Bt转基因玉米的抗虫效果及其对田间动物种群影响的初步研究

通过比较Bt转基因玉米和常规玉米 (丹玉 13号 )的玉米螟卵量、被害株数及田间一些动物的种群数量 ,结果表明 :Bt转基因玉米对玉米螟具有较高的抗性 ,而且这种作用是持久的、稳定的。另外还发现 ,Bt转基因玉米对非鳞翅目昆虫及其他动物的影响甚微 。

用实时荧光PCR方法定量检测Bt176转基因玉米

以实时荧光PCR技术鉴定商业化种植的转基因玉米Bt176品系。根据转基因玉米Bt176中内源基因Zein和外源基因cry1Ab设计引物及TaqMan荧光探针,成功建立了检测转基因玉米Bt176品系的实时荧光PCR方法。结果表明,应用实时荧光PCR方法检测转基因作物,不仅可以达到品系鉴定的作用,而且可以用于转基因成分的检测。该方法简便迅速,降低了污染机会,为转基因作物及产品的品系检测提供了新方法。

玉米粉中转基因Bt176玉米的定量检测

使用根据转基因Bt176玉米中的外源基因CryIA(b)和内源基因Zein设计的引物和TaqMan荧光探针和ABIPRISM 770 0定量PCR仪对玉米粉中Bt176玉米的含量进行了定量检测 ,建立了Bt176玉米参照样品CryIA(b)和Zein的Ct值之差与样品中Bt176玉米含量之间的标准曲线和线性回归方程 。

转基因玉米Bt176品系特异性环介导等温扩增检测方法的研究

根据转基因玉米品系Bt176外源插入片段与玉米基因组序列设计和筛选品系特异性引物,并对反应体系和反应条件进行优化,最终建立转基因玉米品系Bt176的品系特异性LAMP检测方法。对该方法进行了灵敏度、特异性和稳定性评价。评价结果表明:该方法定性检测低限为0.5%,特异性和稳定性均达到100%。

实时荧光定量PCR检测转基因玉米Bt176测量不确定度分析

应用实时定量PCR方法测定样品中转基因玉米Bt176的含量,并从多个方面来分析测量的不确定度。结果显示,A类不确定度为0.0003,B类不确定度为0.0007,合成不确定度为0.001,有效自由度veff为272,包含概率P为95%,扩展不确定度U=0.002,测量结果为(0.8±0.2)%。不确定度评估结果表明,测量不确定度的主要来源是微量液体转移量的偏差。

转基因玉米Bt176液相芯片检测方法的建立

为建立转基因玉米Bt176的液相芯片检测方法,根据已公布的转基因玉米Bt176外源插入基因CaMV35S启动子序列,外源基因3'端与玉米基因组DNA连接区序列,同时以玉米特异Zein内源基因序列为参照,利用Primer Premier5.0等软件设计特异性引物和探针。将探针与荧光编码微球偶联后,与PCR产物杂交反应,用液相芯片检测仪(Bio-plex 200)检测荧光信号。检测结果显示,该方法具有高特异性及灵敏度,各条探针之间无交叉反应,最低检测限可达0.01%。初步建立了检测转基因玉米Bt176的液相芯片技术,为其他转基因作物的快速高通量检测提供了借鉴和经验。

转基因玉米BT11品系环介导等温扩增(LAMP)检测方法的建立

目的建立转基因玉米BT 11品系的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。方法根据转基因玉米BT 11品系特有序列(AY123624.1和AY629236)设计引物,优化建立LAMP反应体系,对该体系进行特异性、灵敏度、稳定性分析。结果本研究设计的引物具有很好的特异性,可特异性检测出转基因玉米BT 11品系;检测灵敏度可达0.5%;经精密度实验分析,该方法的稳定性良好。结论 LAMP方法检测转基因玉米品系BT 11具有特异性高、稳定性好、快速灵敏、过程可视等优点,具有广阔的应用前景。

转基因玉米质粒分子国家标准样品的构建

本文研制转基因玉米常见的4个品系:BT11、MON810、NK603和T25质粒分子国家标准样品。研究重点包括目标序列和内标准基因序列的选择和扩增、标准样品定值和分析等。均匀性和稳定性结果表明,所研制的转基因玉米4个品系标准样品均匀稳定。采用PicoGreen DNA分子荧光定量方法定值标准样品。多家单位合作定值,确定标准样品的标准值及其不确定度。所研制的转基因玉米质粒分子标准样品获得了国家标准样品证书,适用于转基因产品的定量和定性测定。