基于大鼠肝星状细胞氧化应激探讨化浊解毒补肾方治疗绝经后女性肝纤维化机制

目的通过研究化浊解毒补肾方含药血清对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导大鼠肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)氧化应激的影响,进一步探讨该方治疗绝经后女性肝纤维化的机制。方法制备化浊解毒补肾方含药血清和正常血清。将肝星状细胞随机分为空白组、模型组、空白血清组、氟维司群(ICI 182780,以下简记为ICI)组、中药组、中药+ICI组、雌二醇(estradiol,E2)组、E2+ICI组,随后按照分组处理细胞。采用流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;ELISA法检测细胞中丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;免疫荧光染色法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;Western Blot法检测胞浆细胞色素C(cytochrome C)、环氧化酶-Ⅰ(cyclooxygenase-Ⅰ,COX-Ⅰ)、α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠ)表达。结果与空白组比较,模型组细胞中ROS、MDA水平和α-SMA、collagenⅠ蛋白表达以及α-SMA平均荧光强度均明显升高(P<0.0001,P<0.001),SOD水平、cytochrome C、COX-Ⅰ蛋白表达均明显降低(P<0.0001);与模型组比较,中药组和E2组ROS、MDA水平和α-SMA、collagenⅠ蛋白表达以及α-SMA平均荧光强度均有明显降低(P<0.0001,P<0.001,P<0.01,P<0.05),SOD水平、cytochrome C、COX-Ⅰ蛋白表达均有明显升高(P<0.0001);与中药组和E2组比较,在各自加入ICI处理后,对应的ROS、MDA水平和α-SMA、collagenⅠ蛋白表达以及α-SMA平均荧光强度均有明显升高(P<0.0001,P<0.001,P<0.05),SOD水平和cytochrome C、COX-Ⅰ蛋白表达均有明显降低(P<0.001,P<0.05,P<0.01)。结论化浊解毒补肾方含药血清可通过雌激素受体降低ROS、MDA水平和α-SMA、collagenⅠ蛋白表达以及α-SMA平均荧光强度,提高SOD水平和cytochrome C、COX-Ⅰ蛋白表达,从而提高抗氧化能力,减轻氧化应激反应,最终起到防治绝经后女性肝纤维化的作用。

补肾固胎方联合黄体酮注射液治疗肾虚型早期先兆流产疗效及对妊娠激素水平和Th1/Th2细胞因子的影响

目的 观察补肾固胎方联合黄体酮注射液治疗肾虚型早期先兆流产疗效及对妊娠激素水平和Th1/Th2细胞因子的影响。方法 采用随机数字表法将符合入选标准的120例肾虚型早期先兆流产患者分为观察组和对照组。对照组予黄体酮注射液治疗,观察组同联合补肾固胎方治疗。连续治疗2周后,比较两组中医证候积分(妊娠期阴道流血、小腹坠胀或疼痛、腰酸痛、膝关节酸软)、妊娠激素水平[雌二醇(Estradiol, E_(2))、人绒毛膜促性腺激素(Human chorionic gonadotropin, β-HCG)、孕酮(Progesterone, P)]、Th1/Th2细胞因子[白细胞介素2(interleukin-2,IL-2)、白细胞介素4(interleukin-4,IL-4)、γ干扰素(Interferon-γ,INF-γ)]改善情况,统计两组治疗总有效率、妊娠结局及不良反应发生率。结果 两组治疗后妊娠期阴道流血、小腹坠胀或疼痛、腰酸痛、膝关节酸软积分,IL-2、INF-γ水平均低于治疗前(P<0.05),且观察组治疗后以上中医证候积分和IL-2、INF-γ水平均低于对照组(P<0.05);两组治疗后IL-4水平均高于治疗前(P<0.05),且观察组治疗后IL-4水平高于对照组(P<0.05);观察组总有效率为(91.7%,55/60),高于对照组(75.0%,45/60)(P<0.05);观察组足月分娩率为(85.0%,51/60),高于对照组(56.7%,34/60)(P<0.05);观察组不良反应发生率为3.3%,低于对照组(25.0%)(P<0.05)。结论 补肾固胎方联合黄体酮注射液能够有效调节肾虚型早期先兆流产患者妊娠激素水平和Th1/Th2细胞因子水平,纠正免疫功能紊乱,降低患者流产率,提高足月妊娠率,改善妊娠结局。

通过调控VEGF信号通路探讨补肾通络方对子宫内膜损伤后HUVECs促增殖、血管生成和迁移作用

目的探析补肾通络方对子宫内膜损伤后人脐静脉内皮细胞模型(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)促增殖、血管生成和迁移作用,及对调控血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)信号通路的影响。方法选择2020年1月—2021年12月,购自武汉大学典型培养物保藏中心的12份HUVECs,给予50 ng/mL VEGF处理后,分别实施20%、10%、5%补肾通络方含药血清和无补肾通络方含药血清干预处理。比较补肾通络方对子宫内膜损伤后,VEGF信号通路的影响及对HUVECs增殖、迁移、血管生成的影响。结果比较20%、10%、5%补肾通络方含药血清和无补肾通络方含药血清干预后24 h的HUVECs活性和24 h细胞生长检测所得OD值,差异无统计学意义(P>0.05);20%补肾通络方含药血清组48 h、72 h的HUVECs活性、细胞生长检测所得OD值及VEGF表达量、HUVECs细胞迁移数均高于10%、5%补肾通络方含药血清组和无补肾通络方血清组,差异有统计学意义(P<0.05)。20%补肾通络方含药血清干预组的血管网状结构完整度优于10%、5%补肾通络方含药血清和无补肾通络方血清,无补肾通络方血清干预组的血管网状结构完整度最差,补肾通络方可逆转VEGF抑制细胞活性的趋势,促进HUVECs的血管形成。结论将补肾通络方应用到子宫内膜损伤中,可逆转VEGF抑制细胞活性的趋势,增强HUVECs的细胞活性,促进细胞增殖、迁移,促进血管新生,促进内皮细胞网络结构的重建,利于促进内皮细胞损伤的修复,利于子宫内膜功能的恢复,且与补肾通络方含药血清浓度呈一定量效关系。

补肾宣肺方对慢性支气管炎急性发作期患者IP-10、Rantes及炎症因子的影响

目的 观察补肾宣肺方联合西药治疗慢性支气管炎急性发作对患者干扰素-γ诱导蛋白10(IP-10)、T细胞表达分泌的活化调节因子(Rantes)及炎症因子的影响。方法 选取青岛市中医医院(市海慈医院)青岛大学附属青岛市海慈医院于2021年6月—2022年12月收治的慢性支气管炎急性发作患者140例,采用随机数字表法,将合格受试者按1∶1原则分为两组。对照组70例采用西药治疗,观察组70例采用补肾宣肺方联合西药治疗,两组均治疗2周。统计两组2周后的总有效率和不良反应率,记录两组中医证候积分、生活质量评分及IP-10、Rantes、炎症因子、血气指标、第1秒用力呼气容积占预计值百分比(FEV1%)预计值的变化。结果 疗效方面:观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。中医证候方面:治疗后,两组咳嗽、咳痰、胸满气短及痰黄黏稠积分较治疗前下降(P<0.05),观察组上述中医证候积分低于对照组(P<0.05)。检验方面:治疗后,两组干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-10(IL-10)较治疗前上升,IP-10、Rantes、高敏-C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-6(IL-6)较治疗前下降(P<0.05),观察组IFN-γ、IL-10高于对照组,IP-10、Rantes、hs-CRP、IL-6低于对照组(P<0.05)。血气和肺功能方面:治疗后,两组动脉血氧分压(PaO_(2))、FEV1%预计值较治疗前上升(P<0.05),动脉血二氧化碳分压(PaCO_(2))较治疗前下降(P<0.05),观察组血气指标、FEV1%预计值优于对照组(P<0.05)。生活质量方面:治疗后,两组生理机能、社会功能、生理职能、躯体疼痛、精力、一般健康、情感职能及精神状况评分较治疗前上升(P<0.05),观察组生活质量评分高于对照组(P<0.05)。安全性方面:两组不良反应比较,无统计学意义(P>0.05)。结论 补肾宣肺方联合西药治疗慢性支气管炎急性发作可降低IP-10、Rantes及炎症因子的表达,改善血气指标和FEV1%预计值,提高生活质量和疗效。

补肾活血复方调控Wnt通路抑制心力衰竭心肌损伤及细胞凋亡的机制研究

目的 研究补肾活血复方通过抑制Wnt信号通路(Wingless)抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡的分子机制。方法 将45只斯泼累格·多雷(Sprague-Dawley, SD)大鼠随机分为假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组。采用结扎冠状动脉配合力竭式游泳构建心力衰竭模型。造模成功后按照实验分组利用补肾活血复方或赖诺普利给予大鼠持续灌胃4周。治疗结束后,采用彩色超声多普勒心动图评价大鼠心功能,称取体质量(body weight, BM)及左心室湿质量(left ventricular wet mass, LVM),计算左心室质量指数(left ventricular mass index, LVMI),苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色检测心肌病理组织学损伤,蛋白质印迹(Western blot)检测BCL2凋亡调节器(BCL2 apoptosis regulator, Bcl-2)、BCL2相关X,凋亡调节器(BCL2 associated X,apoptosis regulator, Bax)、活化半胱天冬酶3(cleaved-caspase-3)、Wnt家族成员3A(wnt family member 3A,Wnt3a)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测Bcl-2、Bax、半胱天冬酶3(Caspase-3)、Wnt3a、β-catenin mRNA表达。结果 与假手术组比,模型组的左心室舒张末内径(left ventricular end diastolic diameter, LVEDD)及左心室收缩末内径(left ventricular end systolic diameter, LVESD)、LVMI、Bax、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著上调,左室短轴缩短率(left ventricular short axis shortening rate, LVFS)、左心室射血分数(left ventricular ejection fraction, LVEF)、Bcl-2蛋白及mRNA,cleaved-caspase-3蛋白,Caspase-3 mRNA表达均显著下调,差异均有统计学意义(P<0.05);与模型组比,补肾活血复方组及赖诺普利组LVEDD、LVESD、LVMI、Bax、cleaved-caspase-3、Wnt3a、β-catenin蛋白及mRNA表达显著下调,LVFS、LVEF、Bcl-2蛋白及mRNA表达显著上调,差异均有统计学意义(P<0.05)。假手术组心肌细胞形态正常,肌纤维排列整齐,结构清晰;模型组心肌纤维紊乱,存在炎性细胞浸润;赖诺普利组及补肾活血复方组心肌损伤及炎症浸润明显改善。结论 补肾活血复方可通过抑制Wnt信号通路抑制心力衰竭大鼠心肌损伤及细胞凋亡。

不明原因复发性流产患者分泌晚期外周血中自噬水平对蜕膜化调控作用及补肾活血方干预机制

目的探索分泌晚期外周血中自噬水平的异常对不明原因复发性流产(unexplained recurrent spontaneous abortion,URSA)患者蜕膜化的影响及补肾活血方的作用机制。方法收集至少有过一次成功妊娠且无自然流产史的女性(对照组)40例和肾虚血瘀型URSA患者(观察组)40例。观察组在入组后的3个月内严格按照实验要求服用中药汤剂补肾活血方。运用ELISA法检测两组分泌晚期血清中人胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein-1,IGFBP-1)和催乳素(prolactin,PRL)水平,Western blot法检测微管相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬相关基因6(Beclin 1)、泛素样结合蛋白(p62)、雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达。结果(1)观察组中自噬水平、蜕膜化水平较对照组女性明显降低。(2)治疗后观察组自噬水平、蜕膜化水平较入组时有明显改善。结论(1)URSA患者分泌晚期外周血中自噬水平降低影响蜕膜化水平,进而增加流产发生的风险。(2)补肾活血方可显著改善肾虚血瘀型URSA患者分泌晚期外周血中自噬水平,进而改善蜕膜化状态,为正常妊娠奠定基础。

补肾活血方配合膝寸劲伸缩锻炼治疗中重度膝骨关节炎的疗效及对相关炎症因子的影响

目的探讨补肾活血方配合膝寸劲伸缩锻炼治疗中重度膝骨关节炎(KOA)的效果及对血清白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法50例中重度KOA患者随机分为对照组与治疗组(各25例),对照组用艾瑞昔布、盐酸氨基葡萄糖及股四头肌收缩锻炼治疗,治疗组用补肾活血方与膝关节寸劲伸缩锻炼治疗。观察两组患者治疗前、治疗后1周与3周时膝Lysholm关节功能评分、血清IL-6及TNF-α的变化,并随访患者0.5~1年内急性疼痛的复发情况。结果治疗前,两组患者膝Lysholm评分、血清IL-6及TNF-α比较差异无统计学意义(P>0.05)。治疗1周后,两组患者膝Lysholm评分、血清IL-6与TNF-α水平与各组治疗前比较均有统计学意义(均P<0.01),且治疗组更优于对照组(均P<0.01)。治疗3周后,两组患者膝Lysholm评分、血清IL-6与TNF-α水平与治疗前、治疗1周后比较均有统计学意义(均P<0.01),且治疗组更优于对照组(P<0.01)。治疗后0.5~1年内,两组患者急性疼痛发作频次无统计学意义。结论补肾活血方配合膝寸劲伸缩锻炼治疗中重度KOA疗效显著,且可快速降低患者血清IL-6与TNF-α表达水平。

补肾化瘀方对卵巢储备功能低下不孕患者子宫内膜容受性的影响

目的观察补肾化瘀方对卵巢储备功能低下(diminished ovarian reserve,DOR)不孕患者子宫内膜容受性的影响。方法纳入70例DOR不孕患者,同时辨证为肾虚血瘀证,用随机数字法分为对照组35例和观察组35例。对照组给予来曲唑、戊酸雌二醇、地屈孕酮治疗,观察组给予来曲唑、补肾化瘀方、地屈孕酮治疗。以3个月经周期为1个疗程,停药后随访3个月经周期。比较两组患者的性激素水平,HCG注射日两组患者的子宫内膜厚度、类型、血流,以及两组妊娠率。结果(1)治疗前后两组患者性激素、AMH比较后,FSH/LH比值、基础血清FSH值较治疗前降低,T和AMH值较治疗前升高;治疗后组间比较,观察组优于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。(2)HCG注射日,观察组患者的子宫内膜明显增厚、子宫动脉PI、RI降低、A型内膜例数均优于对照组。(3)观察组患者的妊娠率高于对照组。结论补肾化瘀方能改善DOR不孕患者的子宫内膜容受性,提高临床妊娠率。

补肾解毒方对辐射致小鼠胎盘结构损伤的防护作用研究

目的探究中、低剂量辐射对小鼠胎盘结构的影响及补肾解毒方对胎盘损伤的防护作用。方法选取受孕后孕鼠25只,随机分为5组,分别为空白对照组,1 Gy辐射组,4 Gy辐射组,1 Gy辐射+中药组,4 Gy辐射+中药组,自受孕第1天开始每日分别予1 Gy辐射组,4 Gy辐射组组生理盐水灌胃,1 Gy辐射+中药组,4 Gy辐射+中药组补肾解毒方溶液灌胃,10 d后分别予1 Gy、4 Gy 60 Co-γ射线照射,照射后仍以以上方法灌胃10 d,剖腹取出仔鼠及胎盘,称重胎盘,电镜观察胎盘切片。结果与空白对照组相比,1 Gy辐射组和1 Gy辐射+中药组仔鼠胎盘组织损伤轻微,胎盘重量及胎盘结构改变均不明显;4 Gy辐射组胎盘重量较空白对照组明显降低(P<0.05),胎盘结构疏松紊乱,主要可见血管管腔扩大,内有血凝块,血管内红细胞明显减少,组织间有淤血现象,纤维素样坏死等表现;4 Gy辐射+中药组胎盘重量较空白对照组亦明显降低(P<0.05),但较单纯4 Gy辐射组有所增加(P<0.05),胎盘血管组织结构尚清晰,血管扩张不明显。结论中高剂量辐射会导致胎盘重量减低和组织损伤,尤其血管损伤明显,补肾解毒方对中高剂量辐射具有较好的防护作用。

补肾调经方对雄激素诱导无排卵大鼠氧化损伤、抗氧化能力及卵巢雌激素水平的影响

目的 :探讨补肾调经方对无排卵大鼠血浆丙二醛 (MDA )、血清总胆红素 (Tbil)、直接胆红素 (Dbil)、间接胆红素 (I bil)、总抗氧化能力 (T AOC)及卵巢雌激素水平的影响。方法 :采用雄激素诱导无排卵模型大鼠为研究对象 ,应用苯甲酸钠—咖啡因比色法、比色法、放免法测定大鼠血浆丙二醛 ,血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总抗氧化能力和雌激素水平。结果 :无排卵大鼠血浆丙二醛含量显著高于正常大鼠 ,血清总胆红素、直接胆红素和总抗氧化能力明显低于正常组。补肾调经方能显著提高无排卵大鼠血清总胆红素、直接胆红素、间接胆红素及总抗氧化能力 ,降低丙二醛含量。结论 :氧化损伤可能影响无排卵的发生 ,补肾调经方具有提高无排卵大鼠血清总胆红素、直接、间接胆红素水平及总抗氧化能力 。

补肾活血方“导法”调控5/12-LOX/LXA4/FPR2改善子宫内膜容受性不良大鼠的助孕机制

目的观察补肾活血方“导法”调控肾虚血瘀子宫内膜容受性不良大鼠种植窗期LXA4相关信号轴的助孕机制。方法通过分子对接预测补肾活血方有效组分与脂氧素A4(LipoxinA4,LXA4)合成酶及受体的结合程度;通过羟基脲灌胃+肾上腺素皮下注射构建肾虚血瘀内膜容受性不良复合模型大鼠;随机分为模型组、空白组、补肾活血导法低、中、高组、阳性组6组;各组造模同时予以相应干预方法,连续10 d,并于动情期按照2∶1雌雄合笼,次日晨检发现阴栓脱落或阴道涂片发现阴栓记为1.0 dpc,于6.0 dpc麻醉处死剖出子宫组织;记录每组子宫内膜、胞饮突形态并评分,观察子宫内膜上胰岛素样生长因子结合蛋白1(insulin-like growth factor-binding protein-1,IGFBP-1)、血管内皮生长因子(Vascular Endothelial Growth Factor,VEGF)蛋白分布表达和同源盒基因A10(HomeoboxA10,HOXA10)mRNA表达,测定子宫组织匀浆中炎症介质LXA4、合成酶5/12/15-脂氧合酶(Lipoxygenase,LOX)、受体甲酰肽受体2(Formyl Peptide Receptor-2,FPR2)和IGFBP-1、VEGF的蛋白含量。结果与空白组相比,模型组子宫内膜被覆上皮菲薄、腺体较少,与模型组对比;补肾活血方导法低、中、高剂量组、阳性组可下调肾虚血瘀PER模型大鼠种植窗期5-LOX、12-LOX、LXA4及FPR2的表达(P<0.05),提高了子宫内膜容受性标记物IGFBP-1、VEGF蛋白和HOXA10 mRNA表达。结论补肾活血方导法通过调控大鼠种植窗期子宫5/12-LOX/LXA4/FPR2信号通路纠正炎性微环境的平衡,进而改善子宫内膜容受性,促进胚-膜交互提高种植及妊娠成功率。

活血补肾方联合左氧氟沙星治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎效果分析

目的分析活血补肾方联合左氧氟沙星治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎效果。方法选取医院2017年4月—2019年5月收治的湿热瘀结型慢性盆腔炎患者108例,采用随机数字法分为两组。对照组给予左氧氟沙星治疗,观察组给予活血补肾方联合左氧氟沙星治疗,分析两组患者治疗后的临床效果。结果两组治疗前中医证候积分组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后主证(小腹胀痛、腰骶胀痛、带下量多)积分、次证(神疲乏力、口腻或纳呆、小便黄、大便干燥)积分低于对照组(P<0.05)。两组治疗前C反应蛋白(CRP)、血红素氧和酶-1(HO-1)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后CRP、HO-1、GM-CSF水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗前盆腔炎性包块直径组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后盆腔炎性包块直径(1.24±0.42)cm低于对照组(P<0.05)。观察组不良反应率(7.41%,4/54)与对照组(5.56%,3/54)比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。结论活血补肾方联合左氧氟沙星治疗湿热瘀结型慢性盆腔炎可调节CRP、HO-1、GM-CSF的表达水平,缩小盆腔炎性包块直径,改善症状积分,且不增加不良反应。

补肾填精方对阴虚火旺型围绝经期综合征患者血清雌二醇(E2)、促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)水平的影响

目的探讨补肾填精方对阴虚火旺型围绝经期综合征(PMS)患者促卵泡激素(FSH)、促黄体生成素(LH)、血清雌二醇(E;)水平的影响。方法纳入2019年10月—2020年10月医院妇科门诊收治的57例PMS患者,按照就诊先后顺序,随机分为两组,即治疗组29例和对照组28例。其中治疗组给予补肾填精方治疗,对照组给予坤泰胶囊治疗。12周为一个疗程。治疗前后分别测定受试者一般情况;中医证候积分;Kupperman评分;性激素水平、血脂水平。结果治疗后,治疗组中医证候积分低于对照组(P<0.05);治疗后治疗组Kupperman低于对照组(P<0.05);治疗后,两组患者治疗后FSH及LH水平较治疗前显著下降,且治疗组较对照组下降明显(P<0.05);治疗后,治疗组与对照组HDL水平较治疗前均上升,且治疗组较对照组上升明显(P<0.05);治疗后,治疗组和对照组TC、TG、LDL水平较治疗前均有下降,且治疗组较对照组下降明显(P<0.05)。结论补肾填精方能良好改善血清内性激素及血脂水平,且安全性较高,具有较好的临床应用价值。

基于STAT3通路探讨补肾活血方抑制骨细胞凋亡

目的探讨补肾活血方通过信号转导与转录激活子3(STAT3)通路抑制骨细胞的凋亡对骨质疏松的治疗作用。方法选取SPF级健康雌性C57BL/6小鼠75只,随机分为正常对照组11只及造模组64只。造模组采用去势法建立骨质疏松症模型,正常对照组仅暴露双侧卵巢而不切除。将造模成功的小鼠随机分为模型组、补肾活血方低、中、高剂量组及阳性对照组,各12只。模型组和正常对照组分别灌胃给予蒸馏水5 mL·kg^(-1),1次/d;补肾活血方低、中、高剂量组分别灌胃给予1.79、3.57、7.14 g·mL^(-1)补肾活血方药液5 mL·kg^(-1),1次/d;阳性对照组灌胃给予0.14 mg·mL^(-1)尼尔雌醇混悬液5 mL·kg^(-1),1次/d。各组小鼠均治疗12周。检测比较各组骨形态参数,骨细胞凋亡指数(AI),以及骨组织B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、Janus激酶2(JAK2)、STAT3表达水平。结果与模型组比较,各组小鼠骨体积分数(BV/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数量(Tb.N)及骨密度(BMD)值较高,骨组织Bcl-2蛋白表达水平较高,且补肾活血方低剂量组<补肾活血方中剂量组<补肾活血方高剂量组和阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,各组小鼠骨组织AI较低,骨组织Bax蛋白表达水平较低,骨组织JAK2、STAT3表达水平较低,且补肾活血方低剂量组>补肾活血方中剂量组>补肾活血方高剂量组和阳性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论补肾活血方能剂量依赖性的增加骨质疏松小鼠骨密度,增加骨小梁厚度和数量,抑制骨细胞凋亡,其作用可能与抑制STAT3信号通路,调节凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达有关。

补肾益气止痛安胎方辅助黄体酮注射液治疗先兆性流产对PAPP-A、血β-HCG的变化研究

目的研究补肾益气止痛安胎方辅助黄体酮注射液治疗先兆性流产对患者妊娠相关蛋白A(PAPP-A)、血人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的变化影响。方法选取医院2016年12月—2018年10月收治的先兆性流产患者98例,采用随机数字法分为两组。对照组给予黄体酮注射液治疗,观察组给予补肾益气止痛安胎方辅助黄体酮注射液治疗,分析两组患者治疗后的临床效果。结果观察组总有效率(91.84%,45/49)高于对照组(73.47%,30/49),差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组阴道出血停止时间(8.05±1.84)d、腹痛停止时间(7.54±2.01)d及腰痛停止时间(7.26±2.01)d短于对照组(P<0.05)。两组治疗前PAPP-A、血β-HCG、孕酮(P)、血红素氧合酶-1(HO-1)、白细胞介素-2(IL-2)、白细胞介素-10(IL-10)水平组间比较,差异不具有统计学意义(P>0.05)。观察组治疗后PAPP-A、血β-HCG、P、HO-1、IL-10水平高于对照组,IL-2水平低于对照组(P<0.05)。结论补肾益气止痛安胎方辅助黄体酮注射液治疗先兆性流产可对调高PAPP-A、血β-HCG、P、HO-1有促进作用,减轻炎症反应,缩短症状停止时间。

补肾调肝方加减治疗肾虚肝郁型不孕疗效及对E_(2)、FSH水平及受孕能力的影响

目的分析补肾调肝方加减治疗肾虚肝郁型不孕对患者雌二醇(E_(2))、促卵泡生成素(FSH)水平及受孕能力的影响。方法收集医院2018年2月—2020年2月收治的肾虚肝郁型不孕患者124例,根据治疗方法不同分为对照组与联合组。对照组给予常规西药治疗,联合组给予常规西药联合补肾调肝方加减治疗,分析两组患者治疗后的临床疗效。结果联合组和对照组的总有效率分别为91.94%(57/62)和79.03%(49/62)(P<0.05)。联合组优势卵泡数量[(1.36±1.46)个]小于对照组,卵泡直径[(15.02±1.21)mm]大于对照组,排卵率(83.87%,52/62)、妊娠率(54.84%)高于对照组,流产率(3.22%,2/62)低于对照组。两组治疗前血清激素水平组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合组治疗后E_(2)、孕酮(P)水平高于对照组,FSH水平低于对照组(P<0.05)。两组治疗前子宫动脉搏动指数(PI)、阻力指数(RI)水平组间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。联合组治疗后子宫动脉PI、RI水平低于对照组(P<0.05)。结论补肾调肝方加减治疗肾虚肝郁型不孕疗效显著,可改善血清激素的表达水平和子宫动脉血流,提高妊娠率。

补肾养血方防治气态甲醛慢性染毒小鼠卵巢损伤的研究

目的:研究气态甲醛慢性染毒对小鼠卵巢功能的影响,以及补肾养血方对其卵巢毒性的防治作用。方法:将30只性成熟SPF级雌性昆明小鼠随机分为对照组、染毒组和治疗组,对照组给予吸入经过滤的新鲜空气,染毒组和治疗组采用气态甲醛动态吸入式染毒,6 h/d,连续14 d,同时治疗组给予补肾养血方灌胃,对照组和染毒组给予等量生理盐水灌胃。观察小鼠一般状态及动情周期。实验结束后处死小鼠,测定小鼠血清性激素水平,计算卵巢脏器系数,观察卵巢病理形态学变化,并计数各级卵泡数,检测卵巢局部相关基因的表达水平。结果:染毒组小鼠一般状态差,动情周期延长,小鼠血清E2水平降低,FSH、LH水平升高,卵巢脏器系数降低,卵巢内生长卵泡减少,闭锁卵泡增多;卵巢Foxl2、FSHR mRNA表达水平升高,Esr2、Pgr mRNA表达水平降低,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组小鼠一般状态好转,动情周期缩短;血清E2水平升高,FSH水平降低,卵巢脏器系数升高,卵巢内生长卵泡增加,闭锁卵泡减少,卵巢Foxl2、FSHR mRNA表达降低,Esr2 mRNA表达上升,与染毒组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Pgr mRNA表达有上升趋势,但与染毒组比较差异无统计学意义(P>0.0)。结论:气态甲醛慢性染毒可影响小鼠卵巢功能,补肾养血方可防治甲醛对卵巢的损害作用,改善卵巢功能。

补肾活血方促进骨髓间充质干细胞的成骨及其防治大鼠骨质疏松症机制研究

目的 研究表明微核糖核酸(microRNA,MiRNA)和Kruppel样因子10(Kruppel-like factor10, KLF10)调控骨质疏松症的进程。研究旨在探讨miR-26b/KLF10信号调控骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells, BMSCs)分化的机制。方法 流失鉴定分离的大鼠BMSCs,不同剂量的补肾活血方处理BMSCs,检测其^([1-2])增殖能力,碱性磷酸酶活性和茜素红染色检测BMSCs的成骨分化潜能。qPCR检测不同剂量的补肾活血方处理BMSCs后,miR-26b和KLF10的表达水平。mirtarBase数据库检测KLF10 mRNA的3’非翻译区(untranslated regions, 3'UTR)上是否有miR-26b的结合位点,双荧光素酶报告实验检测miR-26b对KLF10启动子活性的影响。qPCR检测miR-26b/KLF10信号对BMSCs增殖和成骨分化标志物的表达的影响。Western blot检查Wnt/β-catenin信号是否被激活。结果 流式分析显示分离的原代细胞大部分是BMSCs。补肾活血方显著促进骨髓间充质干细胞的增殖,补肾活血方显著提高了BMSCs中碱性磷酸酶的水平和成骨分化的潜能。补肾活血方促进BMSCs中miR-26b和KLF10的表达。在KLF10 mRNA的3’UTR上有miR-26b的结合位点。在BMSCs中,miR-26b抑制KLF10的3’UTR荧光素酶活性。此外,miR-26b也抑制了KLF10的表达水平。CCK8(Cell Counting Kit-8)显示KLF10促进BMSCs增殖,qPCR显示miR-26b显著抑制成骨分化标志物的表达。而KLF10能够逆转miR-26b的抑制效应,提示miR-26b/KLF10信号介导了补肾活血方在BMSCs增殖和成骨分化中的效应,且补肾活血方通过激活Wnt/β-Catenin信号通路促进成骨。结论 补肾活血方促进BMSCs的成骨由miR-26b/KLF10/Wnt/β-Catenin信号轴调控。

补肾活血方有效组分及部分化合物的体外抗炎活性研究

目的:观察补肾活血方水提取部位、醇提取部位、总多糖部位以及大黄酸、大黄酚等有效组分与化合物对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)及一氧化氮(NO)等炎症介质释放浓度的影响作用,探讨复方治疗骨关节炎的初步机制。方法:选取补肾活血方不同提取分离部位,以及复方水提液中存在的具有潜在治疗骨关节炎活性的大黄酸、大黄酚化合物,采用体外脂多糖(LPS)刺激的RAW264.74小鼠巨噬细胞为模型,利用酶联免疫法(ELISA)测定试药对模型细胞释放TNF-α、IL-6及NO的抑制作用。结果:复方水提取部位与醇提取部位在100μg/ml,以及大黄酚在20μg/ml和100μg/ml对TNF-α的释放具有显著的抑制;复方醇提取部位在100μg/ml,大黄酸在20μg/ml,以及大黄酚在20μg/ml和100μg/ml对IL-6水平具有显著的抑制;复方水提取部位在100μg/ml、醇提取部位在20μg/ml和100μg/ml、大黄酸在20μg/ml,以及大黄酚在20μg/ml和100μg/ml对NO的释放具有显著抑制。结论:补肾活血方的治疗骨关节炎活性可能是通过抑制炎症介质释放,降低TNF-α、IL-6、NO等含量发挥作用,这对验证复方药效活性,探究效应物质基础具有重要意义。

补肾活血方对慢性心力衰竭大鼠心功能及肾组织水通道蛋白2的影响

目的探讨补肾活血方治疗慢性心力衰竭的可能作用机制。方法 60只SD大鼠随机选出15只为假手术组,其余45只采用冠状动脉结扎及术后给予减食和力竭式游泳建立慢性心力衰竭大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、西药组、中药组。假手术组和模型组大鼠每日给予蒸馏水灌胃2次,每次3 ml;西药组给予卡托普利片12. 5 mg/(kg·d)灌胃;中药组给予补肾活血方9. 2 g/(kg·d)灌胃,持续给药4周。实验期间观察各组大鼠皮毛、活动、体重、喘鸣音等一般情况,心脏彩色超声检测大鼠舒张末期左心室内径(LVEDD)、收缩末期左心室内径(LVESD),并计算左心室射血分数(EF)及左心室短轴缩短分数(FS),测定大鼠血清脑利钠肽(BNP)水平和大鼠肾脏组织中水通道蛋白2 (AQP2)表达。结果模型组大鼠毛色晦暗,甚至脱毛,活动性差,体重减轻,部分大鼠有咳嗽、喘促症状;而西药组、中药组大鼠各症状均有所改善。与假手术组比较,模型组大鼠LVEDD、LVESD升高,EF、FS降低,血清BNP水平和肾组织AQP2表达升高(P <0. 05)。与模型组比较,中药组及西药组大鼠LVEDD、LVESD降低,EF、FS升高,血清BNP水平及肾组织AQP2表达降低(P <0. 05);西药组与中药组各指标比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。结论补肾活血方可能通过降低慢性心力衰竭大鼠血清BNP,下调肾组织AQP2表达,从而改善心功能。