止泪补肝散加减治疗功能性泪溢的临床研究

目的:观察止泪补肝散加减对功能性泪溢的治疗效果。方法:将90例功能性泪溢患者随机分为治疗组和对照组,每组各45例。治疗组给予中药汤剂止泪补肝散加减口服,对照组给予复方硫酸锌滴眼液点眼,治疗时间为30 d。比较两组的总有效率、流泪频率、泪河高度、中医证候积分及安全性。结果:治疗组总有效率为79.27%(65/82),对照组为38.16%(29/76),治疗组总有效率高于对照组(P<0.01)。治疗后两组患者的流泪频率Munk分级值均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组患者的Munk分级值低于对照组(P<0.01)。治疗后两组患者的泪河高度均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组患者的泪河高度低于对照组(P<0.05)。治疗后两组患者的中医证候总评分均较治疗前降低(P<0.05),且治疗组患者的中医证候总评分低于对照组(P<0.01)。两组患者治疗后、随访期不良反应症状量表(TESS)评分比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:止泪补肝散加减能有效治疗功能性泪溢,降低患者流泪频率,降低泪河高度,减轻症状,且安全性高。

补肝散对感染血吸虫小鼠肝损伤后肝组织Bcl-2、Bax水平的影响

目的:观察补肝散干预感染血吸虫小鼠肝损伤模型后,对肝组织凋亡相关基因Bcl-2和Bax蛋白表达水平的影响,探讨补肝散对肝损伤的防护作用机制。方法:选择健康8周龄雄性昆明小白鼠108只,随机分为5组,将血吸虫尾蚴(18条/只)经小鼠腹部皮肤攻击感染造模,每组定期随机抽取6只小鼠,处死后留取其肝脏左叶,置于10%中性甲醛(用PBS配)固定,免疫组化法检测Bcl-2、Bax蛋白的表达水平。结果:①Bcl-2、Bax表达在模型组小鼠肝组织中的阳性率均明显升高,与正常组比较差异有显著性意义(P<0.05),Bcl-2/Bax比值下降(P<0.05);②补肝散组与模型组相比小鼠Bcl-2表达升高差异有显著性意义(P<0.05),Bax表达升高差异无显著性意义(P>0.05),Bcl-2/Bax比值增高差异有显著性意义(P<0.05)。结论:补肝散可促进Bcl-2表达,使Bcl-2/Bax比值上调,减少肝细胞的凋亡,进而防护血吸虫性小鼠肝损伤,发挥抗纤维化的作用。

从肝论治失眠探析

失眠的病位虽在心,但与肝关系密切;肝气郁结、肝郁化火、肝脉瘀滞、肝血亏虚、肝阴不足、肝气虚馁等病机变化极易导致阴阳失衡,从而阴阳失交发生本病。临床上从肝论治,分别采用疏肝解郁、清肝泻火、活血化瘀、补肝养血、滋阴清热、益气镇惊等法,取得了较好的疗效。

正交优化微波提取补肝散中抗抑郁有效组分群的工艺

目的优选微波提取补肝散中总黄酮和总皂苷的工艺。方法以总黄酮和总皂苷的含量为考察指标,采用正交试验法,考察乙醇体积分数、辐射温度、微波功率和提取时间对微波醇提补肝散中总黄酮和总皂苷提取量的影响。结果总黄酮和总皂苷的微波提取最佳工艺为乙醇体积分数50%,辐射温度80℃,微波功率200W,提取时间15min。结论优化的微波提取补肝散中总黄酮和总皂苷的工艺条件稳定、可行。

基于线粒体自噬研究补肝散对衰老大鼠肝脏损伤的影响

目的:基于肝气虚理论和线粒体自噬探讨衰老机制,观察补肝散对衰老大鼠肝脏损伤的影响。方法:SPF级雄性SD大鼠32只,随机分为空白组、模型组、补肝散组、雷帕霉素组,每组8只。除空白组腹腔注射0.9%氯化钠溶液(10 mL/kg)外,其余各组均腹腔注射D-半乳糖溶液(D-gal,400 mg/kg),复制衰老大鼠模型。造模同时,补肝散组灌服补肝散煎液(14.06 g/kg),雷帕霉素组灌服雷帕霉素溶液(1 mg/kg),空白组和模型组灌服等量0.9%氯化钠溶液,连续56 d。测定各组大鼠体质量、抓力,血清丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)含量。HE染色观察各组大鼠肝组织病理学变化;RT-qPCR检测线粒体融合蛋白(Mfn)1、Mfn2、自噬关键分子酵母Atg6同系物1(Beclin1)、微管相关蛋白1轻链3(LC3)、p62 mRNA表达水平;免疫组化染色(ABC法)检测Beclin1、p62蛋白表达;Western Blot测定Mfn1、Mfn2、LC3蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠出现肝细胞水肿,肝血窦受挤压变窄,轻度脂肪变性及少量肝细胞坏死,另可见肝细胞嗜酸性病变及凋亡的肝细胞;体质量和抓力显著降低(P<0.05);血清MDA含量升高(P<0.05),SOD活性降低(P<0.05),ALT、AST、ALP含量升高(P<0.05);肝组织中Mfn1、Mfn2、p62 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05),Beclin1、LC3 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05)。与模型组比较,补肝散组大鼠肝细胞水肿减轻,脂肪变性减少,嗜酸性病变及凋亡的肝细胞明显减少;体质量和抓力显著升高(P<0.05);血清MDA含量降低(P<0.05),SOD活性升高(P<0.05),ALT、AST、ALP含量降低(P<0.05);肝组织中Mfn1、Mfn2、p62 mRNA及蛋白表达水平降低(P<0.05),Beclin1、LC3 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05)。结论:衰老大鼠肝脏损伤与线粒体自噬功能下降关系密切,可作为肝虚致衰的重要机制;补肝散可通过提高肝脏线粒体自噬水平,减缓衰老大鼠肝脏损伤程度。

补肝散对衰老大鼠学习记忆能力及氧化损伤的影响

目的:观察补肝散对衰老大鼠学习记忆及氧化损伤的影响,探讨肝气虚损与衰老的关系。方法:将24只SPF级雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、补肝散组(14.06g·kg^(-1)·d^(-1))、吡拉西坦组(0.4g·kg^(-1)·d^(-1))。除空白对照组腹腔注射0.9%氯化钠溶液(10mL·kg^(-1)·d^(-1))外,其余3组腹腔注射D-半乳糖(400mg·kg^(-1)·d^(-1))诱导衰老大鼠模型。造模同时分别按照相应剂量给予药物干预,连续治疗8周。观察大鼠一般生物学特征;采用八臂迷宫和跳台实验评价大鼠学习记忆行为;测定脑、胸腺、脾脏、肝脏脏器指数及血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量。结果:与空白对照组比较,模型组大鼠记忆错误次数显著增多(P<0.01),跳台潜伏期显著缩短(P<0.01);脑、胸腺、脾脏、肝脏脏器指数显著下降(P<0.01,P<0.05);SOD活性显著降低(P<0.01),MDA含量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,补肝散组大鼠记忆错误次数显著减少(P<0.05,P<0.01),跳台潜伏期显著延长(P<0.01);脑、胸腺、脾脏、肝脏脏器指数显著升高(P<0.01,P<0.05);SOD活性显著升高(P<0.01),MDA含量显著下降(P<0.05)。结论:补肝散可通过改善D-半乳糖致衰老大鼠氧化损伤程度从而提高学习记忆能力,此为探讨肝虚致衰理论提供了实验依据。

基于Rho/ROCK通路介导的细胞凋亡探讨补肝散对衰老大鼠心肌损伤的影响

目的观察衰老大鼠心肌损伤特征并探讨补肝散的干预机制。方法将32只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白组、模型组、补肝散组和维生素E组,除空白组腹腔注射等量生理盐水外,其余各组均腹腔注射D-半乳糖(D-galactose,D-gal)制备衰老大鼠模型。模型复制当日起,补肝散组与维生素E组分别灌胃浓度为14.06 g·kg^(-1)的补肝散和27 mg·kg^(-1)的维生素E,空白组和模型组给予等量生理盐水。以上均每日1次,连续8周,并于模型复制末日测定抓力。取血清及心脏组织,测定心脏脏器指数;检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性变化;检测血清谷草转氨酶(AST)、肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;苏木素-伊红(HE)染色观察大鼠心肌组织病理形态学变化;Masson染色观察大鼠心肌组织胶原沉积和纤维化情况;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;免疫组织化学染色(ABC法)观察Ras同源基因A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1(ROCK1)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)表达特征;免疫印迹法(Western Blot)检测心肌组织RhoA、ROCK1、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠心肌细胞形态改变,呈现嗜酸性变性,胞质染色不均,部分心肌细胞坏死,心肌组织胶原沉积和纤维化明显;抓力及心脏脏器指数降低,MDA含量升高,SOD活性降低,心肌细胞凋亡指数及AST、CK、LDH含量升高(均P<0.05);RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白表达减少(均P<0.05)。与模型组比较,补肝散组大鼠心肌细胞轻度嗜酸性变性,偶有坏死、肥大情况,心肌组织胶原沉积较少,偶有纤维化产生,损伤情况较轻;大鼠抓力及心脏脏器指数升高,MDA含量降低,SOD活性升高,心肌细胞凋亡指数及AST、CK、LDH含量降低(均P<0.05);RhoA、ROCK1、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增加(均P<0.05)。结论补肝散可通过调节Rho/ROCK介导的凋亡途径减轻衰老大鼠的心肌损伤,此为探讨肝气虚致衰理论提供了新的思路和实验支持。