根癌农杆菌介导AtNHX1基因转化甘蓝型油菜的研究(摘要)(英文)

[目的]研究根癌农杆菌介导AtNHX1基本对甘蓝型油菜的转化。[方法]采用根癌农杆菌介导法,应用cre/lox植物表达载体,研究Na+/H+逆向转运蛋白AtNHX1基因对甘蓝型油菜的转化。[结果]甘蓝型油菜带柄子叶的再生频率远大于下胚轴的再生频率,因此选择带柄子叶作为转化受体。带柄子叶经浓度OD600为0.4的菌液中侵染8～10min,卡那霉素抗性绿苗率达3.75%。[结论]对抗性植株的PCR检测证明,外源基因已经整合到油菜基因组中,为提高甘蓝型油菜耐盐能力研究提供了新的途径。

花粉管通道法将Bt毒蛋白基因导入优良玉米自交系

以杂交育种中广泛使用的优良玉米自交系为材料 ,用花粉管通道法介导质粒pGBIL0 4(actin Bt 35S bar)DNA的转化 ,经对T0 代 1 4 0 3株植株Basta抗性筛选和PCR分子鉴定 ,共获得 5株PCR阳性植株 ,分别为授粉后 8,1 2 ,1 4 ,1 8h导入所得 ,总的平均转化率为 0 36 %。结果表明 :只要掌握好导入时机 。

转基因抗虫油菜中Bt杀虫蛋白基因稳定遗传和高效表达及抗虫性研究

通过对转 Bt杀虫蛋白基因油菜植株的后代进行卡那霉素抗性分析和 PCR技术检测 ,结果表明 :Bt杀虫蛋白基因是以单拷贝、杂合地整合到转基因植株 (T0 1、T0 2、T0 3、T0 5、T0 6、T0 7、T0 8)的基因组中 ,并稳定地遗传。EL ISA检测表明 :在第 3～第 9叶期 Bt杀虫蛋白基因在转基因油菜植株中高效地表达 ,Bt杀虫蛋白的表达量为 170～ 2 6 0 ng/ 2 5mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 6 7%～ 0 .10 5 % ,其抗虫效果高达 72 .0 %～ 94 .4 %。但从第 11叶期后 Bt杀虫蛋白表达量显著地降低 ,只有 7～ 5 0 ng/ 2 5 mg鲜叶 ,占植物可溶性蛋白的 0 .0 0 3%～ 0 .0 2 %。

子房注射法与农杆菌介导法转化甘蓝型油菜的比较研究

以甘蓝型油菜湘油 1 3号为试验材料 ,运用根癌农杆菌介导法和子房注射法成功地将Bt杀虫蛋白基因导入油菜 .在特定的条件下 ,以子叶柄作为转化受体进行农杆菌介导转化 ,其转化效率受侵染时间和共培养时间的影响 ,最佳侵染时间为 3～ 5min,最佳共培养时间为60～ 72 h;子房注射法的最佳注射时间为授粉后第 2 0～ 30 h,最适注射部位为子房中部 ,DNA注射量为 0 .5～ 1 .5μg.在最佳转化条件下它们分别获得抗卡那霉素植株的频率为 8.3%、1 2 .8% .分子检测实验证明 ,Bt杀虫蛋白基因已整合到油菜基因组中 .农杆菌介导法获得转基因植株的频率为 1 .1 8% ,子房注射法的转化频率为 2 .66% ,可见子房注射法是一种有效、实用的油菜遗传转化方法 .

半矮秆基因BnaA6.rga-ds的亚细胞定位和转基因甘蓝型油菜的鉴定

Bna A6.rga-ds是本研究室从甘蓝型油菜突变体ds-1中图位克隆获得的半矮秆基因,它编码一个功能获得型(gain of function)突变的DELLA蛋白,能够组成型抑制赤霉素信号的转导。蛋白质理化性质的预测显示,Bna A6.rga-ds及其野生型蛋白Bna A6.RGA均为酸性蛋白。将Bna A6.RGA与不同物种同源蛋白的氨基酸序列比对发现,其C端的保守性高于N段。蛋白质结构的预测显示α-螺旋和无规卷曲是其二级和三级结构的主要元件。系统进化分析表明,Bna A6.RGA与十字花科植物拟南芥、小盐芥和荠菜等的同源蛋白具有很高的相似性。BLAST分析表明甘蓝型油菜基因组中共包括4个拷贝的BnaRGA基因。亚细胞定位研究结果显示,Bna A6.RGA及Bna A6.rga-ds均定位于细胞核,它们可能参与下游基因的转录调控。通过农杆菌介导的方法将Bna A6.rga-ds转化甘蓝型油菜品种Westar,获得13株阳性转基因植株,出现明显矮化表型,表明Bna A6.rga-ds基因具有调控油菜株高的能力。

蜘蛛杀虫肽与Bt-Toxin C肽融合蛋白基因转入棉花的研究

通过农杆菌介导法将蜘蛛杀虫肽与Bt毒蛋白C肽的融合蛋白基因导入了陆地棉(GossypiumhirsutumL.)栽培品种中棉所10号,并获得大量小苗。小苗经GUS染色和PCR检测,证明蜘蛛杀虫肽基因已经转入到转化植株的基因组内,检测阳性率分别为27.1%和60.42%。

转Bt基因抗虫油菜花粉对蜜蜂生存的影响

将转Bt基因抗虫油菜(B.napusL.)和非转基因油菜湘油13号种植小区分别用尼龙网罩住,放入蜜蜂和蜂箱,蜜蜂生活10d。结果表明:与对照非转基因油菜湘油13号相比,转Bt基因抗虫油菜花粉对蜜蜂生存影响不大,t测验表现两者差异不显著。

油菜转基因育种研究进展

简要介绍了国外油菜转基因育种情况 ,包括转除草剂抗性基因 ,病原菌抗性基因 ,耐重金属基因 ,影响种子贮藏产物基因 ,影响繁殖特性基因 ,医药和工业产品基因 ,以及启动子调节基因等。较详细介绍了湖南农业大学在Bt毒蛋白基因转化甘蓝型油菜育成抗虫新品系、基因工程雄性不育系、恢复系选育和杂种优势利用 ,以及反义FAD2基因转化甘蓝型油菜双低品种提高油酸含量的研究结果 ;浙江省农科院利用反义PEP基因转化甘蓝型油菜提高种子含油量的研究结果。

我国科研人员培育出转Bt基因抗虫油菜品系

为解决我国主要油料作物油菜的虫害问题，提高油菜产量，同时减少农药使用量，保护生态环境，由官春云教授领导的科研组经过4年攻关，采用基因工程技术将Bt毒蛋白基因转入油菜细胞中，使油菜获得抗虫性，并在油菜中稳定遗传和表达。

油菜高效转化系统的研究

以甘蓝型油菜湘油13为试验材料,运用子房注射法将BT毒蛋白基因导入油菜。在授粉后第20小时至第30小时用自制的微玻针从子房中部注射0.5～1.5μg外源DNA,以高达12.8％的频率获得抗卡那霉素植株。分子杂交分析证明BT毒蛋白基因已整合到油菜基因组中,转化频率为1.6％,表明子房注射法是一种有效、实用的油菜遗传转化方法。

转基因抗虫油菜品系选育和性状研究

为选育优质抗虫油菜新品系 ,在 Bt毒蛋白基因成功地转化到甘蓝型双低油菜品种湘油 13号后 ,对其植株性状、农艺性状和品质性状进行筛选 ,获得稳定的转 Bt基因油菜品系 .该品系除前期叶片稍大、叶色稍淡、苗期抗虫性较强外 ,其他性状与湘油

用子房注射法将Bt毒蛋白基因导入玉米的研究

本文在国内外首次报道了用子房注射的方法将Bt毒蛋白基因导入玉米自交系的全过程。获得的一株转基因玉米(T_0)自交留种,得到了71株T_1代的植株。转基因玉米(T_0)经点渍法、Southern吸印/分子杂交以及PCR扩增均获得阳性结果;用T_1代植株叶片DNA进行PCR扩增,在71株中有7株呈阳性反应;对其中4株进行抗玉米螟测试,呈现一定的抗虫效果;在海南岛用农大60玉米再次进行子房注射,也获得了成功,说明这种方法是可重复的,从而为利用基因工程技术改造玉米开拓了新的途径。