基于液质联用技术对大叶柴胡中多炔烯类化合物神经毒性的代谢组学研究

目的研究大叶柴胡中多炔烯类化合物的神经毒性机制,评价柴胡属植物的用药安全性。方法采用超高效液相色谱串联四级杆-飞行时间质谱技术并结合现代药理学的研究方法,对大叶柴胡中多炔烯类化合物给药后大鼠的脑脊液进行代谢组学研究,探讨多炔烯类化合物的可能毒性作用机制。结果结合模式识别和多元统计分析,最终共鉴定出4个潜在生物标志物,柴胡毒素给药组1-(3,4-二甲氧苯基)-1,2-乙二醇-1-氧基-b-D-糖苷和D(L)-鸟氨酸-L-丙氨酸的含量显著上升,3-氧代-3-脲基丙酸酯和辛胺含量显著下降,提示多炔烯类毒素可能作用于氧化应激与脂代谢通路继而引起毒性反应。结论本研究揭示了大叶柴胡中多炔烯类化合物神经毒性的潜在机制,为柴胡属及其他中药临床前毒性研究提供参考。

大叶柴胡愈伤组织继代培养及其RAPD分析

以野生的大叶柴胡为材料,通过离体培养诱导产生愈伤组织,利用RAPD分子标记的方法,在DNA水平上分析野生植株和愈伤组织的遗传变异.从13个10碱基引物中筛选出7个引物,对它们的PCR扩增结果进行了分析.结果表明柴胡愈伤组织与野生苗相比出现了DNA水平变异.

紫花大叶柴胡根、茎、叶的结构及与药效成分积累关系

目的揭示紫花大叶柴胡Bupleurum longiradiatum Turcz.var.porphyranthum Shan et Y.Li根、茎、叶的结构及与药效成分柴胡皂苷和黄酮类物质的积累关系。方法采用植物解剖学、组织化学以及植物化学方法对紫花大叶柴胡根、茎、叶的解剖结构、柴胡皂苷和黄酮类物质的分布以及含有量进行研究,并探讨其结构与主要成分积累关系。结果紫花大叶柴胡根由内到外主要由初生木质部、次生木质部、维管形成层、次生韧皮部、中柱鞘组织及周皮组成,在中柱鞘位置还分布有由3~30个分泌细胞组成的大小不等的分泌道;茎主要由表皮、皮层和维管柱组成,在紧贴韧皮部外方和髓周围还分布有分泌道;叶由表皮、叶肉组织和叶脉维管束组成,在紧贴韧皮部以及木质部上方分别分布有分泌道和纤维束;根茎过渡区兼有根和茎的结构特点。组化定位表明柴胡皂苷和黄酮类物质主要分布于根的周皮、中柱鞘组织、次生韧皮部、维管形成层以及次生木质部薄壁细胞、茎的表皮、皮层、韧皮部薄壁细胞、叶的表皮、叶肉组织及叶脉韧皮部中。植化结果表明,紫花大叶柴胡根茎叶中柴胡总皂苷含有量较高,分别为0.68%、0.15%和0.99%,总黄酮的含有量分别为0.61%、0.09%和0.85%。结论紫花大叶柴胡营养器官中均分布有柴胡皂苷和黄酮类物质;其中根和叶中柴胡总皂苷和总黄酮的含有量均较高,具有非常好的开发利用潜力。

紫花大叶柴胡的生药学研究

目的对伞形科植物紫花大叶柴胡(B.longiradiatum Turcz.var.porphyranthum Shan et Y.Li)进行生药学研究。方法从宏观(植物形态、药材性状特征)和微观(显微组织)结构对紫花大叶柴胡鉴别特征进行研究;采用HPLC法对其有效活性成分进行含量检测。结果首次详细地描述了紫花大叶柴胡根的横切面组织结构显微特征及粉末中木栓细胞、纤维、导管、油室碎片及条状分泌物、薄壁细胞等特征;其有效活性成分柴胡皂苷d含量为0.5%。结论确定了紫花大叶柴胡的生药学鉴定特征及其有效活性成分含量,为该资源的开发利用提供了依据。

正交试验优选柴胡中柴胡皂苷的闪式提取工艺

目的研究柴胡中柴胡皂苷的闪式提取工艺并与柴胡皂苷乙醇回流法对照。方法以柴胡提取液中柴胡皂苷的含量为指标,采用正交实验设计,对柴胡闪式提取法的影响因素分别进行考察,并在提取率、提取时间、溶剂用量、提取温度等方面与文献报道的乙醇回流法进行比较。结果闪式提取的最佳工艺是75%乙醇,料液比1∶12,提取时间2.0 min;闪式提取柴胡皂苷的含量经HPLC测定高于乙醇回流提取法。结论闪式提取法操作简便、高效节能、经济方便省时、提取率高。

基于ITS2条形码鉴定柴胡与大叶柴胡

为准确鉴定柴胡与大叶柴胡,该研究共48份柴胡、大叶柴胡药材,扩增ITS2序列并进行测序,采用CodonCode Aligner软件进行序列拼接,用软件MEGA5.0分析比对确定不同的单倍型,并基于K2P模型进行遗传距离等分析。采用相似性搜索法、最近距离法、构建邻接树(NJ树)法对柴胡与大叶柴胡进行鉴定。结果显示柴胡与大叶柴胡种间最小K2P距离为0.049,远远大于柴胡种内最大K2P距离0.013。NJ树显示大叶柴胡独自聚为一支,可明显与柴胡区分。因此应用ITS2条形码可以准确鉴定柴胡及大叶柴胡。

HPLC测定三峡库区紫花大叶柴胡中柴胡皂苷a含量

目的:建立紫花大叶柴胡柴胡皂苷a的含量测定方法。方法:色谱条件Phenomenex luna C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以甲醇-水(74∶26)为流动相,流速0.9 mL.min-1,柱温35℃,检测波长200 nm。结果:柴胡皂苷a进样量在0.11～4.4μg与峰面积线性关系良好(r=0.999 9)。柴胡皂苷a平均回收率为97.42%,RSD 1.42%。结论:紫花大叶柴胡中柴胡皂苷a的HPLC梯度洗脱法灵敏、准确,专属性强,重复性好。