BRL-CM在昆白小鼠胚胎干细胞分离培养中的应用

目的:探讨Buffalo大鼠肝细胞条件培养基(BRL-CM)在昆白小鼠胚胎干细胞(ES)分离培养中的应用。方法:用BRL-CM培养生长在STO(一种小鼠成纤维细胞)饲养层上的昆白小鼠的桑椹胚和囊胚,然后由囊胚内细胞团(ICM)得到ES细胞集落,在有饲养层和无饲养层时用BRL-CM培养分离得到的ES集落。结果:桑椹胚在上述培养条件下能发育成囊胚,然后囊胚在饲养层上长出ICM;用0.1%Trypsin-0.016%EDTA离散ICM,接种到饲养层上培养得到ES集落,ES集落能维持早期传代。结论:在分离培养昆白小鼠的ES细胞时,BRL-CM结合STO饲养层可以用来培养桑椹胚和囊胚,桑椹胚可以发育为囊胚并孵出内细胞团;同时,这种培养条件也能维持昆白小鼠ES细胞的增殖和早期传代。

肝脏细胞条件培养基诱导大鼠骨髓间质细胞分化为肝细胞的作用

目的 :探讨肝脏细胞条件培养基诱导大鼠骨髓间质细胞分化为肝细胞的作用。方法 :从大鼠骨髓中分离纯化培养间质细胞 ,诱导前 2 4小时加 1μg/L碱性成纤维生长因子 (bFGF)入培养液中以促进细胞分裂 ,再以肝脏细胞条件培养基作诱导剂 ,分别在诱导培养 0、 7、 14、 2 1、 2 8天时 ,留取细胞 ,观察细胞形态的变化 ,并采用免疫细胞化学方法检测肝细胞功能标志物 (AFP、白蛋白、CK18)、用PAS法进行糖元染色试验 ,以验证诱导分化的结果。结果 :诱导后 3天间质细胞表现为肝细胞样 ,随着诱导时间的延长 ,肝细胞功能标志逐渐出现和成熟。AFP在 7、 14天时表达较高 ,2 1、 2 8天时表达显著减少 ;白蛋白、CK 18和糖元随着诱导时间的延长表达逐渐增多。结论 :肝脏细胞条件培养基能诱导骨髓间质细胞分化为肝细胞。