补肾活血方促进骨髓间充质干细胞的成骨及其防治大鼠骨质疏松症机制研究

目的 研究表明微核糖核酸(microRNA,MiRNA)和Kruppel样因子10(Kruppel-like factor10, KLF10)调控骨质疏松症的进程。研究旨在探讨miR-26b/KLF10信号调控骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)分化的机制。方法 流失鉴定分离的大鼠BMSCs,不同剂量的补肾活血方处理BMSCs,检测其^([1-2])增殖能力,碱性磷酸酶活性和茜素红染色检测BMSCs的成骨分化潜能。qPCR检测不同剂量的补肾活血方处理BMSCs后,miR-26b和KLF10的表达水平。mirtarBase数据库检测KLF10 mRNA的3’非翻译区(untranslated regions, 3'UTR)上是否有miR-26b的结合位点,双荧光素酶报告实验检测miR-26b对KLF10启动子活性的影响。qPCR检测miR-26b/KLF10信号对BMSCs增殖和成骨分化标志物的表达的影响。Western blot检查Wnt/β-catenin信号是否被激活。结果 流式分析显示分离的原代细胞大部分是BMSCs。补肾活血方显著促进骨髓间充质干细胞的增殖,补肾活血方显著提高了BMSCs中碱性磷酸酶的水平和成骨分化的潜能。补肾活血方促进BMSCs中miR-26b和KLF10的表达。在KLF10 mRNA的3’UTR上有miR-26b的结合位点。在BMSCs中,miR-26b抑制KLF10的3’UTR荧光素酶活性。此外,miR-26b也抑制了KLF10的表达水平。CCK8(Cell Counting Kit-8)显示KLF10促进BMSCs增殖,qPCR显示miR-26b显著抑制成骨分化标志物的表达。而KLF10能够逆转miR-26b的抑制效应,提示miR-26b/KLF10信号介导了补肾活血方在BMSCs增殖和成骨分化中的效应,且补肾活血方通过激活Wnt/β-Catenin信号通路促进成骨。结论 补肾活血方促进BMSCs的成骨由miR-26b/KLF10/Wnt/β-Catenin信号轴调控。

补肾活血汤辅助VAD治疗多发性骨髓瘤肾损害临床疗效及对骨代谢、肾功能的影响

目的 探讨补肾活血汤辅助VAD治疗(长春新碱+阿霉素+地塞米松)多发性骨髓瘤肾损害的临床疗效,同时动态观察该治疗方案对骨代谢、肾功能的影响。方法 选择2019年1月—2021年1月88例确诊为多发性骨髓瘤且伴有肾损害的患者作为研究对象,采用随机数字法平均分为观察组与对照组两组:对照组给予VAD治疗方案,观察组在对照组基础上辅以补肾活血汤治疗。比较两组治疗4个疗程后临床疗效差异,与治疗前、治疗2个疗程、4个疗程后比较骨代谢指标、肾功能指标等差异。结果 观察组总有效率90.9%明显高于对照组75.0%,差异比较有统计学意义(P<0.05)。随着治疗时间延长,两组患者主症、次症及总积分均逐渐降低(P<0.05);治疗2疗程及4疗程后观察组主症、次症及总积分均低于对照组(P<0.05)。随着治疗时间延长,两组患者RANKL逐渐降低(P<0.05),ALP、OCN逐渐升高(P<0.05);治疗2疗程及4疗程后观察组RANKL均低于对照组(P<0.05),而ALP、OCN均高于对照组(P<0.05)。随着治疗时间延长,两组患者Scr、β2-MG、NGAL、KIM-1、Cys-C、尿mAlb逐渐降低(P<0.05);治疗2疗程及4疗程后观察组Scr、β2-MG、NGAL、KIM-1、Cys-C、尿mAlb均低于对照组(P<0.05)。结论 补肾活血汤辅助VAD治疗多发性骨髓瘤肾损害的临床疗效更显著,可以更好地改善症状,更好调节骨代谢,更有效地逆转肾功能损害。

补肾活血复方调控Wnt通路抑制心力衰竭心肌损伤及细胞凋亡的机制研究

目的 研究补肾活血复方通过抑制Wnt信号通路(Wingless)抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡的分子机制。方法 将45只斯泼累格·多雷(Sprague-Dawley, SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组。采用结扎冠状动脉配合力竭式游泳构建心力衰竭模型。造模成功后按照实验分组利用补肾活血复方或赖诺普利给予大鼠持续灌胃4周。治疗结束后,采用彩色超声多普勒心动图评价大鼠心功能,称取体质量(body weight, BM)及左心室湿质量(left ventricular wet mass, LVM),计算左心室质量指数(left ventricular mass index, LVMI),苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测心肌病理组织学损伤,蛋白质印迹(Western blot)检测BCL2凋亡调节器(BCL2 apoptosis regulator, Bcl-2)、BCL2相关X,凋亡调节器(BCL2 associated X,apoptosis regulator, Bax)、活化半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)、Wnt家族成员3A(wnt family member 3A,Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Wnt3a、β-catenin mRNA表达。结果 与假手术组比,模型组的左心室舒张末内径(left ventricular end diastolic diameter, LVEDD)及左心室收缩末内径(left ventricular end systolic diameter, LVESD)、LVMI、Bax、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著上调,左室短轴缩短率(left ventricular short axis shortening rate, LVFS)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、Bcl-2蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比,补肾活血复方组及赖诺普利组LVEDD、LVESD、LVMI、Bax、cleaved-caspase-3、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达显著下调,LVFS、LVEF、Bcl-2蛋白及mRNA表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组心肌细胞形态正常,肌纤维排列整齐,结构清晰;模型组心肌纤维紊乱,存在炎性细胞浸润;赖诺普利组及补肾活血复方组心肌损伤及炎症浸润明显改善。结论 补肾活血复方可通过抑制Wnt信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡。

补肾活血方对免疫性血小板减少症模型小鼠免疫因子及骨髓巨核细胞的影响

目的研究补肾活血方对免疫性血小板减少症(ITP)模型小鼠白细胞介素(IL)-6、IL-17、IL-21、IL-22、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等免疫因子及骨髓巨核细胞的影响。方法建立小鼠ITP模型,随机分为正常组、模型组、泼尼松组、补肾活血高、中、低剂量组。相应干预措施持续14 d。采用ELISA法测定检测各组小鼠IL-6、IL-17、IL-21、IL-22、TNF-α含量,并取股骨骨髓测定骨髓巨核细胞数量。结果与正常组相比,ITP模型组小鼠骨髓巨核细胞数量明显增多,产板巨核细胞数量显著下降,IL-6、IL-17A、IL-21、IL-22、TNF-α水平明显上调,差异有统计学意义(P<0.01)。补肾活血方高剂量组小鼠巨核细胞数量显著低于模型组(P<0.05),产板巨核细胞数差异无统计学意义,但有一定回升。IL-6、IL-17A、IL-21、IL-22、TNF-α水平补肾活血方高剂量组与模型组相比显著下调(P<0.01),补肾活血方中剂量组与模型组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血方能通过下调ITP小鼠模型体内IL-6、IL-17A、IL-21、IL-22、TNF-α水平,一定程度改善巨核细胞成熟障碍,提高血小板数量。

基于Wnt通路研究补肾活血复方对心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化的影响

目的探讨补肾活血复方能否通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。方法将45只SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组,按照实验分组采用结扎左冠状动脉前降支配合力竭式游泳造成慢性心力衰竭模型,在结扎冠状动脉前后进行超声心电图检测,判断手术结扎成功后进行力竭式游泳,并行超声心动图检查,当左室射血分数(LVEF)<45%为造模成功。模型建立完成后采用补肾活血复方或赖诺普利或0.9%氯化钠溶液持续灌胃4周。治疗结束后,称取体质量(BM)、全心质量(HM)和左心室质量(LVM),计算全心质量指数(HWI)和左心室质量指数(LVMI),判断心肌肥厚程度;ELISA检测大鼠中脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)含量;马松染色检测心肌纤维化情况,并测定心肌间质胶原容积分数(CVF)、心肌细胞横截面积(CSA)、血管周围胶原面积(PVCA)变化;Western blot检测心肌组织中Ⅰ型胶原(Col I)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、蓬乱蛋白1(Dvl1)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Real-time PCR检测心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA表达。结果与结扎前比,结扎后大鼠心电图显示T波倒置或低平,ST段较术前明显抬高(绝对值≥0.1 mV)。与假手术组相比,模型组、赖诺普利组及补肾活血复方组的LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均上调,模型组与赖诺普利组HWI升高,差异有统计学意义(P<0.05),补肾活血复方组HWI升高,差异无统计学意义。与模型组相比,赖诺普利组及补肾活血复方组的HWI、LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.01),赖诺普利组与补肾活血复方组比差异无统计学意义。马松染色检测结果显示,假手术组心肌细胞呈红色,结构完整,心肌纤维排列完整,心肌间质可见少量胶原蓝染;模型组心肌细胞数量变少,心肌间质排列松散且无规则,出现大量胶原纤维的增生,呈波状;与模型组相比,赖诺普利及补肾活血复方组心肌细胞排列相对整齐,心肌间质内胶原纤维增生减少。结论补肾活血复方通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。

活血补肾汤辅助治疗骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折患者的短期随访研究

目的探讨骨质疏松性胸腰椎压缩性骨折(osteoporotic thoracolumbar vertebral compression fracture,OVCF)患者经活血补肾汤治疗后功能障碍程度及神经功能变化。方法采用随机数字表法将于2018年9月—2021年9月开封市人民医院收治的150例OVCF患者分为A组、B组,各75。A组采用常规治疗,B组在A组基础上给予活血补肾汤。两组治疗时间均为1个月,治疗后均随访6个月。比较两组治疗后6个月的临床疗效,治疗前、治疗1个月后、治疗后6个月的疼痛评分,治疗前、治疗后6个月的功能障碍程度、神经功能评分、竖脊肌软组织张力位移情况、矢状面后凸Cobb角及椎前缘高度百分比及生活质量。结果B组和A组治疗后6个月的总有效率分别为94.67%(71/75)、84.00%(63/75),与A组比较,B组较高(P<0.05)。两组治疗后6个月的视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)均比治疗前、治疗1个月后低,治疗1个月后比治疗前低,且治疗1个月、治疗后6个月,与A组比较,B组较低(P<0.05)。两组治疗后6个月的Oswestry功能障碍指数(Oswestry disability index,ODI)、矢状面后凸Cobb角及生活质量各项评分均比治疗前低,且与A组比较,B组较低;两组神经功能各项评分及椎前缘高度百分比比治疗前高,且与A组比较,B组较高(P<0.05);两组竖脊肌软组织张力位移情况均比治疗前长,但两组间比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。结论OVCF患者经活血补肾汤治疗后,其解剖学结构及运动障碍可得到有效恢复,并有效缓解患者疼痛程度,进一步促进患者神经功能得到改善,进而提高临床疗效,提高患者生活质量。

不明原因复发性流产患者分泌晚期外周血中自噬水平对蜕膜化调控作用及补肾活血方干预机制

目的探索分泌晚期外周血中自噬水平的异常对不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)患者蜕膜化的影响及补肾活血方的作用机制。方法收集至少有过一次成功妊娠且无自然流产史的女性(对照组)40例和肾虚血瘀型URSA患者(观察组)40例。观察组在入组后的3个月内严格按照实验要求服用中药汤剂补肾活血方。运用ELISA法检测两组分泌晚期血清中人胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein-1,IGFBP-1)和催乳素(prolactin,PRL)水平,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因6(Beclin 1)、泛素样结合蛋白(p62)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达。结果(1)观察组中自噬水平、蜕膜化水平较对照组女性明显降低。(2)治疗后观察组自噬水平、蜕膜化水平较入组时有明显改善。结论(1)URSA患者分泌晚期外周血中自噬水平降低影响蜕膜化水平,进而增加流产发生的风险。(2)补肾活血方可显著改善肾虚血瘀型URSA患者分泌晚期外周血中自噬水平,进而改善蜕膜化状态,为正常妊娠奠定基础。

补肾活血方对肾虚血瘀型不明原因月经过少患者血清中VEGF、TGF-β1的影响

目的补肾活血方治疗肾虚血瘀型不明原因月经过少患者临床疗效并探讨其对患者血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的影响。方法对收集2019年6月—2021年6月南京市中西医结合医院门诊诊治肾虚血瘀型不明原因月经过少患者60例,随机分为观察组和对照组。对照组给予戊酸雌二醇联合黄体酮胶囊序贯治疗,观察组在此基础上给予补肾活血汤口服,疗程为3个月经周期。同时收集月经正常的30例妇女作为正常组,观察两组治疗前后分泌晚期血清中VEGF、TGF-β1及子宫内膜厚度、月经失血图积分、中医证候积分的变化,并与正常组比较。结果(1)观察组脱落2例,剔除1例,对照组脱落3例,剔除1例,最终观察组共27例,对照组26例。(2)观察组、对照组分泌晚期血清中VEGF、TGF-β1均低于正常组(P<0.05);治疗后两组VEGF、TGF-β1较前均明显升高(P<0.05);观察组上升趋势明显,优于对照组(P<0.05),且与正常组无明显差异(P>0.05)。子宫内膜厚度比较,治疗前观察组与对照组内膜厚度均明显低于正常组(P<0.05);治疗后,两组子宫内膜厚度较前均明显增厚(P<0.05),但观察组优于对照组(P<0.05)。对于中医证候积分的改善及月经失血图评分的评估,观察组优于对照组(P<0.05)。结论不明原因月经过少的发病机制可能与分泌晚期血清中的VEGF、TGF-β1水平下降有关,补肾活血方可通过提高分泌晚期血清中VEGF及TGF-β1水平,使得子宫内膜增厚、增加月经量,明显改善患者的中医证候,临床疗效显著,优于单用雌孕激素序贯治疗。

补肾活血方配合膝寸劲伸缩锻炼治疗中重度膝骨关节炎的疗效及对相关炎症因子的影响

目的探讨补肾活血方配合膝寸劲伸缩锻炼治疗中重度膝骨关节炎(KOA)的效果及对血清白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法50例中重度KOA患者随机分为对照组与治疗组(各25例),对照组用艾瑞昔布、盐酸氨基葡萄糖及股四头肌收缩锻炼治疗,治疗组用补肾活血方与膝关节寸劲伸缩锻炼治疗。观察两组患者治疗前、治疗后1周与3周时膝Lysholm关节功能评分、血清IL-6及TNF-α的变化,并随访患者0.5~1年内急性疼痛的复发情况。结果治疗前,两组患者膝Lysholm评分、血清IL-6及TNF-α比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗1周后,两组患者膝Lysholm评分、血清IL-6与TNF-α水平与各组治疗前比较均有统计学意义(均P<0.01),且治疗组更优于对照组(均P<0.01)。治疗3周后,两组患者膝Lysholm评分、血清IL-6与TNF-α水平与治疗前、治疗1周后比较均有统计学意义(均P<0.01),且治疗组更优于对照组(P<0.01)。治疗后0.5~1年内,两组患者急性疼痛发作频次无统计学意义。结论补肾活血方配合膝寸劲伸缩锻炼治疗中重度KOA疗效显著,且可快速降低患者血清IL-6与TNF-α表达水平。

补肾健脾活血方调节尾部悬吊大鼠肌蛋白合成与分解的机制研究

目的探究补肾健脾活血方对废用性肌萎缩的影响及过程中肌蛋白合成与分解机制。方法选取40只2月龄雌性大鼠,分为5组:空白组(A)、造模组(B)、低药量组(C)、中药量组(D)、高药量组(E),每组8只。除A组自由活动外,其余4组按照尾部悬吊法进行造模。C、D、E组给予不同剂量补肾健脾活血汤干预,A、B组给予等量蒸馏水。给药28 d后处死大鼠,称重比目鱼肌,测量湿重/体质量比。采用HE染色法对比目鱼肌肌肉组织形态与细胞核聚集状态进行病理形态学观察。ELISA检测补肾健脾活血方对血清中肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)的干预情况。Western blot检测补肾健脾活血方对比目鱼肌肌肉组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激(AKT)、SMAD蛋白3(Smad3)、叉头蛋白转录因子(FOXO1)、肌萎缩F-box蛋白(MAFbx)、肌环指蛋白-1(MuRF1)蛋白表达的干预情况。结果形态学观察显示,同A组相比,B组大鼠比目鱼肌湿重/体质量比值显著降低(P<0.01),肌纤维横截面明显减少,肌纤维密度明显增加,肌纤维间筋膜横截面明显增加,肌束间筋膜横截面明显减少,细胞核高度聚集;同B组比较,C、D、E组肌肉湿重/体质量比值有所上升(P<0.05),肌纤维横截面明显增加,肌纤维密度明显降低,肌束间筋膜横截面显著增加,核聚集程度降低;同D组比较,C组和E组肌肉湿重/体质量比值无明显差异(P>0.05),但伴随药物浓度的增加,C、D、E组肌肉湿重/体质量比值呈现逐渐增加趋势,且肌纤维横截面逐渐增大,肌纤维密度逐渐减小,肌束间筋膜横截面增加逐渐显著,核聚集减少逐渐显著。ELISA检测发现,同A组相比,B组大鼠血清中的MSTN水平显著升高(P<0.01);同B组相比,C组MSTN水平下降(P<0.05),D、E组MSTN水平明显下降(P<0.01);同D组比较,C、E组MSTN水平没有显著性差异(P>0.05)。Western blot检测结果显示,同A组相比,B组大鼠体内Smad3、Akt蛋白表达量减少(P<0.05),FOXO1、MuRF1、MAFbx表达增加(P<0.05);同B组比较,C、D、E组AKT表达均有所增加(P<0.05),FOXO1、MuRF1、MAFbx表达均减少(P<0.05),但C组Smad3表达无明显差异(P>0.05),D组和E组Smad3表达明显增加(P<0.01);同D组比较,C组Smad3、AKT、MuRF1表达减少(P<0.01),FOXO1与MAFbx表达参数差异无统计学意义(P>0.05),E组Smad3、MuRF1表达明显增加(P<0.01),AKT、FOXO1、MAFbx表达参数差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾健脾活血方可以调控肌蛋白合成与分解,对废用性肌萎缩起到防治作用,其机制可能与调节TGF-β/myostatin信号通路以及泛素蛋白酶体途径相关。

基于PI3K/AKT通路介导EMT程序启动探讨补肾活血汤对乳腺癌的骨转移影响

目的探讨补肾活血汤对裸鼠乳腺癌的骨转移影响及机制研究。方法建立裸鼠乳腺癌模型,分空白组、模型组、补肾活血汤组、LY294002(PI3K抑制剂)组、联合组(补肾活血汤+LY294002组)。给药期间记录裸鼠体质量变化,药物干预后处死动物,取裸鼠乳腺肿瘤和骨组织,X线、CT影像学观察裸鼠骨质影响;苏木素-伊红(HE)观察裸鼠乳腺癌和肿瘤骨转移情况;免疫组化、蛋白免疫印迹法(western blot)检测骨组织破骨细胞活化因子T转录因子(nuclear factor-active T cell NFATC1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙蛋白(N-cadherin)、锌指E盒结合蛋白1(zinc finger E-box binding Protein 1)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)的蛋白表达。结果与空白组相比,模型组活动少,精神状态差,体质量降低(P<0.05),骨质破坏明显,骨转移率87%,E-cadherin蛋白表达下调,NFATC1、N-cadherin、ZEB1、PI3K/AKT等蛋白表达提高;与模型组相比,补肾活血汤组、联合组裸鼠精神可、体质量增加(P<0.05),LY294002组体质量与模型组相比未见明显增重(P>0.05);各实验组骨破坏均减少,其中补肾活血汤组抑制NFATC1活化,与模型组相比,能减少24%骨转移;western blot结果提示LY294002和补肾活血汤提高E-cadherin蛋白表达,降低N-cadherin、ZEB1、PI3K/AKT等蛋白表达(P<0.05),其作用在联合组表现更为显著(P<0.01)。结论补肾活血汤对乳腺癌裸鼠有骨保护且预防骨转移作用;补肾活血汤预防副转移作用可能减弱PI3K/AKT的活化蛋白表达相关。

补肾活血汤辅助泼尼松对原发性肾病综合征儿童眼部不良反应、视盘结构参数、复发的影响

目的探讨补肾活血汤辅助泼尼松对原发性肾病综合征儿童眼部不良反应、视盘结构参数、复发的影响。方法选择2019年1月—2021年1月120例确诊为原发性肾病综合征的儿童作为研究对象,采用随机数字法平均分为观察组与对照组:对照组给予泼尼松治疗,观察组在对照组基础上辅以补肾活血汤治疗。比例两组患儿出现眼部不良反应情况、视盘结构参数及复发情况。结果观察组复发次数、泼尼松用量均较对照组少(P<0.05);但随访12月时两组完全缓解及部分缓解比较差异无统计学意义(P>0.05)。观察组总眼部不良反应及单纯性白内障发生率均低于对照组(P<0.05),单纯性高眼压、高眼压联合白内障发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。两组患儿泼尼松治疗后眼压开始升高,治疗后3月眼压达高峰,后逐渐降低,但仍高于治疗前(P<0.05),观察组治疗后3、6、12月眼压均高于对照组(P<0.05);两组患儿泼尼松治疗后屈光度开始逐渐减小(P<0.05),观察组治疗后3、6、12月屈光度均低于对照组(P<0.05)。两组患儿泼尼松治疗后杯/盘比逐渐增高,盘沿体积、盘沿面积、神经纤维层平均厚度、神经纤维横截面面积均逐渐降低(P<0.05),而最大视杯深度变化差异无统计学意义(P>0.05);观察组治疗后3、6、12月杯/盘比低于对照组同时期(P<0.05),而盘沿体积、盘沿面积、神经纤维层平均厚度、神经纤维横截面面积均高于对照组同时期(P<0.05)。结论补肾活血汤辅助泼尼松可以更好地降低PNS患儿复发次数及激素剂量,且对降低糖皮质激素型高眼压监测、控制白内障病情进展有积极的作用。

补肾活血方“导法”调控5/12-LOX/LXA4/FPR2改善子宫内膜容受性不良大鼠的助孕机制

目的观察补肾活血方“导法”调控肾虚血瘀子宫内膜容受性不良大鼠种植窗期LXA4相关信号轴的助孕机制。方法通过分子对接预测补肾活血方有效组分与脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)合成酶及受体的结合程度;通过羟基脲灌胃+肾上腺素皮下注射构建肾虚血瘀内膜容受性不良复合模型大鼠;随机分为模型组、空白组、补肾活血导法低、中、高组、阳性组6组;各组造模同时予以相应干预方法,连续10 d,并于动情期按照2∶1雌雄合笼,次日晨检发现阴栓脱落或阴道涂片发现阴栓记为1.0 dpc,于6.0 dpc麻醉处死剖出子宫组织;记录每组子宫内膜、胞饮突形态并评分,观察子宫内膜上胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein-1,IGFBP-1)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)蛋白分布表达和同源盒基因A10(HomeoboxA10,HOXA10)mRNA表达,测定子宫组织匀浆中炎症介质LXA4、合成酶5/12/15-脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX)、受体甲酰肽受体2(Formyl Peptide Receptor-2,FPR2)和IGFBP-1、VEGF的蛋白含量。结果与空白组相比,模型组子宫内膜被覆上皮菲薄、腺体较少,与模型组对比;补肾活血方导法低、中、高剂量组、阳性组可下调肾虚血瘀PER模型大鼠种植窗期5-LOX、12-LOX、LXA4及FPR2的表达(P<0.05),提高了子宫内膜容受性标记物IGFBP-1、VEGF蛋白和HOXA10 mRNA表达。结论补肾活血方导法通过调控大鼠种植窗期子宫5/12-LOX/LXA4/FPR2信号通路纠正炎性微环境的平衡,进而改善子宫内膜容受性,促进胚-膜交互提高种植及妊娠成功率。

活血补肾方联合左氧氟沙星治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎效果分析

目的分析活血补肾方联合左氧氟沙星治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎效果。方法选取医院2017年4月—2019年5月收治的湿热瘀结型慢性盆腔炎患者108例,采用随机数字法分为两组。对照组给予左氧氟沙星治疗,观察组给予活血补肾方联合左氧氟沙星治疗,分析两组患者治疗后的临床效果。结果两组治疗前中医证候积分组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后主证(小腹胀痛、腰骶胀痛、带下量多)积分、次证(神疲乏力、口腻或纳呆、小便黄、大便干燥)积分低于对照组(P<0.05)。两组治疗前C反应蛋白(CRP)、血红素氧和酶-1(HO-1)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后CRP、HO-1、GM-CSF水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗前盆腔炎性包块直径组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后盆腔炎性包块直径(1.24±0.42)cm低于对照组(P<0.05)。观察组不良反应率(7.41%,4/54)与对照组(5.56%,3/54)比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论活血补肾方联合左氧氟沙星治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎可调节CRP、HO-1、GM-CSF的表达水平,缩小盆腔炎性包块直径,改善症状积分,且不增加不良反应。

补肾活血方对不明原因复发性流产未孕患者血清PP14、IL-17及IL-23影响的研究

目的 通过临床试验,以人胎白蛋白(PP14)蛋白和白介素17(IL-17)、白介素23(IL-23)为观察指标,观察补肾活血方在孕前治疗复发性流产(RSA)的疗效,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定PP14蛋白和IL-17、IL-23用药干预前后的表达情况。结合中医治疗滑胎的理念“未病先防”“预培其损”,探究PP14蛋白和IL-17、IL-23的表达情况与不明原因型复发性流产(URSA)的关系。方法 选择30例未孕URSA肾虚血瘀型患者作为试验组,29例正常未孕女性作为对照组。两组均于月经相分泌晚期采血后入组,3个月后分泌晚期再次采血。此期间观察组口服补肾活血方。在相应时间用ELISA法检测正常未孕女性和补肾活血方干预后的URSA肾虚血瘀型未孕女性外周血中PP14蛋白和IL-17、IL-23水平。结果 补肾活血方可使URSA未孕女性外周血中PP14表达水平升高,IL-17及IL-23水平降低。且三者之间具有显著相关性。结论 未孕状态下,PP14、IL-17及IL-23与URSA相关,可能是由于三者的表达失衡导致了URSA发生。补肾活血方可能通过提高未孕女性血清PP14含量,同时降低IL-17及IL-23的表达,达到改善URSA的效果。

益气补肾活血方联合甲氨蝶呤治疗肾虚瘀血痹阻型类风湿关节炎28例临床观察

目的:观察益气补肾活血方联合甲氨蝶呤治疗肾虚瘀血痹阻型类风湿关节炎的临床疗效。方法:将56例肾虚瘀血痹阻型类风湿关节炎患者随机分为治疗组和对照组,每组28例。对照组给予甲氨蝶呤片治疗,治疗组在对照组治疗基础上加用益气补肾活血方。2组均以3个月为1个疗程。观察2组治疗前后中医证候积分、红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、抗环瓜氨酸肽抗体(抗CCP抗体)、IL-1和TNF-α的变化。结果:治疗后,2组患者中医证候均较治疗前明显改善(P<0.05)。2组患者ESR、CRP、RF、抗CCP抗体、IL-1、TNF-α较治疗前均明显下降(P<0.05),治疗组RF、IL-1、TNF-α下降较对照组更明显(P<0.05)。结论:益气补肾活血方联合甲氨蝶呤治疗肾虚瘀血痹阻型类风湿关节炎具有较好的疗效,能有效下调炎症因子IL-1、TNF-α水平,具有明显的抑制免疫炎症作用。

补肾活血汤合桂枝茯苓片对多囊卵巢综合征抗苗勒管激素水平及对妊娠率影响

目的观察用补肾活血汤合桂枝茯苓片对多囊卵巢综合征(polycystic ovary syndrome,PCOS)患者抗苗勒管激素水平变化及对妊娠率影响。方法选取2022年1月—2022年7月珠海高新技术产业开发区人民医院门诊、住院收治PCOS患者90例作为的研究对象。采用随机数表法分为治疗组和对照组各45例。对照组采用基础治疗;治疗组在对照组基础上增加补肾活血汤合桂枝茯苓片进行治疗,对比两组治疗前后的卵巢抗苗勒管激素(AMH)水平、促黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)、睾酮(T)以及促卵泡激素(FSH)、卵巢功能以及治疗后的妊娠率和不良反应。结果治疗后,两组AMH、LH、E2、T水平均降低,治疗组显著低于对照组(P<0.05),两组FSH水平均升高,治疗组高于对照组(P<0.05);治疗后两组子数均减少,卵子直径均增加,治疗组优于对照组(P<0.05);治疗组临床有效率高于对照组(P<0.05);治疗组妊娠率高于对照组(P<0.05);治疗组不良反应发生率低于对照组(P<0.05)。结论补肾活血汤合桂枝茯苓片治疗PCOS效果明显,可有效地改善患者AMH水平和其他激素水平,增强卵巢功能,提高妊娠率,减少不良反应的发生。

基于STAT3通路探讨补肾活血方抑制骨细胞凋亡

目的探讨补肾活血方通过信号转导与转录激活子3(STAT3)通路抑制骨细胞的凋亡对骨质疏松的治疗作用。方法选取SPF级健康雌性C57BL/6小鼠75只,随机分为正常对照组11只及造模组64只。造模组采用去势法建立骨质疏松症模型,正常对照组仅暴露双侧卵巢而不切除。将造模成功的小鼠随机分为模型组、补肾活血方低、中、高剂量组及阳性对照组,各12只。模型组和正常对照组分别灌胃给予蒸馏水5 mL·kg^(-1),1次/d;补肾活血方低、中、高剂量组分别灌胃给予1.79、3.57、7.14 g·mL^(-1)补肾活血方药液5 mL·kg^(-1),1次/d;阳性对照组灌胃给予0.14 mg·mL^(-1)尼尔雌醇混悬液5 mL·kg^(-1),1次/d。各组小鼠均治疗12周。检测比较各组骨形态参数,骨细胞凋亡指数(AI),以及骨组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Janus激酶2(JAK2)、STAT3表达水平。结果与模型组比较,各组小鼠骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)及骨密度(BMD)值较高,骨组织Bcl-2蛋白表达水平较高,且补肾活血方低剂量组<补肾活血方中剂量组<补肾活血方高剂量组和阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各组小鼠骨组织AI较低,骨组织Bax蛋白表达水平较低,骨组织JAK2、STAT3表达水平较低,且补肾活血方低剂量组>补肾活血方中剂量组>补肾活血方高剂量组和阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血方能剂量依赖性的增加骨质疏松小鼠骨密度,增加骨小梁厚度和数量,抑制骨细胞凋亡,其作用可能与抑制STAT3信号通路,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达有关。

补肾活血方调节miRNA-140-5p表达干预人原代软骨细胞退变的研究

目的:研究补肾活血方含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)刺激的人原代软骨细胞miRNA-1 40及其靶基因表达的影响。方法:通过采用生理盐水和补肾活血方分别灌胃雌性SD大鼠制备空白血清和含药血清。将人软骨细胞种植于6孔板并且分为3组。空白对照组和模型对照组细胞培养的血清采用大鼠空白血清,含药血清组细胞培养的血清采用大鼠含药血清。另外,模型对照组和含药血清组细胞加入10 ng·mL^(-1) IL-1β。以上各组细胞设3个复孔,继续培养细胞至IL-1β刺激后24 h收集各组细胞提取总RNA。采用RT-qPCR检测软骨细胞miRNA-140-5p以及聚蛋白样金属蛋白酶-5(ADAMTS-5)、胰岛素样生长因子结合蛋白5(IGFBP5)和基质金属蛋白酶-13(MMP-13)mRNA表达。结果:与空白对照组比较,模型对照组软骨细胞miRNA-140-5p表达和IGFBP5 m RN A表达明显降低(P<0.05),ADAMTS-5和MMP-13mRNA表达明显升高(P<0.05);与模型对照组比较,补肾活血方含药血清显著升高了IL-1β刺激的软骨细胞miRNA-140-5p表达和IGFBP5 mRNA表达(P<0.05),并且显著降低ADAMTS-5和MMP-13 mRNA表达(P<0.05)。结论:补肾活血方含药血清可以抑制IL-1β导致的人原代软骨细胞退变,其作用机制与提高miRNA-140-5p和IGFBP5 mRNA表达,降低ADAMTS-5和MMP-13 mRNA表达有关。

基于“心脑肾轴”理论探究补肾活血方对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA表达影响

目的旨在基于“心脑肾轴”理论通过该实验探讨补肾活血方对心肌梗死后慢性心衰(chronic heart failure,CHF)大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达的影响。方法从80只健康雄性大鼠中,随机选取20只大鼠,作为空白对照组,其余大鼠经结扎法配以节食、力竭式游泳以建立慢性心衰大鼠模型,将造模成功的60只大鼠随机分为中药组、西药组以及模型对照组。中药组(9.2 g·kg^(-1)·d^(-1))、西药组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃予以相应药物,空白对照组、模型对照组予以等量的去离子水,对每组大鼠行灌胃处理,每日1次。予以灌胃处理28 d后,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠外周血中ATP、ADP、NT-proBNP浓度;采用实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织中PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达量。结果与空白对照组比较,心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的ATP浓度明显下降,ADP、NTproBNP浓度显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,中药组和西药组大鼠ATP表达升高,ADP、NT-proBNP表达下降(P<0.05)。与空白对照组比较,心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平降低,组内之间的差异均有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,中药组和西药组大鼠PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平升高,组内之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。中药组与西药组的ATP、ADP、NT-proBNP浓度以及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平无明显差异,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血方可使得心梗后心衰大鼠心肌细胞PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA的表达上调,促进PGC-1α、NRF-1、mtTFA蛋白含量增加,从而增加线粒体的生成和ATP产能,改进心肌细胞的能量代谢,以此来改善和纠正心衰。