp-2)设计PCR引物,建立PCR方法,利用19种常见细菌和布鲁菌株DNA分别对其进行特异性和敏感度评价,对3株疑似布鲁菌株进行核酸检测,并与分离培养法进行结果比对。结果本研究建立的布鲁菌PCR检测方法仅能检出布鲁菌阳性菌株,对照菌DNA未出现目的条带;敏感度为100拷贝/反应;PCR方法对3株疑似布鲁菌株检出omp-2基因条带,鉴定结果为布鲁菌,与分离培养法结果相同。结论本研究建立了一种布鲁菌PCR检测方法,与分离培养法相比,布鲁菌PCR方法准确、快速,适合布鲁菌病疫情的快速检测。 展开更多
关键词 布鲁菌 聚合酶链反应 基因
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布鲁杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量:1
11
作者 李秀梅 郭恋 +5 位作者 郭立力 李颖 石瑜 杨爱华 王健春 王红军 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期576-580,共5页
研究针对布鲁杆菌保守的OMP25基因设计了4条LAMP的特异性引物,通过优化反应条件,建立了布鲁杆菌的LAMP快速检测方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测布鲁杆菌,其最低检测限为5cop-ies/μL。扩增产物可通过琼脂糖凝胶... 研究针对布鲁杆菌保守的OMP25基因设计了4条LAMP的特异性引物,通过优化反应条件,建立了布鲁杆菌的LAMP快速检测方法。特异性和敏感性试验结果显示,该方法能够特异地检测布鲁杆菌,其最低检测限为5cop-ies/μL。扩增产物可通过琼脂糖凝胶电泳、显色反应进行判定。LAMP可以快速、直观、准确地检测布鲁杆菌,是一种适合基层现场应用的检测方法。 展开更多
关键词 布鲁杆菌 环介导等温扩增 快速检测 OMP25基因
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阳性血培养中的布鲁菌的快速分子鉴定 被引量:1
12
作者 王沛 徐金莲 +2 位作者 陈学兵 王龙 李辉 《中国热带医学》 CAS 2018年第3期217-219,共3页
目的建立一种快速、简便、准确的方法,直接检测阳性血培养液中的布鲁氏菌,用于布鲁菌病的早期诊断。方法将疑似布鲁菌病患者的阳性血培养液在生物安全柜内涂片,并转种至血培养皿及巧克力平皿进行培养。应用特异性的布鲁菌探针Bru-996,... 目的建立一种快速、简便、准确的方法,直接检测阳性血培养液中的布鲁氏菌,用于布鲁菌病的早期诊断。方法将疑似布鲁菌病患者的阳性血培养液在生物安全柜内涂片,并转种至血培养皿及巧克力平皿进行培养。应用特异性的布鲁菌探针Bru-996,采用荧光原位杂交法检测涂片上的细菌;分别采用Vitek2自动细菌鉴定仪和16SrRNA基因测序法鉴定经培养的细菌。将荧光原位杂交法检测结果与Vitek2自动细菌鉴定仪和16Sr RNA基因测序法检测结果进行比较。结果 35份阳性血培养液经检测,荧光原位杂交法检出布鲁菌34株,非布鲁菌1株;基因测序法检出马耳他布鲁菌34株,洋葱伯克霍尔德菌1株;Vitek2鉴定法分别检出马耳他布鲁菌28株、洋葱伯克霍尔德菌1株、吉拉尔玫瑰单胞菌5株,支气管鲍特菌1株。荧光原位杂交法与基因测序法检出结果一致,6株布鲁菌经Vitek2鉴定错误。结论荧光原位杂交法可直接快速简便准确地检测阳性血培养液中的布鲁菌。 展开更多
关键词 布鲁菌 荧光原位杂交 阳性血培养
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A Brief Review of Some Animal Pathogens Causing Miscarriages in Women
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作者 Stephen Mukabi Njiro 《Journal of Reproduction and Contraception》 CAS 2013年第4期253-257,共5页
Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella canis and Brucella abortus, which normally infect various species of domestic animals, can infect humans through unpasteurized milk from infected animals or from contact wi... Brucella melitensis, Brucella suis, Brucella canis and Brucella abortus, which normally infect various species of domestic animals, can infect humans through unpasteurized milk from infected animals or from contact with reproductive tract fluids. They cause flu like symptoms with the fever rising and falling over months or years. Boiling milk before consumption can prevent brucellosis. It can be treated with antibiotics. Listeria monocytogenes usually affects sheep, goats and cattle but may infect humans through consumption of unpasteurized milk and dairy products from infected animals. Prevention of listeriosis is by avoiding unpasteurized milk and dairy products and it is treatable with antibiotics. Toxoplasma gondii is a protozoan parasite of cats, which are the definitive hosts in which the parasite completes its life cycle and produces eggs that are exteriorized in the faeces. Secondary hosts include pigs, sheep and humans. Humans catch the disease from eating poorly cooked meat from infected pigs and sheep, or from accidentally swallowing eggs with food or water contaminated with cat faeces. Toxoplasmosis can be avoided by avoiding close proximity with cats and is treatable with antibiotics. Pregnant women who get infected by these pathogens may miscarry. 展开更多
关键词 brucella spp Listeria monocytogenes Toxoplasma gondii miscarriage inwomen
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187例布鲁菌病患者的临床特征和感染指标分析 被引量:8
14
作者 冯强生 宋月娟 +4 位作者 哈小琴 张媛媛 薛荣莉 张晨晨 高保东 《中华实验和临床感染病杂志(电子版)》 CAS 2020年第1期46-50,共5页
目的分析布鲁杆菌感染的诊断方法、临床特征和感染指标,为布鲁菌病诊断提供依据。方法回顾性分析2012年1月至2019年1月解放军联勤保障部队第九四零医院收治的187例布鲁杆菌病患者病例资料,分析患者的诊断方法、基础疾病和并发症。以200... 目的分析布鲁杆菌感染的诊断方法、临床特征和感染指标,为布鲁菌病诊断提供依据。方法回顾性分析2012年1月至2019年1月解放军联勤保障部队第九四零医院收治的187例布鲁杆菌病患者病例资料,分析患者的诊断方法、基础疾病和并发症。以200例非细菌感染者作为阴性对照,对187例布鲁杆菌病患者感染指标[降钙素原(PCT)、C-反应蛋白(CRP)、白细胞计数(WBC)和中心粒细胞百分比(N%)]进行ROC曲线分析。结果187例布鲁杆菌病患者中男性152例,女性55例;患者年龄中位数为(49.00±12.23)岁,本地区年发病率为36/100000。诊断方法中病原菌培养、血清学诊断和临床诊断分别为27%(51/187)、44.92%(84/187)和40.46%(76/187),病原菌培养以血培养为主24.6%(47/187),平均培养时间为(80.86±20.46)h,且血培养阳性瓶全部为需氧瓶。入组187例布鲁菌病患者常见基础疾病有糖尿病(8.57%、16/187)、乙型肝炎(9.09%、17/187)和胆囊炎(12.83%、24/187);并发症主要表现为腰椎病变(49.20%、92/187)、颈椎病变(10.70%、20/187)和膝关节病变(8.02%、15/187)。感染组与对照组比较,WBC、NEU%、PCT和CRP ROC曲线下面积分别为0.403、0.444、0.414和0.703;当CRP≥1.965 mg/ml时,敏感性为0.589,特异性为0.676。结论布鲁杆菌感染多发生于中老年男性,可通过临床特征、微生物学培养、血清学检测和CRP检测等手段诊断,常并发骨关节病变,需避免漏诊。 展开更多
关键词 布鲁菌病 布鲁杆菌 血培养 骨关节病变 感染指标
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