布鲁氏菌Omp2a-BtpB多表位疫苗结构预测及免疫模拟

目的运用生物信息学方法对布鲁氏菌Omp2a和BtpB的T、B细胞优势表位进行预测、分析,从而构建多表位疫苗。方法从UniProt数据库中获取Omp2a和BtpB的氨基酸序列,应用I-TASSER构建三级结构。选取优势表位辅以佐剂构建多表位疫苗并进行免疫模拟。结果在Omp2a中获得2个B细胞优势表位,5个CTL细胞优势表位,3个Th细胞优势表位;在BtpB中获得1个B细胞优势表位,5个CTL细胞优势表位,1个Th细胞优势表位。构建的多表位疫苗为亲水性的稳定蛋白。结论基于生物信息学方法设计了新型布鲁氏菌多表位疫苗,为进一步研究相关疫苗提供理论基础。

布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体的构建及在293T细胞中的表达

为了构建布鲁氏菌16M BtpA和BtpB真核表达载体,便于深入研究其在布鲁氏菌逃逸宿主免疫机制中发挥的作用。根据GenBank公布的布鲁氏菌16M BtpA和BtpB序列设计了特异性引物,并提取布鲁氏菌16M总RNA,将其逆转录成cDNA为模板,进行了PCR扩增,获得BtpA和BtpB目的片段,连接至pMD18-T进行克隆纯化,再与pcDNA3.1载体进行连接,经PCR、酶切和测序分析等方法鉴定后,利用Lipofectamine TM 2000脂质体转染至293T细胞,Western blot检测BtpA和BtpB蛋白的表达。结果显示,PCR扩增出了873 bp的BtpA基因片段和924 bp的BtpB基因片段,依次连至克隆载体pMD18-T和真核表达载体pcDNA3.1,经限制酶Eco RⅠ和XbaⅠ酶切验证正确,测序分析显示与GenBank公布的序列信息完全一致;Western blot检测结果显示,pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA分别在32 ku和35 ku处出现了条带,与预期结果完全相符,说明能在293T细胞中表达。成功构建了pcDNA3.1-BtpA-HA和pcDNA3.1-BtpB-HA真核表达载体,并证实了其能在293T细胞中表达,为后续研究其作用与机制提供了材料。