二色茉莉组织培养技术体系研究

以茎段为材料,采用不同培养基,研究确定适合二色茉莉(Brunfelsialatifolia)组织培养的培养基类型,植株再生的可能途径,以及适宜的培养条件。结果表明:①培养条件为温度25±2℃,光照强度1500～2000lx,光照12h/黑暗12h;②初代培养以MS+BA1 0mg/L+NAA0 01mg/L为最佳组合配方;③接种后直接进行光照培养启动较快;④0 1%升汞对外植体处理时间6min效果最好,启动率达91 5%,污染率2 5%;⑤继代培养以MS+BA2 0mg/L+NAA0 05mg/L为好,其月增殖系数为6 11,丛生芽多且生长适中,30d便可增殖一代;⑥生根培养以1/2MS+IBA2 0mg/L为好,其生根率为93 3%,平均根数为2 85条,平均根长为2 52cm;⑦生根移栽到珍珠岩∶蛭石=1∶1的育苗基质中,30d后成活率为85 9%。

三种千斤拔的化学成分预分析和薄层鉴定

目的对大叶千斤拔、宽叶千斤拔、腺毛千斤拔的化学成分进行预分析,并对三种千斤拔进行薄层鉴别,为找寻千斤拔的替代使用品种提供科学依据.方法通过参考文献采用经典理化鉴定方法进行化学成分的预分析,以燃料木素、5,7,2',4'-四羟基异黄酮、3,5,7,3',5'-五羟基-4'-甲氧基黄烷的甲醇溶液作为对照品进行薄层鉴别.结论该方法简单易行,可初步判断三种千斤拔化学成分上的差异.

宽叶千斤拔生药学初步研究

目的对宽叶千斤拔进行显微鉴别研究。方法采用滑走切片、粉末制片对药材横切面组织结构及粉末特征进行研究。结果宽叶千斤拔根横切面韧皮部中纤维较多,多成束,韧皮射线不明显;木质部较宽;导管近木心处较密集,排列成放射状。粉末可见木薄壁细胞、韧皮纤维和棕色块等特征结构。结论上述特征可作为宽叶千斤拔的显微鉴定依据,为开发利用这一药物资源提供鉴定资料。

鸳鸯茉莉不同外植体诱导愈伤组织研究初探

以鸳鸯茉莉花瓣、叶片、茎段为外植体，MS为基本培养基，探索外植体取材季节和部位对污染的影响；分析植物生长调节剂的种类、浓度对不同外植体诱导愈伤组织的影响和最适组合。结果表明：在3、4月取材比5、6月好，12月取材效果较差；通过花瓣能成功诱导出健康的愈伤组织，但诱导率较低（27．1％），平均出愈时间为23-25d，3种外植体中以嫩叶诱导愈伤组织的效果最好（87．1％），平均出愈时间最短，为18～20d；茎段愈伤组织诱导率其次（68．1％），平均出愈时间为21～23d；2，4-D、6-BA对以花瓣为外植体诱导愈伤组织的影响达显著水平，花瓣诱导愈伤组织的最适培养基为MS＋6-BA1．0mg／L＋NAA1．5mg／L＋2，4-D110mg／L，2，4-D对叶片诱导愈伤组织的影响达显著水平，叶片诱导愈伤组织的最适培养基为MS＋6-BA2．0mg／L＋NAA1．0mg／L＋2，4-D1．0mg／L，2，4-D、6-B对茎段诱导愈伤组织的影响达到极显著水平；MS＋6-BA3．0mg／IL＋KT3．0mg／L＋NAA1．0mg／L＋2，4-D1．0mg／I．最适合茎段诱导愈伤组织。

宽叶千斤拔的生药学研究

目的:对云南产的蝶形花科千斤拔属植物宽叶千斤拔Flem ingia latifoliaBenth.进行系统生药学研究。方法:采用来源鉴别、性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别的方法进行分析。结果:经实验证实宽叶千斤拔的生药学特征明显;理化实验表明:根含多种黄酮类化合物,与文献报道该属其它种源的大类成分基本一致;TLC显示:根和茎均含有与对照品金莲木儿茶素及染料木苷相同成分。结论:宽叶千斤拔与同属其他种植物组织结构不同,但成分类似。

不同种不同药用部位不同产地千斤拔中总黄酮的含量测定

目的用紫外分光光度法对不同入药部位、不同产地5种千斤拔中总黄酮的含量进行测定,评价其非传统入药部位及不同种、不同产地的药材质量,以期寻找新药用资源和新的药用部位。方法紫外-可见分光光度法于510nm波长处测定总黄酮的量。结果芦丁在9.17～64.19μg范围内呈良好的线性关系,平均回收率99.63%,RSD为1.36%(n=9)。不同种千斤拔中,与蔓性千斤拔、大叶千斤拔(《中国药典》收载)比较,球穗千斤拔、宽叶千斤拔根中总黄酮的含量较低,腺毛千斤拔根中总黄酮的含量接近;各个种叶中总黄酮的含量普遍较高,茎中量较低。不同产地千斤拔根中:大叶千斤拔以购于四川成都(云南产)含量最高,蔓性千斤拔采于湖北宜昌夷陵区最高,球穗千斤拔含量均较低。结论该方法简便、快速、准确,可用于千斤拔药材质量控制。不同产地中千斤拔总黄酮含量差异较大,说明产地的海拔高度、气候、土壤等条件、生长年限、贮藏年限等对千斤拔总黄酮含量有明显影响。从有效成分总黄酮、资源的综合及可持续利用角度考虑,千斤拔各种的叶可以与其根同等入药,其茎的含量也可以考虑使用;腺毛千斤拔可以与药典收载种同等入药。

温度对不同花期双色茉莉花香味成分的影响研究

利用固相微萃取-气相色谱/质谱法研究不同花期(盛开初期:紫色花;盛开中期:白色花)双色茉莉花在不同温度(20℃、80℃)下香味成分的差异,并对其主要香味物质的代谢途径进行了初步的探讨。结果表明,温度对不同花期双色茉莉花香味成分的种类和相对含量的影响较为明显,其中,在20℃时茉莉花的主要香味成分有芳樟醇、β-罗勒烯、苯甲酸甲酯等,而在80℃时茉莉花的主要香味成分除了芳樟醇和β-罗勒烯外还有含量较高的橙花叔醇和角鲨烯等,说明温度能对双色茉莉花香味成分的转变造成一定影响。

不同种千斤拔总酚、鞣质、水分、灰分的含量测定

目的:测定千斤拔的不同种、不同药用部位及不同产地根中多酚和鞣质的含量,不同种根中水分、灰分的含量测定,以期评价不同种的药材质量,为寻找新药源和新的药用部位提供一定的实验数据。方法:采用中国药典2005版总酚、鞣质、水分、灰分测定方法。结果:不同种千斤拔中:与蔓性千斤拔、大叶千斤拔(药典收载)比较,各种叶中鞣质、多酚的含量与根接近或更高,茎的含量较低;不同种以宽叶千斤拔、腺毛千斤拔较高,球穗千斤拔较低。不同种千斤拔根中灰分、酸不溶性灰分、水分含量差别不大,以采于广西恭城的球穗千斤拔含量较高。不同产地千斤拔根的鞣质、多酚含量中:大叶千斤拔以采于四川华西植物园的含量最高,蔓性千斤拔以购于深圳解放路(广东产)最高,球穗千斤拔含量均较低。结论:不同产地中千斤拔总酚、鞣质含量差异较大,说明产地的环境条件对其含量有明显影响。从有效成分总酚、鞣质和资源的综合、可持续利用角度考虑,建议进一步进行药理实验研究,考查千斤拔各种的叶和茎能否与其根同等入药;宽叶千斤拔、腺毛千斤拔能否与药典收载种同等入药。

双色茉莉叶片初代培养物的建立及愈伤组织诱导

以双色茉莉的叶片为外植体,探讨外植体取材时期、消毒时间、不同植物生长调节剂组合对愈伤组织诱导的影响,结果表明:取材时期对双色茉莉叶片诱导愈伤组织的影响较为显著,4月份和10月份是双色茉莉叶片取材的最佳时期;不同消毒时间对双色茉莉叶片愈伤组织诱导影响不同,其中在0.1%的氯化汞中消毒5~6 min污染率较低,且诱导产生的愈伤组织生长状况最优;培养基中6-苄氨基嘌呤(6-BA)质量浓度/萘乙酸(NAA)质量浓度影响了双色茉莉叶片愈伤组织的诱导,当6-BA质量浓度/NAA质量浓度为1/4~1时有利于愈伤组织的诱导,形成的愈伤组织质量较好;添加激动素(KT)则不利于双色茉莉叶片愈伤组织的诱导。该研究以双色茉莉叶片为外植体,培养获得了愈伤组织,其中愈伤组织诱导的适宜培养基有MS+1.0 mg·L^-16-BA+1.0 mg·L^-1 NAA、MS+1.0 mg·L^-16-BA+2.0 mg·L^-1 NAA、MS+1.0 mg·L^-16-BA+4.0 mg·L^-1 NAA和MS+2.0 mg·L^-16-BA+2.0 mg·L^-1 NAA,这为双色茉莉离体繁殖再生体系的建立奠定了基础。

双色茉莉茎段离体培养再生植株的研究

以双色茉莉茎段为外植体,探讨外植体取材季节和部位、基本培养基种类、植物生长调节剂组合、活性炭等对茎段器官发生和植株再生的影响。结果表明:在4月和10月取材最好,其诱导率分别达到了92.78%和84%,污染率最低;1/2MS+0.01 mg/L NAA+3.0 mg/L BA+2.0 mg/L KT培养基最适合不定芽的诱导分化,不定芽分化率达到了88.34%;在继代增殖培养中,继代次数最好在6代以内,否则增殖率下降,MS+0.5 mg/L IBA+3.0 mg/L BA+0.2%活性炭培养基最适合不定芽的增殖(5.92)和大于2 cm芽的分化(47.16%)。不定芽可在1/2MS培养基中有效伸长,适宜的生根培养基为1/2MS+1.0 mg/L IBA+0.2 mg/L BA,生根率达到100%。

反向高效液相色谱法同时测定千斤拔不同种、不同药用部位中醋酸乙酯部位化学成分的含量

【目的】同时测定千斤拔的不同种、不同药用部位中醋酸乙酯部位化学成分的含量,以期评价不同种药材的质量,为寻找新药源和新的药用部位提供一定的实验数据。【方法】采用反向高效液相色谱法(RP-HPLC)进行测定。应用Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.5%磷酸水(23∶77,10 min;43∶57,11~55 min),流速为1 mL/min,柱温30℃,检测波长为240 nm。【结果】千斤拔燃料木素在2.01504~10.0752μg内呈良好的线性关系,回收率为99.75%,相对标准偏差(RSD)为0.92%;5,7,2’,4’-四羟基异黄酮在2.01042~10.0521μg内呈良好的线性关系,回收率为101.24%,RSD为1.13%;3,5,7,3’,5’-五羟基-4’-甲氧基黄烷在2.01246~10.0623μg内呈良好的线性关系,回收率为102.35%,RSD为1.48%。蔓性千斤拔根、茎中燃料木素和5,7,2’,4’-四羟基异黄酮含量最高,宽叶千斤拔的叶中富含3,5,7,3’,5’-五羟基-4’-甲氧基黄烷,球穗千斤拔仅根、茎含有较少的燃料木素。蔓性千斤拔茎、叶中有效成分的含量远高于其他千斤拔茎、叶的含量。【结论】检测该方法简便、快速、准确。从有效化学成分角度考虑,建议球穗千斤拔不宜替代药典品种蔓性千斤拔、大叶千斤拔入药;从有效化学成分资源的综合及可持续利用角度考虑,建议蔓性千斤拔的茎、叶可以与其根同等入药。