补肝散不同极性部位抗抑郁活性及其作用机制研究

目的考察补肝散醇提物不同极性提取部位的抗抑郁活性及初步作用机制。方法采用急性应激抑郁模型,小鼠分别灌胃补肝散醇提物(1.92 g/kg)、石油醚提取物A(0.244,0.122 g/kg)、二氯甲烷提取物B(0.160,0.077 g/kg)、乙酸乙酯提取物C(0.232,0.116 g/kg)、正丁醇提取物D(1.04,0.518 g/kg)及阳性对照药盐酸帕罗西汀(PX,26 mg/kg),连续给药14 d,测定各组小鼠在悬尾实验和强迫游泳实验中的不动时间;采用酶联免疫吸附测定法,考察活性提取部位B、C、D对小鼠大脑额叶皮质中神经递质5-羟色胺(5-HT)和多巴胺(DA)含量的影响。结果 PX、醇提物、提取物C、D及B高剂量均能显著缩短小鼠悬尾和游泳不动时间,提取物A及B的低剂量有缩短小鼠悬尾和强迫游泳不动时间的趋势,但与对照组比较无明显差别。提取物C、D及B的高剂量均能明显增加实验小鼠额叶皮质中单胺类神经递质5-HT含量,对DA含量有增加趋势。结论补肝散醇提物的抗抑郁活性部位主要集中于乙酸乙酯、正丁醇提取部位,其次为二氯甲烷提取部位;其抗抑郁的作用可能与增加脑内单胺类神经递质5-HT、DA含量有关。

基于AGEs/RAGE/NF-κB通路探讨补肝散改善D-半乳糖致衰大鼠学习记忆障碍机制研究

目的探讨复方补肝散(BGSD)干预D-半乳糖致衰大鼠学习记忆能力的潜在作用机制。方法40只大鼠被随机分为对照组、模型组、BGSD[14.06 g/(kg·d)]组和吡拉西坦[0.4 g/(kg·d)]组,每组10只。腹腔注射D-半乳糖[400 mg/(kg·d)]建立衰老大鼠模型。每周记录大鼠体质量、摄水量、摄食量和抓力;八臂迷宫和跳台实验评估大鼠学习记忆能力;称取肝脏、胸腺、脾脏和脑组织重量以计算相应脏器指数;检测血清丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;苏木精-伊红(HE)染色观察海马病理学改变;酶联免疫吸附法(ELISA)检测海马肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6及IL-1β水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测海马晚期糖基化终末产物受体(RAGE)、核因子-κB(NF-κB)、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达;蛋白免疫印迹法(WB)检测海马晚期糖基化终末产物(AGEs)、RAGE和NF-κB蛋白表达。结果补肝散可显著增加D-半乳糖致衰大鼠的摄食量、摄水量、体质量、抓力及脏器指数(P<0.05),减少八臂迷宫中工作记忆错误(WME)、参考记忆错误(RME)以及总记忆错误次数(TE)(P<0.05),降低跳台实验中错误次数并延长跳台潜伏期(P<0.05)。此外,补肝散可减少海马神经元损伤,提高血清SOD活性,降低MDA含量及下调促炎因子TNF-α、IL-6和IL-1β水平(P<0.05)。进一步研究结果显示,补肝散可显著降低海马AGEs、RAGE和NF-κB表达(P<0.05)。结论补肝散可通过抑制AGEs/RAGE/NF-κB信号通路调节D-半乳糖致衰大鼠神经炎症损伤从而改善学习记忆能力。

补肝散不同分离组份抗抑郁活性筛选

目的对补肝散醇提物不同分离组份的抗抑郁活性进行筛选。方法采用慢性不可预知温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)对小鼠进行为期8周的造模,造模4周后,分别以盐酸帕罗西汀(paroxetine hydrochloride,PX)、补肝散醇提物、石油醚(A)、二氯甲烷(B)、乙酸乙酯(C)及正丁醇(D)4个分离组份进行为期4周的灌胃治疗,考察各组小鼠的行为学及脑内神经递质含量的变化。结果连续给药4周(造模8周)后,PX组(0.026 g·kg^(-1))、补肝散醇提物组(1.92 g·kg^(-1))及其分离组份C(0.232 g·kg^(-1))、D(1.04 g·kg^(-1))和B(0.160 g·kg^(-1))组均能明显逆转模型小鼠的抑郁表现如糖水偏好率下降、强迫游泳不动时间延长等抑郁症状。能不同程度地增加其脑内额叶皮质中5-羟色胺和多巴胺的含量,其中PX、醇提物及分离组份C的作用更为明显(与模型组比较,P<0.05或<0.01)。结论补肝散醇提物的抗抑郁活性部位主要集中于乙酸乙酯和正丁醇分离组份,其次是二氯甲烷分离组份。

基于BDNF/TrkB介导的海马突触可塑性研究补肝散对衰老大鼠学习记忆功能的影响

目的基于肝气虚理论和海马突触可塑性探讨衰老机制,观察补肝散对D-半乳糖致衰老大鼠学习记忆能力的影响。方法 40只SPF级SD雄性大鼠随机分为空白对照组、模型组、吡拉西坦组和补肝散组,各10只。模型组、吡拉西坦组、补肝散组腹腔注射400 mg/kg D-半乳糖制备衰老大鼠模型,空白对照组腹腔注射等量生理盐水,每日1次,连续8周。造模当日始,补肝散组予以补肝散煎液灌胃(14.06 g/kg),吡拉西坦组予以吡拉西坦混悬液灌胃(0.40 g/kg),空白对照组和模型组给予等量蒸馏水(10 mL/kg),每日1次,连续8周。取材前1天称量大鼠体质量;抓力实验检测大鼠抓力大小;八臂迷宫和跳台实验评估大鼠学习记忆能力;尼氏染色观察海马神经元病理变化;免疫组织化学染色观察海马突触素(SYN)和突触后致密蛋白95(PSD95)表达特征;实时荧光定量PCR和免疫印迹法(Western blotting)分别检测海马脑源性神经营养因子(BDNF)、原肌球蛋白相关激酶B(TrkB)基因和蛋白表达。结果与空白对照组比较,模型组大鼠体质量下降,抓力降低,工作记忆错误、参考记忆错误和总记忆错误次数明显升高,平台潜伏期缩短,海马神经元数量明显减少,SYN和PSD95表达水平显著下降,BDNF、TrkB基因和蛋白表达水平显著降低(均P<0.05);与模型组比较,补肝散组大鼠体质量增加,抓力增大,工作记忆错误、参考记忆错误和总记忆错误次数显著下降,平台潜伏期延长,海马神经元数量显著增加,SYN和PSD95表达水平升高,BDNF、TrkB基因和蛋白表达水平显著升高(均P<0.05)。结论肝气亏虚是机体衰老的重要机制,调补肝气为其有效治法;补肝散可通过上调BDNF和TrkB水平以增强衰老大鼠海马突触可塑性,从而改善学习记忆能力,达到延缓衰老的目的。