补肾健脾开心方对AD大鼠自噬及凋亡相关蛋白的影响

目的观察补肾健脾开心方对阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)大鼠学习记忆能力、认知功能及脑皮质区自噬及凋亡的影响,探讨其作用机制。方法60只SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肾组(3.6 g/(kg·d))、健脾组(4.05 g/(kg·d))、开心组(2.34 g/(kg·d))、补肾健脾开心组(9.99 g/(kg·d)),每组10只。采用D-gal注射制备AD大鼠模型,补肾组、健脾组、开心组、补肾健脾开心组分别以相应药物灌胃,空白组、模型组给予等量生理盐水,每日1次。给药4周后,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,旷场实验检测大鼠认知功能,Western blot检测脑皮质组织LC3-I、LC3-II、Beclin1的表达,免疫组化法检测脑皮质组织Bax、Bcl-2的表达,RTPCR检测脑皮质组织Beclin1、P62、Bax、Bcl-2基因水平的表达。结果与空白组比较,模型组大鼠空间学习记忆能力、认知功能明显下降(P<0.01),Beclin1、LC3-I/LC3-II比值显著下调(P<0.01),P62、Bax增多(P<0.01),Bcl-2及Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01);经补肾健脾开心方治疗后,与模型组比较,补肾健脾开心组大鼠空间学习记忆能力、认知功能改善(P<0.01),Beclin1、LC3-I/LC3-II比值显著上调(P<0.01),P62、Bax减少(P<0.01),Bcl-2及Bcl-2/Bax比值明显升高(P<0.01)。结论补肾健脾开心方可以改善AD大鼠认知障碍,其作用机制可能与调控自噬及凋亡有关。

补肾健脾开心方对阿尔茨海默病模型大鼠认知功能及自噬相关蛋白表达的影响

目的探讨补肾健脾开心方对阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)大鼠学习记忆能力的影响及其作用机制。方法72只雄性SPF级SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组、补肾组、健脾组、开心组、补肾健脾开心组,每组12只。采用D-半乳糖注射制备AD大鼠模型,1次/d,持续6周。补肾组(3.60 g·kg^(-1)·d^(-1))、健脾组(4.05 g·kg^(-1)·d^(-1))、开心组(2.34 g·kg^(-1)·d^(-1))、补肾健脾开心组(9.99 g·kg^(-1)·d^(-1))大鼠分别给予对应剂量的药物灌胃,空白组、模型组大鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液,1次/d,连续28 d。采用Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测脑皮质组织磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)、蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达,RT-PCR技术检测脑皮质组织自噬相关蛋白p62和Beclin的表达。采用SPSS 25.0统计软件进行数据处理,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD检验。结果Morris水迷宫结果显示,6组大鼠的逃避潜伏期、穿越平台次数均差异有统计学意义(F=368.10,47.43,均P<0.01)。补肾健脾开心组逃避潜伏期比模型组低[(29.30±1.64)s,(55.58±3.23)s]、跨越平台次数比模型组高[(5.17±0.72)次,(1.50±0.52)次](均P<0.01)。补肾组、健脾组、开心组逃避潜伏期均比补肾健脾开心组高(均P<0.01),补肾组跨越平台次数比补肾健脾开心组低(P<0.01)。免疫组化结果显示,6组间的PI3K、Akt、mTOR阳性蛋白表达水平均差异有统计学意义(F=68.52,22.22,31.52,均P<0.01)。补肾健脾开心组PI3K阳性蛋白表达水平[(0.47±0.15),(0.57±0.12)]、Akt阳性蛋白表达水平[(0.31±0.02),(0.38±0.02)]、mTOR阳性蛋白表达水平[(0.22±0.18),(0.28±0.11)]均比模型组低(均P<0.01)。补肾组、健脾组、开心组PI3K阳性蛋白表达水平及mTOR阳性蛋白表达水平均比补肾健脾开心组高(均P<0.01),补肾组、开心组Akt阳性蛋白表达水平均比补肾健脾开心组高(P<0.01)。RT-PCR结果显示,各组间的Beclin、p62 mRNA水平均差异有统计学意义(F=8.79,21.01,均P<0.01)。补肾健脾开心组Beclin mRNA比模型组高[(0.97±0.07),(0.64±0.12)]、p62 mRNA比模型组低[(0.98±0.16),(1.16±0.24)](均P<0.01)。补肾组、健脾组、开心组p62 mRNA均比补肾健脾开心组高(均P<0.05)。结论补肾健脾开心方可以改善AD大鼠认知障碍,提高学习记忆能力,其作用机制可能与调控PI3K/Akt/mTOR自噬通路有关,且组方用药优于拆方用药。

基于Keap1/Nrf2通路探讨补肾健脾开心方对衰老大鼠学习认知能力及脑皮质氧化应激的影响

目的 观察补肾健脾开心方对衰老大鼠学习记忆能力、认知功能及脑皮质氧化应激的影响,并探讨其作用机制。方法 47只SD大鼠根据随机数字表法分为空白组(n=10)和造模组(n=37)。造模组大鼠腹腔注射D-半乳糖生理盐水溶液(300 mg/kg),连续6周,建立衰老大鼠模型。造模成功后,任意取30只大鼠,随机数字表法分为模型组、补肾健脾开心方组和维生素E组,每组10只。补肾健脾开心方组大鼠给予补肾健脾开心方(9.99 g/kg)灌胃,维生素E组大鼠给予维生素E(13.5 mg/kg)灌胃,空白组、模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续4周。给药结束后,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆能力,旷场实验检测大鼠认知功能,WST-1法检测超氧化物歧化酶(SOD)活力、TBA法检测丙二醛(MDA)含量、比色法检测抑制羟自由基能力,免疫组织化学法检测脑皮质半胱天冬酶-1(Caspase-1)阳性表达,实时荧光PCR法检测脑皮质Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核红细胞2相关因子2(Nrf2)、醌氧化还原酶1(NQO1)、血红素加氧酶-1(HO-1)mRNA表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠逃避潜伏期从第3天开始延长(P<0.05,P<0.01)、跨越平台次数减少(P<0.01),运动距离和中心区域运动时间比例减少(P<0.01),SOD活力和抑制羟自由基能力减弱(P<0.01),MDA表达增多(P<0.01),Caspase-1阳性表达增多(P<0.01),Keap1 mRNA表达增多(P<0.01),Nrf2、NQO1、HO-1 mRNA表达减少(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,补肾健脾开心方组大鼠第4、5天逃避潜伏期缩短(P<0.05,P<0.01)、跨越平台次数增多(P<0.01),运动距离和中心区域运动时间比例增多(P<0.01),SOD活力和抑制羟自由基能力增强(P<0.01),MDA表达减少(P<0.01),Caspase-1阳性表达减少(P<0.01),Keap1 mRNA表达减少(P<0.01),Nrf2、HO-1 mRNA表达增多(P<0.05,P<0.01)。结论 补肾健脾开心方可以改善衰老大鼠认知障碍、延缓衰老,其作用机制可能与调控氧化应激有关。