补肝健膝方对膝骨关节炎模型兔COMP、CTX-Ⅱ及炎性指标的影响

目的通过研究补肝健膝方对膝骨关节炎(knee osteoarthritis,KOA)模型兔血清、关节腔积液中白细胞介素-1(interleukin-1,IL-1)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平以及血清中软骨寡聚基质蛋白(cartilage oligomeric matrix protein,COMP)和Ⅱ型胶原C端肽(C-telopeptide of typeⅡcollagen,CTX-Ⅱ)含量的影响,进一步揭示补肝健膝方对KOA的作用机制。方法采用木瓜蛋白酶关节注射法制作兔KOA模型。随机分为空白对照组、模型对照组、独活寄生汤组及补肝健膝方低、中、高剂量组,每组5只。造模4周后,空白对照组和模型对照组每日灌胃生理盐水1次;独活寄生汤组每日以独活寄生汤煎剂2.895 g/(kg·d)灌胃1次;补肝健膝方低、中、高剂量组每日以补肝健膝方煎液[1.962、3.924、7.848 g/(kg·d)]灌胃1次。治疗4周后,采用HE染色观察膝关节软骨的病理改变,Pelletier评分评估软骨损伤情况,ELISA检测血清、关节腔积液IL-1、TNF-α水平以及血清COMP、CTX-Ⅱ含量。结果与空白对照组相比,模型对照组软骨关节表面欠光滑,软骨局部可见黏液样变,软骨及深层细胞数目显著降低;Pelletier评分显著升高(P<0.05);血清及关节腔积液中的IL-1、TNF-α含量及血清中COMP、CTX-Ⅱ含量均升高(P<0.05)。与模型对照组相比,独活寄生汤组、补肝健膝方各剂量组软骨表面层次分布更为清晰,潮线结构完整;Pelletier评分降低(P<0.05);血清、关节腔积液IL-1、TNF-α水平以及血清中COMP和CTX-Ⅱ含量均降低(P<0.05)。与独活寄生汤组比较,补肝健膝方各剂量组软骨表面层次分布更为清晰,潮线结构更为完整;Pelletier评分升高(P<0.05);血清及关节腔积液IL-1、TNF-α及血清中COMP、CTX-Ⅱ含量降低(P<0.05)。结论补肝健膝方可有效改善KOA兔骨微结构、调节其膝关节滑膜细胞活性,可能与抑制血清、关节腔积液IL-1、TNF-ɑ水平以及血清中COMP和CTX-Ⅱ含量有关。

补肝健膝方对膝骨关节炎模型兔软骨Wnt信号通路的影响

目的:观察补肝健膝方对膝骨关节炎模型兔软骨Wnt信号通路的影响。方法:将36只新西兰兔随机分为正常组、模型组、阳性药物组、补肝健膝方低剂量组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组,每组各6只。采用木瓜蛋白酶关节腔注射方法制备兔膝骨关节炎模型,造模成功后,补肝健膝方低、中、高剂量组兔予相应剂量补肝健膝方灌胃,阳性药物组兔予独活寄生汤灌胃。正常组、模型组兔予等量生理盐水灌胃。给药4周后,采用ELISA法检测关节液白细胞介素(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平,取关节软骨及滑膜进行大体观察和光镜下显微形态观察,采用Western blotting法检测软骨组织Wnt3a、β-catenin、MMP-13蛋白相对表达量。结果:HE染色和大体观察显示补肝健膝方能减轻软骨退行性变,对软骨具有保护作用。模型组兔关节液中IL-1、TNF-α水平高于正常组(P<0.01),阳性药物组、补肝健膝方低剂量组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组兔关节液IL-1、TNF-α水平均低于模型组(P<0.01)。模型组兔关节软骨Wnt3a、β-catenin、MMP-13蛋白相对表达量高于正常组(P<0.01),补肝健膝方高剂量组兔关节软骨Wnt3a蛋白相对表达量低于模型组(P<0.05)。阳性药物组、补肝健膝方低剂量组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组兔关节软骨β-catenin蛋白相对表达量与模型组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。阳性药物组、补肝健膝方中剂量组、补肝健膝方高剂量组兔关节软骨MMP-13蛋白相对表达量均低于模型组(P<0.05)。结论:补肝健膝方能抑制兔膝骨关节炎模型软骨Wnt信号通路,从而减轻炎症反应,维持细胞外基质的完整性,改善膝骨关节炎模型中的软骨形态。