BslA蛋白在减毒炭疽芽孢杆菌中的表达和功能分析

目的在减毒炭疽芽孢杆菌AP422中表达BslA蛋白,并分析其生物学活性。方法利用PCR方法从炭疽芽孢杆菌中扩增出bslA基因,克隆至穿梭质粒pDG148,采用电转化方法将表达载体转入减毒炭疽芽孢杆菌AP422后诱导表达重组BslA。并利用SDS-PAGE电泳、Western印迹、间接免疫荧光实验和流式细胞术分析目标蛋白的表达,并对其进行空间定位,最后用细菌黏附实验分析其生物学功能。结果 BslA蛋白在AP422中获得成功表达,且目标蛋白主要表达于菌体表面。表达BslA蛋白的AP422(pDG-BslA)菌株具有黏附宿主细胞表面的能力,该黏附能力与阳性对照A16R菌株基本一致。结论在减毒炭疽芽孢杆菌AP422中实现了BslA蛋白的功能性表达,为进一步研究该蛋白的功能和构建新的疫苗候选株奠定了实验基础。

炭疽芽胞杆菌BslA_((260-652))蛋白的表达纯化与黏附功能鉴定

【目的】克隆表达炭疽芽胞杆菌BlsA的功能区片段并对其生物学功能进行鉴定。【方法】以炭疽芽胞杆菌A16R基因组DNA为模板PCR扩增bslA(260-652)基因片段,克隆至pET-28a(+)载体。将成功构建的重组质粒转化入大肠杆菌Rosetta(DE3)中,诱导表达后收集菌体经超声破碎后,对可溶表达部分用镍柱进行亲和层析纯化。以纯化后的蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠制备该蛋白的多抗,用ELISA和Western blot检测抗血清;使用间接免疫荧光实验和细菌黏附实验研究目标蛋白及其抗体的生物学功能。【结果】BslA(260-652)获得了可溶性表达,纯化后纯度约为87.4%。以纯化蛋白为抗原,免疫BALB/c小鼠制备的抗血清ELISA效价可达1∶20000。将BslA(260-652)蛋白与Hela细胞共孵育后,能够直接和Hela的细胞膜结合。细菌黏附实验表明BslA(260-652)蛋白及其相应的多抗血清都能够显著地抑制炭疽芽胞杆菌A16R对Hela细胞的黏附。【结论】大肠杆菌表达得到的炭疽芽胞杆菌BslA(260-652)蛋白具有与天然蛋白相似的生物活性,为深入研究BslA蛋白在炭疽芽胞杆菌致病过程中的作用奠定实验基础。