基于网络药理学探讨柴胡-黄芩药对治疗病毒性肺炎的作用机制

目的 通过数据库挖掘柴胡-黄芩有效成分及作用靶点,构建药对化学成分-作用靶点与病毒性肺炎靶点网络,探讨其治疗病毒性肺炎的机制。方法 从基因数据库GeneCards、OMIM、PharmGkb、TTD、DrugBank获取病毒性肺炎疾病靶点,通过中药系统药理学数据库(TCMSP)设置查询条件:口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18查找柴胡-黄芩药对活性成分及靶点,通过Cytoscape3.8.0软件构建药物主要化学成分-作用靶点和疾病靶点网络,并利用PPI网络构建核心进行分析,同时利用基因功能(GO)和信号通路(KEGG)分析共同作用靶点及相关信号通路。结果 从TCMSP中筛选出柴胡(17个)-黄芩(36个)药对共有53种有效活性成分,从疾病基因数据库筛选出与病毒性肺炎密切相关的靶点共计4238个,通过比对分析药对-疾病作用靶点得出柴胡-黄芩药对与病毒性肺炎存在143个相同靶点。PPI、GO、KEGG分析显示柴胡-黄芩药对通过调控PI3K-Akt信号通路、MAPK信号通路、AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路及IL-17等信号通路作用于FOS、TP53、TNF、JUN、IL6、MYC、RELA、HIF1A、CCND1、MAPK14、AKT1等关键靶点,通过抑制细胞增殖、应激、炎症、功能同步化、凋亡等途径从而发挥病毒性肺炎的作用。结论 本研究从网络药理学的角度揭示柴胡-黄芩药对治疗病毒性肺炎多靶点的机制,对于其临床应用具有翰要的理论意义。

柴胡黄芩药对发酵前后含量变化与发酵产物的药效学研究

目的以柴胡-黄芩药对为原料,黑曲霉为菌种,利用现代微生物发酵技术对其发酵。方法采用HPLC测定柴胡-黄芩药对发酵前后的5种活性物质(黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、柴胡皂苷A、柴胡皂苷D)的含量变化。HPLC的色谱条件:色谱柱Eclipse XOB-C_(18)(250mm×4.6mm,5μm),进样量20μL,流动相(梯度洗脱)为甲醇-0.1%磷酸水溶液,柱温30℃,波长210nm。结果黑曲霉发酵柴胡-黄芩药对后,有效成分含量会随着发酵天数的变化而升高或降低,并具有良好的解热抗炎作用。结论高效液相色谱法简便准确,重复性好,可以作为柴胡-黄芩药对中5种成分含量的测定方法。适当的黑曲霉发酵,可以明显提高柴胡-黄芩药对活性成分含量,并提升中药药效。

不同溶剂对黄芩-柴胡药对中的药效成分提出的影响

目的:考察水提、醇提对黄芩-柴胡药对中的药效成分黄芩苷、柴胡皂苷a、d提出率的影响。方法:采用RP-HPLC法,测定各提取液中黄芩苷及柴胡皂苷a、d的含量。结果:水提、醇提对黄芩苷提出率影响不大,但对柴胡皂苷的提出率影响较大,对柴胡皂苷a的提取,醇提优于水提2.4～4.7倍,且水提不能将柴胡皂苷d提出。结论:提取溶剂对黄芩苷的提出含量影响不大,但对柴胡皂苷的提出率影响较大,本实验结果为临床合理用药和提高药材利用率提供了依据。

基于网络药理学的“柴胡-黄芩”药对干预足细胞病变作用机制探索

目的:预测辛通畅络法载体——复方肾苏Ⅱ之君药“柴胡-黄芩”药对干预足细胞病变的可能作用靶点与机制,为辛通畅络法防治足细胞病变序贯临床和基础研究的开展提供参考。方法:基于中药系统药理学技术平台(TCMSP)数据库,检索柴胡、黄芩化学成分及其对应靶点蛋白,借助Cytoscape 3.2.1软件绘制“中药-成分-靶点”网络图。在OMIM数据库、DrugBank数据库及DigSee在线文本中检索足细胞病变相关靶点,利用Venny 2.1.0在线作图工具获取其与“柴胡-黄芩”作用靶点的交集基因。分别应用STRING数据库及Cytoscape 3.2.1软件的“CytoNCA”插件构建交集基因蛋白质-蛋白质相互作用关系(PPI)网络图并进行拓扑学分析,获取核心预测靶点。借助DAVID数据库对交集基因进行基因本体(GO)功能注释及京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集,并通过OmicShare Tools在线作图平台实现富集结果的可视化。结果:基于TCMSP数据库检索结果,获得有对应靶点的活性成分44种,其中柴胡13种、黄芩32种,豆甾醇为两者共有成分;潜在作用靶点较多的化合物为槲皮素、山柰酚、汉黄芩素等;节点度值较高靶点蛋白为前列腺素内过氧化物合酶2(PTGS2)、PTGS1、核受体共激活因子2、热休克蛋白90α等,分别与37、30、25、25个活性成分相关联。获取“柴胡-黄芩”作用靶点与足细胞病变相关靶点交集基因20个,包括PTGS2、VEGFA、MMP9、TNF、IL6等。上述交集基因的PPI网络图共包含节点20个、连线110条,MMP9、VEGFA、IL6等基因处于核心位置。GO分析结果显示,共获得生物信息条目154个(P<0.05),包括生物过程条目139个、细胞组成条目8个、分子功能条目7个。其中,生物过程主要涉及一氧化氮生物合成过程的正调控、炎症反应、免疫反应等,细胞组成主要涉及细胞外间隙、胞外区、质膜外侧等,分子功能主要涉及蛋白质结合、细胞因子活性、生长因子活性等。同时,获得KEGG通路富集条目47个(P<0.05),主要涉及细胞因子-细胞因子受体相互作用、类风湿关节炎、疟疾、癌症信号通路等相关信号转导途径。结论:复方肾苏Ⅱ之“柴胡-黄芩”药对活性成分可能通过细胞因子-细胞因子受体相互作用、类风湿关节炎、疟疾、癌症信号通路等相关信号转导途径作用于MMP9、VEGFA、IL6、TNF等靶点,从而发挥对足细胞病变的干预作用。

柴胡-黄芩药对保肝作用有效部位的研究

目的:探查柴胡-黄芩药对保肝作用的有效部位。方法:采用乙醇沉淀法,将柴胡-黄芩药对水提液分为A、B、C、D 4个部位,以血清ALT、AST为指标,观察柴胡-黄芩药对水提液及其分离部位合并液对CCL4急性肝损伤的保护作用;采用正交试验考察A、B、C、D各部位的保肝效应,最后对分析所得的最佳配伍进行效用再验证。结果:柴胡-黄芩药对水提液及其分离部位合并液均能明显降低急性CCL4肝损伤模型大鼠血清ALT与AST(P<0.05或P<0.01);正交试验表明,C和D对模型大鼠血清ALT与AST均有不同程度地降低作用(P<0.05或接近0.05),其最佳部位配伍为C+D;重复验证实验表明,C+D组能显著降低模型大鼠血清ALT与AST(P<0.05),其效应与柴胡-黄芩药对水提液相当。结论:部位C、D是柴胡-黄芩药对保肝作用的主要部位。

“柴胡-黄芩”药对保肝作用有效部位的研究(Ⅱ)

目的:进一步探查柴胡-黄芩药对水提液保肝作用有效部位。方法:采用溶剂萃取法和乙醇沉淀法,将柴胡-黄芩药对水提液的有效部位C、D进一步分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4个部位,以血清ALT、AST为指标,应用正交试验考察各部位对大鼠CCl4急性肝损伤模型的保护作用,分析确定最佳配伍并对其进行效用验证。结果:正交分析表明,部位Ⅰ和Ⅲ均能不同程度降低模型大鼠血清ALT和AST,其中部位Ⅰ的作用有显著性差异(P<0.05),部位最佳配伍为Ⅰ+Ⅲ;重复验证实验表明,与模型组相比,Ⅰ+Ⅲ组大鼠血清ALT与AST均显著降低(P<0.05),其效应强度与柴胡-黄芩药对水提液相当。结论:部位Ⅰ、Ⅲ是柴胡-黄芩药对水提液中保肝作用的主要部位。

柴胡-黄芩药对保肝作用有效部位的研究

目的探查柴胡-黄芩药对保肝作用的有效部位。方法采用乙醇沉淀法,将柴胡-黄芩药对水提液分为A、B、C、D四个部位,以血清ALT、AST为指标,观察柴胡-黄芩药对水提液及其分离部位合并液对CCl4急性肝损伤的保护作用;采用正交试验考察A、B、C、D各部位的保肝效应,最后对分析所得的最佳配伍进行效用再验证。结果柴胡-黄芩药对水提液及其分离部位合并液均能明显降低急性CCl4肝损伤模型大鼠血清ALT与AST（P〈0.05或P〈0.01）;正交试验表明,C和D对模型大鼠血清ALT与AST均有不同程度地降低作用（P〈0.05或接近0.05）,其最佳部位配伍为C＋D;重复验证实验表明,C＋D组能显著降低模型大鼠血清ALT与AST（P〈0.05）,其效应与柴胡-黄芩药对水提液相当。结论部位C、D是柴胡-黄芩药对保肝作用的主要部位。

柴胡-黄芩药对的不同分离部位对H_2O_2刺激肝星状细胞增殖的影响

目的:研究柴胡-黄芩药对的不同分离部位对过氧化氢(H_2O_2)刺激的肝星状细胞增殖的影响,探讨柴胡-黄芩药对抗肝纤维化主要药效物质基础。方法:柴胡-黄芩水提液经D101型大孔吸附树脂吸附,依次用水、30%、60%和90%的乙醇梯度洗脱,分别得到水洗脱部位(A)、30%乙醇洗脱部位(B)、60%乙醇洗脱部位(C)及90%乙醇洗脱部位(D)。体外培养肝星状细胞,采用不同浓度的H_2O_2刺激肝星状细胞增殖,筛选最佳造模浓度,然后用柴胡-黄芩药对水提液及A、B、C、D的高、中、低剂量组进行干预24 h。采用MTT法测定各组肝星状细胞的抑制情况;应用ELISA法检测细胞上清液中透明质酸酶(hy-aluronidase,HA)、层黏连蛋白(laminin,LN)、Ⅲ型前胶原(procollagenⅢ,PCⅢ)、Ⅳ型胶原(collagen typeⅣ,Ⅳ-C)的浓度。结果:结果显示,5μmol/L的H_2O_2能显著刺激肝星状细胞增殖,柴胡-黄芩药对及其各分离部位对H_2O_2刺激的肝星状细胞增殖均具有一定的抑制作用,而且能够将低HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C的细胞释放水平,具有剂量相关性,其中B、C高剂量组对其抑制作用最为明显,有统计学意义(P<0.01)。结论:柴胡-黄芩药对及其30%、60%乙醇洗脱部位对H_2O_2刺激的肝星状细胞增殖均具有一定的抑制作用,30%、60%乙醇洗脱部位可能是柴胡-黄芩药对抗肝纤维化主要有效部位。

基于生物信息学和分子对接探讨“柴胡-黄芩”治疗IgA肾病机制的研究

目的:利用生物信息学和分子对接技术探讨“柴胡-黄芩”药对干预IgA肾病差异表达基因的调控机制及物质基础。方法:筛选差异表达基因综合数据库GEO中IgA肾病基因样本,在中药系统药理学数据库与分析平台TCMSP上筛选“柴胡-黄芩”药对的活性成分,将IgA肾病的差异基因和“柴胡-黄芩”药对的靶标蛋白取交集,用Cytoscape软件构建调控网络和蛋白相互作用网络,并进行拓扑结构分析及关键靶点筛选关键节点。利用PyMoL及AutoDock Vina软件对主要活性成分及高频靶标进行分子对接验证。用R i3863.6.2对交集基因进行GO富集分析和KEGG富集分析。结果:分析IgA肾病患者与正常人相比的差异基因,得到明显影响和改变的基因共347个,其中上调基因104个,主要富集在炎症反应中细胞纤维化、TNF信号通路和MAPK信号通路。从柴胡、黄芩中筛选槲皮素、山柰酚、黄芩素等38个活性成分,作用于JUN、MYC、CDKN1A等20个IgA肾病差异表达基因靶点,调节晚期糖基化终末产物及其受体(AGEs-RAGE)介导的信号通路、IL-17信号通路、TNF信号通路等多种生物过程。结论:“柴胡-黄芩”的有效成分通过多个靶点、多条通路药干预IgA肾病差异基因表达。

实验考察柴胡与黄芩配伍前后柴胡皂苷a、d的溶出性差异

目的通过实验考察柴胡黄芩配伍前后对柴胡药效部位柴胡皂苷溶出的影响。方法采用梯度高效液相色谱法建立测定柴胡皂苷a、d含量的方法,以相同条件分别提取柴胡药材和柴胡-黄芩药对,实验比较药对配伍前后柴胡皂苷a、d的溶出差异。结果药对中柴胡皂苷的含量明显高于柴胡药材。结论柴胡-黄芩药对的配伍,能显著提高药效成分柴胡皂苷的溶出率,临床常将二者配伍应用是合理的、有利于药效的提高。

基于TLR4-NFκB信号通路的柴胡-黄芩药对抗肝纤维研究

目的:研究柴胡-黄芩药对抗肝纤维化大鼠肝脏TLR4-NFκB通路的影响。方法:采用饲喂高脂饲料,饮用10%乙醇及皮下注射四氯化碳(CCl4)的复合因素法建立大鼠肝纤维化模型,应用柴胡-黄芩药对进行干预,检测大鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层黏蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)的变化,通过HE染色、Mallory染色探讨肝组织病理变化,应用免疫组织化学方法检测肝脏Toll样受体4(TLR4)、核转录因子(Nuclear factor k B,NFκB)蛋白表达情况,揭示柴胡-黄芩药对抗肝纤维化的作用及可能机制。结果:肝纤维化模型大鼠血清中ALT、AST、HA、PCⅢ和Ⅳ-C的含量明显增高,肝组织纤维蛋白增生明显,并形成假小叶,模型组大鼠肝组织TLR4表达增高。柴胡-黄芩(9、18g生药/kg)干预后,血清中ALT、AST、HA、PCⅢ和Ⅳ-C的含量均有明显降低,肝组织纤维化病理改变有良好改善,肝组织TLR4、NFκB表达也明显下降。结论:柴胡-黄芩药对具有明确抗肝纤维化作用,其机制可能通过TLR4-NFκB信号通路调节,减轻炎症有关。

基于网络药理学的“柴胡-黄芩”药对治疗糖尿病的“理法-方药-成分-靶标-活性”关联研究

本文以"柴胡-黄芩"药对为研究对象,借助中药整合药理学平台,结合中医药大数据,按照"理法-方药-成分-靶标-通路-活性"关联性研究,预测其治疗糖尿病的药效物质基础及作用机制。本研究预测得到活性成分共计59个,分别作用于22个直接靶标和26条主要通路,其药效物质基础主要为皂苷、黄酮、挥发油和脂肪酸等成分。其治疗糖尿病作用涉及的22个直接靶标主要有:精氨酸加压素受体基因、视网膜母细胞瘤1、受体活性修饰蛋白、血小板生长因子受体、胰岛素受体和α-葡萄糖苷酶等;其治疗糖尿病作用涉及内分泌系统、循环系统、消化系统、甲状腺信号通路、Erb B信号通路和PI3K-Akt信号通路等。采用分子对接技术进行的虚拟筛选,结果表明,"柴胡-黄芩"药对中的黄酮类化合物易与过氧化物酶体增殖物激活受体γ及糖原合成酶激酶-3β形成较好的对接模式与较高亲和力,具有治疗糖尿病的活性。本研究为进一步研究该药对治疗糖尿病作用机制提供科学依据,为药对及中药复方的研究探索新的思路。

基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS谱-效相关的柴胡-黄芩药对解热质量标志物的筛选及含量测定方法的建立

目的筛选柴胡-黄芩(柴黄)药对解热作用质量标志物(qualitymarker,Q-Marker),并建立Q-Marker的UPLC含量测定方法。方法采用均匀设计法建立柴黄药对配伍差异样品,利用超高效液相色谱-四级杆-静电场轨道阱质谱(UPLCQ-Exactive Orbitrap-MS)技术建立柴黄药对煎液指纹图谱,采用Thermo Scientific Hypersil Gold C18色谱柱(150 mm×2.1 mm,3μm),以乙腈-0.1%甲酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,体积流量0.3 mL/min,并采用电喷雾电离,正离子扫描模式下进行质谱数据采集。采用新西兰兔耳缘静脉脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)注射的方法建立少阳证高热模型,以体温变化值作为解热药效指标,采用灰色关联度分析法建立指纹图谱中共有峰与解热作用的相关关系,筛选出关联性较大的成分作为柴黄药对解热作用的主要Q-Marker,采用UPLC建立Q-Marker含量测定方法。结果筛选出黄芩苷、汉黄芩苷、千层纸素A-7-O-葡萄糖醛酸苷、去甲汉黄芩素-7-O-葡萄糖醛酸苷、黄芩素、汉黄芩素、柴胡皂苷A、柴胡皂苷C作为柴黄药对解热Q-Marker,并建立了含量测定方法。结论基于UPLC-Q-Exactive Orbitrap-MS技术的谱-效相关研究策略可以快速分析及初步确定柴黄药对解热Q-Marker,在此基础上建立其UPLC含量测定方法,对优化柴黄类方制剂的质量控制方法具有重要的参考价值。

基于整合药理学平台的柴胡-黄芩药对抗抑郁的分子机制研究

小柴胡汤为中医经典方药,现代研究证明其对抑郁症的疗效确切。但由于中药复方的复杂性,其抗抑郁症的药理学机制难以明晰。柴胡-黄芩是小柴胡汤核心配伍,该研究以柴胡-黄芩为研究对象,借助整合药理学平台,对其治疗抑郁症的分子机制进行研究探讨。对柴胡-黄芩药对预测共得到116个活性成分,其中柴胡62个,主要为柴胡皂苷类、酸类、醇类等;黄芩54个,主要为黄酮类和苷类。其抗抑郁作用涉及118个核心靶标,其中包括22个直接靶标,如五羟色胺受体（HTR2C）,转录激活因子1,2（ATF1,ATF2）,δ型阿片受体（OPRD1）,μ型阿片受体（OPRM1）,κ型阿片受体（OPRK1）,肌醇单磷酸酶1（IMPA1）,Toll样受体4（TLR4）,组胺H1受体（HRH1）,神经营养因子酪氨酸激酶受体1（NTRK1）,糖原合成酶激酶-3β（GSK3β）等;其抗抑郁作用涉及RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、转录因子的结合、细胞质、转录调控DNA模板、酶结合、内分泌系统、神经系统、神经营养因子信号通路、细胞生长和死亡、信号转导分子、甲状腺激素信号传导通路等相关生物过程和代谢通路。该研究为进一步研究该药对抗抑郁作用机制提供科学依据。

柴胡-黄芩药对治疗新型冠状病毒肺炎作用机制的网络药理学研究

目的:研究柴胡-黄芩药对治疗新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的作用机制。方法:从人类基因数据库(GeneCards)获取COVID-19的疾病靶点,应用中药系统药理学数据库(TCMSP)查找柴胡-黄芩药对的活性成分和靶点,查询条件设定为口服生物利用度(OB)≥30%、类药性(DL)≥0.18,使用Cytoscape3.7.2软件建立活性化合物-靶点网络图,STRING在线数据库构建靶点蛋白与蛋白之间互作网络,借助DAVID平台对靶蛋白进行基因功能(GO)和信号通路(KEGG)分析,构建靶基因-信号通路关系网络。结果:从柴胡-黄芩药对中筛选出槲皮素、山柰酚、汉黄芩素、金合欢素、黄芩素、异鼠李素等53种有效活性成分,作用于PTGS2、PTGS1、DPP4、CALM1、NOS2、PPARG等42个COVID-19相关的靶蛋白,参与脂多糖反应、调控凋亡信号通路、应答氧化应激反应、生物刺激回应、细菌源性分子细胞反应、调控细胞因子产生等生物学过程,调控AGE-RAGE信号通路、TNF信号通路、IL-17信号通路等信号通路。结论:揭示了柴胡-黄芩药对通过多成分,发挥多靶点、多信号通路治疗COVID-19的科学内涵。

RP-HPLC考察黄芩、柴胡配伍对黄芩苷成分的影响

目的:探讨不同提取溶剂、不同比例配伍对黄芩柴胡"药对"中主要药效成分黄芩苷含量的影响;方法:选用水和70%的乙醇作为提取溶剂,参照临床常用给药方法对不同比例配比(0∶1,1∶1,1∶2,2∶1,1∶0)的黄芩柴胡"药对"进行提取并采用RP-HPLC法考察对"药对"中的主要药效成分黄芩苷含量的影响;结果:采用水和70%乙醇进行提取对黄芩-柴胡"药对"中的主要药效成分黄芩苷的提出无显著影响,"药对"不同比例配伍对提取液中黄芩苷的含量影响亦较小,但HPLC图中黄芩苷峰前的一个吸收峰明显增大,提示混合提取能提高其他组分的提出。结论:黄芩-柴胡"药对"不同提取溶剂、不同比例配伍对其主要药效成分黄芩苷的含量没有太多影响,但混提能明显提高其他药物成分的提出。

柴胡黄芩药对通过PSD95及CDK5调节伏隔核区NR2B发挥抗抑郁作用的研究

目的评价柴胡黄芩药对的抗抑郁作用,探讨其对奖赏环路的作用,以揭示其治疗情志疾病的机制。方法制作CUMS大鼠模型,分别予1.05g/kg, 3.15g/kg, 9.45g/kg以柴胡黄芩药对及1.5 mg/kg予氟西汀进行治疗1周,然后分别检测旷场实验、糖水偏好实验和强迫游泳实验。Western检测NAc区的总NR2B,膜NR2B,PSD95和CDK5水平。结果各浓度的柴胡黄芩药对均能改善CUMS大鼠的抑郁样行为。总NR2B,膜NR2B,PSD95和CDK5的病程水平改变能够被柴胡黄芩药对逆转。结论奖赏环路的伏隔核区可能是柴胡黄芩药对的作用靶点,其机制可能与药对通过PSD95和CDK5调节膜NR2B实现。

柴黄鼻腔即型凝胶剂的制备与评价

目的制备含有柴胡挥发油与黄芩苷有效组分的鼻腔给药温度/离子双敏感即型凝胶剂。方法以泊洛沙姆407与去乙酰结冷胶为凝胶基质,10%Pharmasolve与2%聚山梨酯-80为增溶剂,0.8%三乙醇胺为pH调节剂,制备柴黄鼻用即型凝胶鼻腔剂,对制剂外观、相转换温度、黄芩苷释放性能等进行研究,并采用大鼠干酵母致热模型和小鼠耳廓肿胀炎症模型进行药效学评价。结果凝胶剂的相转换温度为36℃,黄芩苷从中的释放具有明显的缓释特征,符合零级动力学方程。大鼠干酵母高热模型和小鼠二甲苯耳廓肿胀炎症模型实验结果显示凝胶剂具有显著的解热和抗炎效果,且均显著优于空白基质和柴黄颗粒对照组。纤毛毒性实验结果显示凝胶剂对蟾蜍上颚黏膜纤毛无明显毒性。结论所制备的柴黄即型凝胶剂具有速效、高效、长效的特点,具有进一步应用开发的前景。