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昆虫类钙粘蛋白与BtCry1A蛋白之间的相互作用 被引量:6
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作者 韩岚岚 赵奎军 张杰 《昆虫知识》 CSCD 北大核心 2009年第2期203-209,共7页
类钙粘蛋白(cadherin-likeprotein)位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡(brushbordermembranevesicles,BBMV)上,是苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)产生的杀虫晶体蛋白(BtCry蛋白)的主要受体之一。它能够与BtCry蛋白结合,引起细胞膜的渗... 类钙粘蛋白(cadherin-likeprotein)位于昆虫中肠刷状缘膜囊泡(brushbordermembranevesicles,BBMV)上,是苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)产生的杀虫晶体蛋白(BtCry蛋白)的主要受体之一。它能够与BtCry蛋白结合,引起细胞膜的渗透性发生改变,促进BtCry蛋白对敏感昆虫的毒杀作用。类钙粘蛋白基因的突变还能导致敏感昆虫对BtCry蛋白产生抗性。因此,研究昆虫类钙粘蛋白与BtCry蛋白之间的相互作用,将有助于揭示BtCry蛋白杀虫作用机理。文章对昆虫类钙粘蛋白种类、结构特征、在昆虫体内的分布、及其与BtCry蛋白之间的相互作用等方面的研究现状进行详细论述。 展开更多
关键词 类钙粘蛋白 bt cry蛋白 苏云金芽孢杆菌 受体
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影响Bt稻离体叶中Cry1Ab杀虫蛋白降解的环境因子研究 被引量:8
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作者 白耀宇 蒋明星 程家安 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期721-727,共7页
目的研究转Bt基因水稻表达的外源Bt杀虫蛋白在土壤中的环境去向,以便进行转BT基因水稻的生态风险性评价。方法室内采用ELISA法,研究转Bt基因水稻克螟稻2号(KMD2)粉碎叶片中Cry1Ab杀虫蛋白在3种水稻土,即青紫泥田、黄筋泥田和黄松田土中... 目的研究转Bt基因水稻表达的外源Bt杀虫蛋白在土壤中的环境去向,以便进行转BT基因水稻的生态风险性评价。方法室内采用ELISA法,研究转Bt基因水稻克螟稻2号(KMD2)粉碎叶片中Cry1Ab杀虫蛋白在3种水稻土,即青紫泥田、黄筋泥田和黄松田土中不同土壤含水量、土壤pH值和温度条件下的降解动态。结果供试叶片粉中Cry1Ab蛋白在3种水稻土中的降解动态均可用一级化学反应动力学指数方程来拟合,降解半消减期t0.5为1.8~4.0d。结论土壤含水量、pH和温度对Cry1Ab蛋白降解速率均有一定影响,但pH和温度的影响更为明显。通常pH较低的酸性土壤和低温不利于土壤中Cry1Ab蛋白的降解,特别是在酸性黄松田中降解最慢。 展开更多
关键词 bt基因水稻 cry1AB杀虫蛋白 水稻土 降解 影响因子
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分子生物学手段检测转Bt基因棉花中Cry杀虫蛋白的定性和定量方法
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作者 李衍亮 方志翔 游静 《分析测试技术与仪器》 CAS 2014年第3期148-154,共7页
建立了转Bt基因棉花中Cry杀虫蛋白的提取、样品前处理以及酶联免疫(ELISA)定量分析方法,并使用凝胶电泳、普通聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR等分子生物学手段对转基因棉花中的Bt基因进行定性和定量检测.所建立的苏云金芽孢杆菌... 建立了转Bt基因棉花中Cry杀虫蛋白的提取、样品前处理以及酶联免疫(ELISA)定量分析方法,并使用凝胶电泳、普通聚合酶链式反应(PCR)和实时荧光定量PCR等分子生物学手段对转基因棉花中的Bt基因进行定性和定量检测.所建立的苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白(Cry1Ab蛋白和Cry1Ac蛋白)标准曲线线性关系良好,相关系数r2均大于0.999,相对标准偏差RSD均小于2.0%.方法简单、快速、重现性和精密度好,可为农业食品行业和环境领域科研人员提供一种简便快速地从转基因棉花中检测Bt毒蛋白的分析方法. 展开更多
关键词 bt基因棉花 cry杀虫蛋白 酶联免疫法 凝胶电泳 实时荧光定量PCR
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Yield, Leaf Senescence, and Cry1Ac Expression in Response to Removal of Early Fruiting Branches in Transgenic Bt Cotton 被引量:1
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作者 DONG He-zhong TANG Wei LI Wei-jiang LI Zhen-huai NIU Yue-hua ZHANG Dong-mei 《Agricultural Sciences in China》 CAS CSCD 2008年第6期692-702,共11页
Two-year field experiments were conducted at Linqing, Yellow River valley of China, to study the plant response to the removal of early fruiting branches in transgenic Bt (Bacillus thuringiensis) cotton (Gossypium ... Two-year field experiments were conducted at Linqing, Yellow River valley of China, to study the plant response to the removal of early fruiting branches in transgenic Bt (Bacillus thuringiensis) cotton (Gossypium hirsutum L.) from 2003 to 2004. Plants were undamaged and treated by removing two basal fruiting branches (FB) at squaring to form the control and the removal treatment, respectively. The plant height, leaf area (LA), dry weight of fruiting forms (DWFF), the number of fruiting nodes (NFN), photosynthetic (Pn) rate, and levels of leaf chlorophyll (Chl), N, P, K, and Cry lAc protein in main- stem leaves were measured at a 10- or 20-d interval after FB removal, and the sink/source ratio as indicated by NFN/LA and DWFF/LA was determined. FB removal significantly increased the plant height, LA, and plant biomass in both years. Lint yields were increased 7.5 and 5.2% by removal compared with their controls in 2003 and 2004, respectively. Significant increases in boll size (5.7 and 5.1%) were also observed in removal than in control for both years. Either NFN/LA or DWFF/LA was significantly reduced by removal before 40 d after removal; however, both NFN/LA and DWFF/LA were significantly enhanced by FB removal at 80 d after removal compared to the untreated control. There was no significant difference in fiber quality in the first two harvests between removal and control, but fiber strength and micronarie in the third harvest were significantly improved by FB removal. In terms of leaf Chl, Pn rate, levels of total N, P, and K in late season, leaf senescence was considerably delayed by FB removal. Levels of CrylAc protein in the fully expanded young leaves were considerably higher in FB-excised plants than in control, indicating FB removal enhanced CrylAc expression. It is suggested that the yield and quality improvement with FB removal may be attributed to the increased NFN/LA or DWFF/LA in late season and delayed leaf senescence, respectively. FB removal can be a potential practice incorporated into the intensive cultivation system for enhancing transgenic Bt cotton production. 展开更多
关键词 branch removal bt cotton cry lAc protein leaf senescence photosynthetic rate sink/source ratio
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不同样品前处理对转基因棉Bt蛋白含量测定的影响
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作者 张伟 魏蜜 +1 位作者 王立华 鲁旭东 《安徽农业科学》 CAS 2016年第8期141-143,共3页
[目的]寻找一种稳定、准确、灵敏度高的检测转Bt植物中Bt杀虫蛋白的方法。[方法]比较几种ELISA方法检测Bt杀虫蛋白的效果,并就样品前处理方式以及温育时间、显色时间等影响因子进行分析。[结果]自制抗体法较试剂盒更为灵敏,其同一时期... [目的]寻找一种稳定、准确、灵敏度高的检测转Bt植物中Bt杀虫蛋白的方法。[方法]比较几种ELISA方法检测Bt杀虫蛋白的效果,并就样品前处理方式以及温育时间、显色时间等影响因子进行分析。[结果]自制抗体法较试剂盒更为灵敏,其同一时期同一组织的Bt蛋白含量显著高于试剂盒,但不同方法对Bt蛋白含量的检测结果在时空表达变化的趋势上基本一致。样品在液氮研磨后抽提5或8 h,对检测结果影响较小,差异未达显著水平;匀浆机研磨过滤后离心与否,对检测结果影响较小。从样品前处理方式看,匀浆机较液氮研磨对样品组织蛋白的萃取效率更高,其检测结果显著高于液氮研磨处理的样品,差异达显著水平。温育时间和显色时间的延长会增加样品的吸光值,对蛋白含量检测值有一定影响,但差异不显著。[结论]不同样品前处理方式对转基因棉Bt蛋白含量测定存在显著影响。 展开更多
关键词 ELISA bt毒蛋白 cry Lab/acreamide试剂盒
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美国白蛾中肠碱性磷酸酶HcALP1与苏云金杆菌3种Bt蛋白的体外结合特性分析 被引量:4
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作者 常梦颖 赵丹 +3 位作者 张雅昆 徐畅 陆秀君 郭巍 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期331-337,共7页
美国白蛾(Hyphantria cunea)是危害桑树的主要害虫之一。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白Cry对其作用机制,克隆美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因,并对其编码蛋白的时空表达特异性及与Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea1... 美国白蛾(Hyphantria cunea)是危害桑树的主要害虫之一。为明确苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)杀虫晶体蛋白Cry对其作用机制,克隆美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因,并对其编码蛋白的时空表达特异性及与Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea10的结合特性进行分析。根据美国白蛾中肠转录组数据获得碱性磷酸酶基因序列,设计特异引物,PCR扩增得到美国白蛾中肠碱性磷酸酶基因全长,命名为hcalp1(GenBank登录号为MH796758)。该基因开放阅读框为1 629 bp,编码542个氨基酸,预测蛋白质分子质量和等电点分别为60413 kD和583。实时荧光定量PCR和Western blot结果表明,hcalp1在美国白蛾4龄幼虫表达量最高,HcALP1蛋白在4龄幼虫中肠中的表达量也最高。构建原核重组表达载体pET30a-hcalp1,IPTG诱导表达获得分子质量约为70 kD的重组HcALP1蛋白;将Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea10原毒素分别经胰蛋白酶消化后与HcALP1重组蛋白进行体外配体印迹试验,发现HcALP1重组蛋白可与Bt Cry1Ab35、Cry1Ac和Cry9Ea10发生特异结合,推测HcALP1可能为3种Bt蛋白的中肠受体蛋白。 展开更多
关键词 美国白蛾 碱性磷酸酶 bt cry蛋白 配体印迹 实时荧光定量PCR
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Bt Cry毒素抗虫模拟物靶向创新设计 被引量:5
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作者 徐重新 刘媛 +1 位作者 张霄 刘贤金 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第2期446-458,共13页
Bt Cry毒素是当前研究最深入、应用最广的生物抗虫蛋白,对农业害虫的绿色防治发挥了重大作用。然而,随着其制剂和转基因抗虫作物的广泛应用,由此驱动诱发的靶标害虫抗药性及潜在生态安全风险等问题日益凸显。探寻具备模拟Bt Cry毒素杀... Bt Cry毒素是当前研究最深入、应用最广的生物抗虫蛋白,对农业害虫的绿色防治发挥了重大作用。然而,随着其制剂和转基因抗虫作物的广泛应用,由此驱动诱发的靶标害虫抗药性及潜在生态安全风险等问题日益凸显。探寻具备模拟Bt Cry毒素杀虫功能的新型抗虫蛋白材料,不仅可为农作物持续健康生产保驾护航,也能在一定程度上缓解靶标害虫对Bt Cry毒素的抗药性压力。近年来,笔者团队以抗体“免疫网络学说(immune network theory)”中Ab2β类型抗独特型抗体(anti-idiotype antibody, Anti-Id)具备模拟抗原结构和功能的特性为理论依据,借助噬菌体展示抗体库及特异性抗体高通量筛选与鉴定技术,设计Bt Cry毒素抗体为包被靶点抗原,从噬菌体抗体库中靶向筛选到了一系列具备模拟Bt Cry毒素抗虫功能的Ab2β类型抗独特型抗体(即Bt Cry毒素抗虫模拟物),其中活性最强的Bt Cry毒素抗虫模拟物对靶标害虫的致死率接近相应原Bt Cry毒素的80%,初步实现了Bt Cry毒素抗虫模拟物的靶向设计。本文从理论依据、技术条件、研究现状等方面进行系统概述,并就相关技术发展趋势以及如何推进现有成果落地应用等展开深入探讨,旨在为绿色抗虫材料创新研发提供全新思路和实例参考。 展开更多
关键词 bt cry毒素 抗独特型抗体 噬菌体展示抗体 抗虫蛋白 生物防治
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Transfer of CrylAc and Cry2Ab proteins from genetically engineered Bt cotton to herbivores and predators 被引量:1
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作者 Michael Meissle Jorg Romeis 《Insect Science》 SCIE CAS CSCD 2018年第5期823-832,共10页
With the cukivation of Bt cotton, the produced insecticidal Cry proteins are ingested by herbivores and potentially transferred along the food chain to natural enemies, such as predators. In laboratory experiments wit... With the cukivation of Bt cotton, the produced insecticidal Cry proteins are ingested by herbivores and potentially transferred along the food chain to natural enemies, such as predators. In laboratory experiments with Bollgard II cotton, concentrations of CrylAc and Cry2Ab were measured in Lepidoptera larvae (Spodoptera littoralis, Hello- this virescens), plant bugs (Euschistus heros), aphids (Aphis gossypii), whiteflies (Bemisia tabaci), thrips ( Thrips tabaci, Frankliniella occidentalis), and spider mites (Tetranychus urticae). Tritrophic experiments were conducted with caterpillars ofS. littoralis as prey and larvae of ladybird beetles (Harmonia axyridis, Adalia bipunctata) and lacewings (Chrysop- erla carnea) as predators. Immunological measurements (ELISA) indicated that herbivores feeding on Bt cotton contained 5%-50% of the Bt protein concentrations in leaves except whiteflies and aphids, which contained no or only traces of Bt protein, and spider mites, which contained 7 times more Cry 1Ac than leaves. Similarly, predators contained 1%-30% of the Cry protein concentration in prey. For the nontarget risk assessment, this indicates that Bt protein concentrations decrease considerably from one trophic level to the next in the food web, except for spider mites that contain Bt protein concentrations higher than those measured in the leaves. Exposure of phloem sucking hemipterans is negligible. 展开更多
关键词 arthropod food web Bacillus thuringiensis bt cotton cry protein ELISA transgenic plants
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几种苏云金芽孢杆菌杀虫晶体蛋白对黑龙江省主要蔬菜害虫小菜蛾活性分析 被引量:5
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作者 韩岚岚 戴长春 +2 位作者 宋福平 张杰 赵奎军 《北方园艺》 CAS 北大核心 2008年第8期198-200,共3页
利用已克隆的3种Bt cry基因cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和1种野生菌株HD-73(cry1Ac)表达的4种Bt Cry杀虫晶体蛋白,对小菜蛾进行生物活性分析,并将Cry1Ac杀虫晶体蛋白分别与其它3种蛋白按1∶1的比例组合,对小菜蛾进行生物活性测定。结果表明... 利用已克隆的3种Bt cry基因cry1Ca、cry1Ia、cry2Ab和1种野生菌株HD-73(cry1Ac)表达的4种Bt Cry杀虫晶体蛋白,对小菜蛾进行生物活性分析,并将Cry1Ac杀虫晶体蛋白分别与其它3种蛋白按1∶1的比例组合,对小菜蛾进行生物活性测定。结果表明:单独使用Cry1Ac的活性最高,LC50为2.39μg/mL,Cry1Ac与Cry2Ab混合对小菜蛾的具有较高的毒力,LC50为48.91,高于其它组合。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 cry蛋白 生物测定 小菜蛾
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上海地区苏云金芽孢杆菌的分离及其对草地贪夜蛾室内杀虫活性的测定
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作者 陈诗杰 曹越平 《上海农业学报》 2022年第5期78-83,共6页
为进一步发掘国内苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的菌株资源,在上海市若干地区搜集土壤样品,采用NaAc-抗生素筛选法从土样中分离野生Bt菌株,通过光学显微镜染色镜检、PCR-RFLP体系及SDS-PAGE电泳等方法对分离菌株的杀虫晶... 为进一步发掘国内苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis,Bt)的菌株资源,在上海市若干地区搜集土壤样品,采用NaAc-抗生素筛选法从土样中分离野生Bt菌株,通过光学显微镜染色镜检、PCR-RFLP体系及SDS-PAGE电泳等方法对分离菌株的杀虫晶体蛋白形态、蛋白表达量及cry基因类型进行分析,并测定了分离菌株对草地贪夜蛾的室内杀虫活性。结果表明:在上海地区采集的165份土壤样品中共分离得到苏云金芽孢杆菌50株,总出菌率为8.20%;其伴孢晶体蛋白呈菱形、球形、椭球形、不规则形等晶体形态,以球形晶体为主;多数表达130 ku、90 ku、80 ku、50 ku蛋白;分离菌株所含cry基因类型丰富,包含cry1、cry3、cry8类等共16种基因类型,以cry32及cry8类基因居多;有6株菌株对草地贪夜蛾表现出高杀虫活性,72 h校正死亡率最高可达100%。上述分离菌株对后续开展草地贪夜蛾的绿色防控及抗性治理具有重要的实践意义。 展开更多
关键词 苏云金芽孢杆菌 伴孢晶体蛋白 cry基因 bt分离菌株 草地贪夜蛾
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Bt杀虫基因研究现状与趋势 被引量:11
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作者 束长龙 张风娇 +2 位作者 黄颖 李艳秋 张杰 《中国科学:生命科学》 CSCD 北大核心 2016年第5期548-555,共8页
Bt(Bacillus thuringiensis)是一种革兰氏阳性昆虫病原菌,对哺乳动物等非靶标生物安全无害,cry基因、cyt基因、vip基因编码的杀虫蛋白是其主要活性物质.目前,Bt除了用作生物杀虫剂外,表达Bt杀虫蛋白的转基因抗虫植物也已经被广泛用于害... Bt(Bacillus thuringiensis)是一种革兰氏阳性昆虫病原菌,对哺乳动物等非靶标生物安全无害,cry基因、cyt基因、vip基因编码的杀虫蛋白是其主要活性物质.目前,Bt除了用作生物杀虫剂外,表达Bt杀虫蛋白的转基因抗虫植物也已经被广泛用于害虫的防治,Bt在应用方面取得的巨大成功,极大地促进了该领域的研究发展.本文对Bt杀虫基因克隆技术、Cry蛋白结构多样性、杀虫基因命名与专利保护、研究论文发表等现状与趋势进行分析,发现我国的Bt基础研究和应用基础研究已经与国际接轨,但是产业化明显滞后,企业投入偏少.从发展趋势来看,我国在该领域仍然有较大的发展空间,参考美国转基因作物产业化与企业创新产出的时序关系,随着我国转基因作物向产业化推进,企业的研究与创新将成为一个新的增长点. 展开更多
关键词 bt 基因克隆 cry蛋白结构多样性 专利保护 论文发表
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多年种植Bt稻后外源蛋白在土壤中的积累
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作者 王永模 邓嘉昕 +1 位作者 张金鑫 贾瑞宗 《应用生态学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期119-125,共7页
外源蛋白在环境中的残留与积累是转Bt基因作物环境安全评价的重要内容之一。我国已育成多个具有商业化前景的Bt稻品系,但目前多年种植Bt稻后Bt外源蛋白是否会在土壤中积累还不清楚。本研究在同一试验田连续9年种植了转cry1Ab/1Ac基因明... 外源蛋白在环境中的残留与积累是转Bt基因作物环境安全评价的重要内容之一。我国已育成多个具有商业化前景的Bt稻品系,但目前多年种植Bt稻后Bt外源蛋白是否会在土壤中积累还不清楚。本研究在同一试验田连续9年种植了转cry1Ab/1Ac基因明恢63(华恢1号)和转cry2A基因明恢63水稻,采用酶联免疫吸附法(ELISA)跟踪监测了分蘖期和收获后60 d根际土中外源蛋白含量变化,试验第1年(2012年)和最后1年(2020年)还测定了苗期、开花期和成熟期根际土中外源蛋白含量。结果表明:2012年,转cry1Ab/1Ac基因明恢63在苗期、分蘖期、开花期、成熟期和收获后60 d根际土中外源蛋白含量分别为1.25、1.77、1.97、1.71和0.30 ng·g^(-1),2020年分别为1.30、1.69、2.03、1.77和0.43 ng·g^(-1);2012年,转cry2A基因明恢63在苗期、分蘖期、开花期、成熟期和收获后60 d根际土中外源蛋白含量分别为0.91、1.52、1.53、1.37和0.12 ng·g^(-1),2020年分别为0.95、1.43、1.61、1.40和0.15 ng·g^(-1)。多因素方差分析显示,时间效应对Bt外源蛋白积累不显著,而品种和生育期效应显著。Bt稻生长过程中根际土中可以检测出微量的Bt外源蛋白,但收获后60 d已经基本降解完毕,根际土中Bt外源蛋白含量不会随着种植时间的增加而累积。 展开更多
关键词 bt cry1Ab/1Ac cry2A 外源蛋白 bt毒素 土壤 累积
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Bt伴孢晶体毒素对不同时期中华卵索线虫的毒力 被引量:1
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作者 吴鸿雁 饶祥军 +1 位作者 刘绪生 王国秀 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期405-409,共5页
采用不同浓度的10株Bt伴孢晶体蛋白分别作用于中华卵索线虫受精卵及各期幼虫,探讨该类Bt蛋白对多种农林害虫天敌中华卵索线虫的安全性。结果表明:S1-1、S1-4、S3-2、S3-3、S7-1、S7-6和S8-1等7个菌株同时表达cry1Ac和cry5基因,S1-8、S2-... 采用不同浓度的10株Bt伴孢晶体蛋白分别作用于中华卵索线虫受精卵及各期幼虫,探讨该类Bt蛋白对多种农林害虫天敌中华卵索线虫的安全性。结果表明:S1-1、S1-4、S3-2、S3-3、S7-1、S7-6和S8-1等7个菌株同时表达cry1Ac和cry5基因,S1-8、S2-1和HD-1等3个菌株只表达cry1Ac基因。含Cry5蛋白的菌株对线虫卵表现出一定的杀灭毒性,其中S1-4菌株的毒力最强,LD50作用24、48和72h时分别为0.1503、0.1313和0.0182μg/mL。而Bt伴孢晶体蛋白对感染期幼线虫和寄生后期幼线虫无明显致死效应;经Bt处理的感染期幼线虫对棉铃虫的感染率及平均感染强度与对照组无显著性差异(P>0.05),寄生后期幼线虫能正常蜕皮和交配产卵。将含上述浓度Bt蛋白的棉花叶片喂食已感染线虫的棉铃虫,线虫能够正常发育并从宿主体内脱出。 展开更多
关键词 中华卵索线虫 昆虫天敌 bt伴孢晶体蛋白 cry基因型 毒力 农林害虫
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