九节龙皂苷Ⅰ的抗肿瘤作用和免疫调节作用

目的研究九节龙皂苷Ⅰ对S180、H22、EAC和L1210荷瘤小鼠的治疗作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法小鼠右腋皮下(或腹腔)接种瘤细胞复制荷瘤小鼠模型。连续灌胃给药九节龙皂苷Ⅰ8 d后,剥离瘤块,计算抑瘤率;3H-TdR参入法研究了其对脾淋巴细胞增殖的影响,腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞法测量了其对巨噬细胞吞噬功能的影响。结果九节龙皂苷Ⅰ对小鼠S180、H22和EAC实体瘤均有抑制作用,其100 mg.kg-1对3种移植瘤最大抑瘤率分别为38.7%、48.6%和50.0%;并能促进荷瘤小鼠脾T淋巴细胞增殖,提高巨噬细胞吞噬能力。结论九节龙皂苷Ⅰ能抑制小鼠移植性肿瘤生长,并能改善荷瘤小鼠免疫功能。

动物GH/IGF-Ⅰ轴调控机制的研究进展

生长轴是动物体内下丘脑-垂体-靶器官一系列激素及其受体所组成的神经内分泌系统。通过提高生长轴中生长激素(GH)和胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)水平,促进增重、提高饲料转化率和改善肉品质,是畜禽生长调控的一种新途径。GH通过IGF-Ⅰ介导调节动物生长和细胞分化等,文章综述了GH/IGF-Ⅰ轴的组成、功能,以及GH调控IGF-Ⅰ表达的分子机理。

Ⅰ型酪蛋白激酶的研究进展

Ⅰ型酪蛋白激酶(CKI)属丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在真核生物中广泛存在,结构高度保守。在生物生长发育过程中CKI参与多种细胞功能及发育过程的调节,具有非常重要的作用。本文从CKI的结构、生理功能、调节机制以及近年来CKI在哺乳动物、酵母和植物中的分类与功能等方面进行综述,为进一步研究其在代谢及信号转导中的作用,明确其在生长发育等调控网络中的地位提供理论指导。

IGF-Ⅰ对山羊睾丸间质细胞分泌睾酮的调节机理

以３０～４０日龄山羊的睾丸间质细胞为研究对象，采用体外细胞培养的方法，用胰岛素样生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）和ｈＣＧ进行不同的处理，用放射免疫分析法（ＲＩＡ）测定了睾酮和ｃＡＭＰ的含量，用荧光分光光度分析法测定了ＤＮＡ含量。结果表明，ＩＧＦ－Ⅰ能促进体外培养的山羊睾丸间质细胞ｃＡＭＰ生成、睾酮分泌及ＤＮＡ合成，以上作用随ＩＧＦ－Ⅰ剂量的增大而加强，并且与ｈＣＧ有协同作用。根据以上结果首次提出ＩＧＦ－Ⅰ调节山羊睾丸间质细胞分泌睾酮机理的假设：ＩＧＦ－Ⅰ与其膜受体结合引起ｃＡＭＰ增多，ｃＡＭＰ通过激活一系列合成ＤＮＡ和睾酮所需酶类而使ＤＮＡ和睾酮的合成增加。这与催乳素（ＰＲＬ）和白细胞介素－１α（ＩＬ－１α）等含氮激素（因子）调节间质细胞分泌睾酮的机理不同，而与ＦＳＨ、ＬＨ等含氮激素调节性腺分泌类固醇激素的作用机理相似。

己酮可可碱对TGF-β_1诱导的腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响

【目的】探讨己酮可可碱对转化生长因子鄄β1诱导的大鼠腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达及细胞外信号调节激酶活性的影响。【方法】用逆转录鄄聚合酶链反应检测腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达,用Westernblot检测磷酸化细胞外信号调节激酶。【结果】①0.3mg/mL己酮可可碱与对照组相比,可下调胶原ⅠmRNA表达32%(P<0.01),其抑制作用呈时间依赖性关系,作用16h抑制作用达高峰(0.790vs0.426,P<0.001)。②TGF鄄β1可诱导腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达上调(132.00vs592.00,P<0.001),以及磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(201.67vs682.00,P<0.001)。③己酮可可碱可抑制TGF鄄β1诱导的腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA表达上调(0.945vs0.594,P<0.01),并可逆转TGF鄄β1诱导的磷酸化细胞外信号调节激酶表达增加(682.00vs426.00,P<0.001),其抑制作用呈剂量依赖关系。【结论】己酮可可碱可下调腹膜间皮细胞胶原ⅠmRNA的基础表达及TGF鄄β1诱导的过度表达,同时可逆转TGF鄄β1诱导的腹膜间皮细胞细胞外信号调节激酶活性增加。

维拉帕米阻断TGF-β1诱导的α1(Ⅰ)胶原基因启动子的激活

目的 :探讨维拉帕米对α1( )胶原基因启动子活性的影响。方法 :将人α1( )胶原基因启动子重组体 p COL H 1.5、p COL H2 .5转染至大鼠肾小球系膜细胞 ,分别经不同浓度的转化生长因子β1(TGF-β1)和维拉帕米处理后 ,EL ISA法测定细胞 CAT表达水平。结果 :TGF- β1作用后 ,p COL H1.5和 p COL H2 .5的 CAT活性明显增加 ,分别为对照组的 1.4 98和 1.5 5 1倍 ;维拉帕米对两个重组体的 CAT表达均有抑制作用 ,与单纯 TGF- β1组比较 ,维拉帕米加 TGF- β1组 p COL H2 .5的 CAT活性明显降低 (维拉帕米低浓度组 P<0 .0 5 ,高浓度组 P<0 .0 1)。结论 :维拉帕米不仅直接抑制启动子的活性 ,而且还部分阻断 TGF- β1诱导的 α1( )胶原基因启动子激活。

GH/IGF-Ⅰ轴对半滑舌鳎(Cynoglossussemilaevis)卵巢发育的调控作用

为深入认识半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)生殖调控机制,研究了生长轴(GH/IGF-Ⅰaxis)对半滑舌鳎卵巢发育调控的作用及可能机制;分析了卵巢不同发育时期垂体中的生长激素(GH),脑、性腺和肝脏中的类胰岛素生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)mRNA的表达水平变化;检测了卵巢不同发育期,血清GH、IGF-Ⅰ、雌二醇(E2)、睾酮(T)的表达水平变化,并分析了生长因子与性腺指数(GSI)、E2和T表达变化的关系。结果显示,垂体GH mRNA表达水平在Ⅳ期卵巢时显著升高,至Ⅴ期时达峰值,随后(Ⅵ期)显著降低,垂体GH mRNA表达水平与GSI、血清GH与IGF-Ⅰ表达水平呈显著正相关。血清GH与垂体GH mRNA表达水平表现出相似的变化趋势。肝脏IGF-ⅠmRNA表达水平在Ⅳ期和Ⅴ期卵巢时较低,但Ⅵ期时又显著升高,其与脑IGF-ⅠmRNA及血清IGF-Ⅰ表达水平呈显著正相关,而与血清E2和T表达水平呈显著负相关。脑IGF-ⅠmRNA表达水平自Ⅱ期卵巢开始显著升高,至Ⅳ期时达峰值,并与血清IGF-Ⅰ表达水平呈显著负相关。卵巢IGF-ⅠmRNA表达水平自Ⅱ期开始显著升高,并在Ⅳ期时达峰值,但在Ⅴ期时明显下降,并保持至Ⅵ期,与血清E2表达水平呈显著正相关,而与血清IGF-Ⅰ表达水平呈显著负相关。血清IGF-Ⅰ变化趋势与肝脏IGF-ⅠmRNA相似。结果揭示了GH、IGF-Ⅰ在转录和血清水平上以协同或者拮抗的方式共同参与了半滑舌鳎卵巢发育的过程,其作用途径可能与性类固醇激素的合成与分泌有关,表明GH/IGF-Ⅰ轴对卵巢发育具有重要的调控作用,为深入认识半滑舌鳎卵巢发育的调控机制提供了新的思路和素材。

HBV野生株及C区突变株调节HLA-Ⅰ表达的作用

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)及其C区突变对机体人类白细胞抗原-Ⅰ(HLA-Ⅰ)表达的影响和机制。方法构建HBVC区突变株G87、V60的真核表达载体,转染HepG2细胞,检测转染细胞中HLA-Ⅰ的表达以及抗原提呈相关基因LMP2、TAP1和tapasin的mRNA表达。结果各转染细胞株均能有效表达HBsAg;各转染细胞株均有HLA-Ⅰ表达,野生株略高于C区突变株G87、V60;TAP1mRNA表达上调,LMP和tapasinmRNA均未见明显表达。结论HBV能诱导HepG2细胞内HLA-Ⅰ分子的合成,使TAP1基因转录增强,HLA-Ⅰ的表达上调。相对于HBV野生株而言,C区突变株G87、V60使宿主细胞内HLA-ⅠmRNA及其蛋白的表达水平降低。

欧盟民商事判决承认与执行制度:发展与变革——2012年《布鲁塞尔条例Ⅰ》(重订本)介评

2001年《布鲁塞尔条例I》是在《阿姆斯特丹条约》生效以后,由《布鲁塞尔公约》转化而来,是欧盟民商事判决承认与执行的基本法。随着欧盟内部市场统一化的新一轮发展,司法合作以及成员国之间互信程度已趋于成熟,但在跨界民商事交往中,判决承认和执行所花费的时间以及经济成本阻碍了判决在欧盟境内的自由流动。基于此,欧盟于2009年启动了对2001年《布鲁塞尔条例I》的修订,并于2012年12月12日通过。在判决承认与执行部分做了大幅度修改:判决的承认部分新增了对"援引一国判决"的承认;判决执行部分,在必要保障措施基础上,废除了审查程序。分析2012年《布鲁塞尔条例I》(重订本)的制定过程以及判决承认与执行部分的修改,并在此基础上概括其对欧盟民商事领域判决承认与执行的贡献。

表达降钙素基因相关肽的单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体的构建、包装和扩增

目的对单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质料装载降钙素基因相关肽,并进行包装和扩增。方法分别钓取pac基因和γ134.5基因,克隆入pMD18-T载体中。pSV载体经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,获得lacZ片段,自身环化形成pUPO-γ134.5-lacZ。合成CGRP基因序列,将此基因替换pUPO-γ134.5-lacZ质粒中的lacZ基因,插入γ134.5基因位点中,即pUPO-Δγ134.5-CGRP。再用单纯疱疹病毒温敏株辅助在BHK细胞中包装、扩增,通过检测lacZ的表达反映扩增子病毒滴度。结果酶切鉴定证实重组子构建成功。重组扩增子质粒的包装、扩增由BHK细胞的形态变化和X-gal原位检测载体lacZ的表达证实。扩增子假型病毒滴度达3.5×105TU/ml。结论本研究构建、包装、扩增的携带降钙素基因相关肽的假型病毒有较高感染性,这种扩增子病毒可作为实验研究的有力工具。

策略Ⅰ植物铁吸收稳态调控研究进展

铁是植物生长发育所必需的微量元素。作为辅酶因子和电子传递链组分,铁参与了光合作用、呼吸作用等多种重要的生理代谢过程。铁在地壳中的含量虽然丰富,但在中性和碱性土壤中大多以Fe^(3+)的形式存在,溶解度极低,限制了土壤中铁的生物有效性,导致植物生长发育易受缺铁影响,致使植物缺铁失绿已成为全世界普遍关注的问题。但在低pH和长期淹水条件下,植物会吸收累积过量的铁,产生活性氧,导致植物伤害甚至死亡。因此精确调控铁的吸收转运,保持体内铁稳态是植物生长发育的基础。本文就策略Ⅰ植物铁稳态调控方面的最新研究进展做一阶段性总结,并对存在的问题和未来的发展动态提出了作者的观点。

细胞外信号调节激酶1/2通路在Peroxiredoxin-1抑制转化生长因子-β_1诱导的Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达中的作用

目的探讨细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺成纤维细胞合成Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白中的作用,及新型过氧化物酶Peroxiredoxin-1(Prx-1)对该作用的影响。方法体外培养肺成纤维细胞随机分为4组:对照组(0.4%血清)、TGF-β1组(5μg/L)、阴性转染组(TGF-β1+阴性对照si RNA)和Prx-1 si RNA转染组(TGF-β1+Prx-1 si RNA)。采用脂质体转染法转染si RNA,实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测转染后Prx-1 m RNA表达;Western blot检测Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ERK1/2及Prx-1表达;2,7-二氯荧光素二乙酸(DCFH-DA)检测活性氧(ROS)水平。结果 Prx-1 si RNA转染肺成纤维细胞后,Prx-1 m RNA表达明显降低,最大抑制率为92%。与对照组比较,TGF-β1组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)及Prx-1蛋白的表达水平均明显提高。与TGF-β1组比较,阴性转染组中的上述观察指标无明显变化,但Prx-1转染组的Ⅰ和Ⅲ型胶原蛋白、ROS、p-ERK1/2水平进一步提高,而Prx-1蛋白的表达被抑制。结论 TGF-β1能够诱导肺成纤维细胞生成ROS,并促进ERK1/2通路的激活,导致Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白合成增加,而Prx-1 si RNA可通过提高ROS水平进一步促进TGF-β1该作用。

基于Ⅰ相代谢调控的葛根素微乳的制备及其药动学研究

目的:制备具有Ⅰ相代谢调控作用的葛根素微乳(R-PR-ME),并研究其在大鼠体内的药动学特征。方法:采用Shah法制备R-PR-ME和无代谢调控作用的葛根素微乳(NR-PR-ME),采用伪三元相图及以载药量为指标优化微乳处方,并用激光粒度仪对其粒径和多分散系数(PDI)进行表征。以大鼠为动物模型,采用高效液相色谱法,分别测定以葛根素计120 mg/kg的剂量灌胃R-PR-ME、NR-PR-ME和葛根素混悬液(PR-SP)前和灌胃后5、10、15、20、30、45、60、90、120、180、240、360、480、600min葛根素的血药浓度,使用DAS2.0软件计算药动学参数,SPSS19.0软件进行统计分析,以NR-PR-ME为参比制剂计算R-PR-ME的相对生物利用度。结果:R-PR-ME处方为油酸聚乙二醇甘油酯(油相)-聚山梨酯20(乳化剂)-辛酸癸酸聚乙二醇甘油酯(助乳化剂)的质量比为2∶4∶4,载药量为67.50mg/g,粒径为(22.59±0.53)nm(n=3),PDI为0.182±0.017(n=3);NR-PR-ME处方为大豆油(油相)-聚山梨酯80(乳化剂)-甘油(助乳化剂)的质量比1∶4.5∶4.5,载药量为61.32mg/g,粒径为(15.45±1.06)nm(n=3),PDI为0.156±0.012(n=3)。R-PR-ME、NR-PR-ME和PR-SP在大鼠体内的AUC0-600 min分别为(134.187±37.152)、(65.145±18.762)、(49.623±12.143) g min/mL;cmax分别为(1.316±0.306)、(1.082±0.294)、(0.425±0.106) g/mL;MRT分别为(155.068±33.204)、(100.264±27.683)、(60.524±14.086)min,t1/2β分别为(365.880±101.250)、(283.280±80.940)、(80.063±21.189)min(n=6);与PR-SP比较,R-PR-ME和NR-PR-ME的AUC0-600 min、cmax、MRT、t1/2β均明显增加(P<0.05或P<0.01);与NR-PR-ME比较,R-PR-ME的AUC0-600 min、MRT、t1/2β均更高(P<0.05),R-PR-ME的相对生物利用度为205.98%。结论:成功制得R-PR-ME,且其载药量高,与PR-SP和NR-PR-ME比较,R-PR-ME可显著增加葛根素在大鼠体内的生物利用度。

大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白在肺血管壁异常堆积的调节作用

目的探讨大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢对Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白在肺血管壁异常堆积的调节作用。方法购买首都医科大学实验动物中心提供的38只健康雄性Wistar大鼠,依据随机数字表法将大鼠分为低氧组(n=14)、低氧+硫氢化钠(Na HS)组(n=12)、对照组(n=12),建立大鼠HPH模型,监测其血流动力学,测定其血浆H2S含量,检测其肺组织中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白,最后进行结果判定与半定量分析、统计学分析。结果低氧组大鼠的m PAP、RV/(LV+SP)均显著高于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05),血浆H2S含量显著低于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05),肺小型肌性动脉Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达均显著高于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05);低氧组、低氧+Na HS组、对照组大鼠肺中型肌性动脉Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐降低(P<0.05),低氧组、低氧+Na HS组大鼠肺中型肌性动脉Ⅲ型胶原蛋白表达均显著高于对照组(P<0.05)。低氧组大鼠肺小型肌性动脉、肺中型肌性动脉Ⅰ型胶原m RNA表达均显著高于低氧+Na HS组、对照组(P<0.05);低氧组、对照组、低氧+Na HS组大鼠肺小型肌性动脉、肺中型肌性动脉Ⅲ型胶原m RNA表达均逐渐降低(P<0.05)。结论大鼠低氧性肺血管重塑时硫化氢能够有效抑制Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白及其m RNA在肺血管壁的表达,进而可能对低氧性肺血管重塑进行有效缓解,值得临床充分重视。

自身免疫性多内分泌腺体综合症Ⅰ型与自身免疫调节因子基因关系研究

自身免疫性多内分泌腺体综合症Ⅰ型(APS-Ⅰ)主要由自身免疫调节因子(AIRE)基因突变引起,迄今发现的所有突变位点贯穿整个AIRE基因序列,不同的突变类型对AIRE蛋白的结构和功能可产生影响,从而影响胸腺细胞的阴性选择和自身免疫耐受,进而导致APS-Ⅰ患者的一系列临床表现。本文主要对APS-Ⅰ与国内外已报道的AIRE基因突变位点之间关系的研究进行综述。

1例自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅰ型家系的AIRE基因突变分析

目的分析1例自身免疫性多内分泌腺病综合征Ⅰ型家系的自身免疫调节因子(autoimmune regulator,AIRE)基因突变。方法采集家系成员外周血标本,PCR扩增和Sanger测序筛查AIRE上的突变位点,采用构建酶切位点PCR(created restriction site PCR,CRS-PCR)和PCR-限制性片段长度多态性法(PCR restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)在100例健康人群中筛查验证,应用SIFT、PolyPhen-2、Mutation Taster、Antheprot Editor软件分析突变对蛋白质结构和功能的影响,使用Alternative Splice Site Predictor、FruitFly Splice Predictor、SplicePort软件预测突变对mRNA剪切位点的影响,并以Sanger测序验证。结果在先证者AIRE基因上筛选出新的复合性杂合突变c.47 C>G T16R和c.1631-2 A>T。c.47位点在不同物种中高度保守和同源性,c.47C>G的错义突变改变蛋白质的二级结构和疏水性,影响蛋白质的功能。c.1631-2 A>T突变会引起剪切位点消失,造成靶mRNA上13号外显子缺失。结论在自身免疫性多分泌腺病综合征Ⅰ型的家系中发现2个新的致病突变位点,分别为c.47C>G T16R和c.1631-2 A>T。

论国际私法中“优先性强制规则”的性质与适用——以《罗马条例Ⅰ》第9条为视角

根据《罗马条例Ⅰ》第9条的规定,主权国家在某些情况下承认优先性强制规则的优先效力已经是客观事实,然而学界对优先性强制规则的有关的问题一直争论不休。这种争论长期存在的主要原因是,学者对于这类规则适用的方式过于执着,而没有把注意力放在优先性强制规则是私法性规则的性质上。理论上,优先性强制规则具有了明显的私法色彩,这不仅决定了应该在国际私法学的范畴内讨论相关的问题,而且决定了它在内国具有天然的法律效力。而我国目前还没有关于如何适用外国优先性强制规则的立法,在制定相关法律时立法者应该特别注意到自由裁量权、适用第三国强制性规则的后果和意思自治原则的相关法律问题。

对《布鲁塞尔条例Ⅰ》保险事宜管辖权条款的思考——以New Hampshire案件为视角的分析

New Hampshire Insurance Company诉Strabag Bau A.G案件的判决结果凸显了《布鲁塞尔条例Ⅰ》保险事宜管辖权相关规定的特点,即通过赋予被保险人更多的权利,来达到保护在保险合同中常处于弱势地位的被保险人。笔者认为应该一分为二地看待《布鲁塞尔条例Ⅰ》这一特点:一方面,其保护弱者的初衷是值得肯定的,对弱者保护的力度也足够强大;另一方面,《布鲁塞尔条例Ⅰ》也存在着不足。例如没有根据合同双方的议价能力对弱者的范围作出充分的界定,在管辖权的分配存在不合理等,这也容易造成对保险人的不公平。针对当前我国法律中关于涉外保险管辖权条款的现状,以《布鲁塞尔条例Ⅰ》为借鉴,从当事人的议价能力出发,对完善我国涉外保险管辖权提出新的建议。

猪胰岛素样生长因子I基因表达与调控的研究进展

胰岛素样生长因子-I(I nsulin-like growth factor-I,I GF-I)是机体生长、发育和代谢的一个重要调控因子,同时也是生长激素(growth hormone,GH)启动生长活性的主要介导者。血液中的I GF-I主要来源于肝脏,以内分泌的形式作用于其他组织;许多肝外组织也能合成I GF-I,其主要以自分泌或旁分泌的形式发挥作用。多种因素调控其表达。本文就猪I GF-I的表达与调控方面的最新研究进展进行一综述。