AFLP分子标记技术的改进——内切酶EcoRⅠ/TruⅠ组合与EcoRⅠ/MseⅠ组合的比较

通过对EcoRⅠ/TruⅠ与EcoRⅠ/MseⅠ两个双酶切组合的比较,证明在AFLP标记体系中,完全可以用内切酶TruⅠ替代昂贵的内切酶MseⅠ。EcoRⅠ与TruⅠ可同时加入,在不同温度下分段进行酶切:37℃酶切4 h,然后65℃酶切2 h,可达到分步酶切的效果。

绿壳蛋鸡FMO3基因多态性PCR-RFLP检测方法研究

FMO3基因是影响鸡蛋品质的主要基因之一,T329S位点突变是引起该基因功能异常的主要原因。本研究根据GenBank上公布的鱼腥味基因全序列设计引物,采用PCR-RFLP技术对绿壳蛋鸡T329S位点突变体进行检测。结果获得了特异性良好的引物,建立了稳定的反应体系和反应条件,所建方法判型准确、清晰。

等位基因特异性-PCR联合限制性内切酶消化法检测JAK2V617F突变

目的:建立敏感特异的JAK2V617F点突变的临床检测方法。方法:基因组DNA从HEL细胞或正常志愿者外周血中提取。采用等位基因特异性-PCR(Allele specific-PCR,AS-PCR)和限制性内切酶消化的方法检测基因组中JAK2V617F突变。结果:本AS-PCR法可对JAK2基因扩增出364bp的内参照条带,当存在JAK2V617F突变时,又可以扩增出203bp的突变条带。只有野生型内参照条带364bp可被BsaXⅠ消化切割。结论:AS-PCR法和限制性内切酶法是检测JAK2V617F突变的敏感特异的检测方法,可以成功应用于临床检测。