补肾助孕方对复发性流产患者子宫内膜容受性及妊娠结局影响的临床研究

目的观察补肾助孕方对复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者子宫内膜容受性及妊娠结局的影响。方法纳入2019年10月—2021年3月就诊于广安门医院妇科的符合复发性流产诊断的患者共100例,按照随机数字表法分成对照组50例和治疗组50例。观测指标包括治疗前后中医证候评分、月经情况评分、子宫内膜容受性相关指标和妊娠结局等。结果对照组有3例患者失访,治疗组有2例患者治疗期间未按规定试验方案服药剔除,最终95例患者完成本次研究,其中对照组47例,治疗组48例。治疗3个月经周期后,治疗组总有效率、月经情况改善、临床妊娠率均优于对照组,中医证候评分降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后治疗组的子宫内膜厚度、血流分布和Salle评分均得到明显优化,血流阻力指数(resistance index,RI)显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),在血流灌注指数(perfusion index,PI)方面差异无统计学意义(P>0.05)。随访后发现治疗组临床妊娠率显著升高,妊娠失败例数低于对照组,具差异有统计学意义(P<0.05)。两组患者不良反应发生率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论研究表明补肾助孕方可改善肾虚中医证候,提高RSA患者临床妊娠率。补肾助孕方具有明显促进子宫内膜生长、增加子宫内膜血流灌注、降低RI和PI的作用,验证了补肾助孕方孕前干预可提高子宫内膜容受性治疗RSA。

疏肝补肾毓麟汤通过Keap1/Nrf2/GPX4通路抑制睾丸细胞铁死亡改善肝郁肾虚型少弱精子症小鼠的精子质量

目的探讨疏肝补肾毓麟汤改善肝郁肾虚型少弱精子症小鼠生精功能和精子质量的作用及其可能机制。方法60只雄性KM小鼠,随机分为空白组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高、中、低剂量组和司他丁-1(Ferrostatin-1,Fer-1)组(Fer-1是铁死亡抑制剂)。除空白组外,其余组以1.25 g·kg^(-1)腺嘌呤灌胃(Intragastrical administration,ig.)+慢性束缚刺激构建肝郁肾虚型少弱精子症小鼠模型。给予相应药物干预后:精密天平称取小鼠体质量、睾丸质量、附睾质量计算睾丸指数、附睾指数;苏木素-伊红(Hematoxylin-eosin staining,HE)染色观察睾丸组织病理变化并对睾丸生精功能进行评分;全自动精子分析仪检测精子密度和活动率;苯胺蓝染色法观察精子成熟度;布鲁斯蓝染色法观察睾丸组织铁沉积;免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)检测睾丸组织谷胱甘肽过氧化物酶4(Glutathione peroxidase 4,GPX4)、溶质载体家族7成员11(Recombinant Solute Carrier Family 7 Member 11,SLC7A11)蛋白表达;生化法检测睾丸组织超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、过氧化氢酶(Catalase,CAT)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量;蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)检测睾丸组织Kelch-样ECH相关蛋白1(Kelch-like ECH-associated protein-1,Keap1)、核因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)、GPX4、SLC7A11蛋白表达。结果与空白组比较,模型组小鼠睾丸指数、附睾指数、睾丸生精功能、精子密度及活动率、精子成熟度均显著下降(P<0.05,P<0.01);经疏肝补肾毓麟汤及Fer-1干预后,上述指标均有显著改善(P<0.05,P<0.01),且睾丸组织铁沉积显著降低,Keap1表达显著降低,Nrf2、SLC7A11、GPX4表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。结论疏肝补肾毓麟汤能明显改善肝郁肾虚型少弱精子症,其机制可能与调控Keap1/Nrf2/GPX4信号通路抑制睾丸细胞铁死亡有关。

疏肝补肾毓麟汤通过PINK1/Parkin通路调控自噬流提高精子活力的研究

目的 明确疏肝补肾毓麟汤畅通自噬流,通过PTEN诱导假定激酶1(PTEN-induced putative kinase 1,PINK1)/帕金蛋白(Parkin)通路,调节线粒体功能,提高精子活力的作用机制。方法 通过随机数字表法将SD大鼠分为正常组、模型组、疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、五子衍宗丸对照组。采用腺嘌呤(0.05 g·kg^(-1))灌胃14 d,复制少弱精症大鼠模型。正常组与模型组给予等容0.9%氯化钠溶液,疏肝补肾毓麟汤高、低剂量组给药32.4 g/(kg·d)、8.1 g/(kg·d),五子衍宗丸对照组给药2.6 g/(kg·d)。全自动精子分析仪检测精子活力,透射电镜观察睾丸组织中线粒体自噬的超微结构变化、JC-1线粒体膜电位检测试剂盒与流式细胞仪检测线粒体膜电位水平变化、免疫荧光标记线粒体外膜易位酶20(Translocase of the outer membrane ofmitochondrion 20,TOMM20)与微管相关蛋白1轻链3II(Microtubule-associated protein 1 light chain 3II,LC3II)的共定位、PCR与Western Blot检测睾丸组织PINK1、Parkin、选择性自噬接头蛋白62(Selective autophagy adaptor protein 62,P62)、微管相关蛋白1A/1B-轻链3(LC3II/I)的表达。结果 与正常组相比,模型组的精子活动力下降(P<0.05),线粒体膜电位比例下降(P<0.05),线粒体超微结构出现核周聚集,嵴受损或丢失,除了碎裂外,还有暗基质,以及外膜不规则,并且受损的线粒体与包括线粒体吞噬体在内的线粒体空泡相关,免疫双染中发现LC3II的存在量明显增多,LC3II与TOMM20的双重标记也增加,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达增加(P<0.05)。与模型组相比,疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组、对照组的精子活动力升高(P<0.05),线粒体膜电位比例增加(P<0.05),超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重标记减少,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P<0.05)。与对照组相比,高剂量组的线粒体膜电位比例增加(P<0.05);疏肝补肾毓麟汤高剂量组、疏肝补肾毓麟汤低剂量组超微结构下正常形态的线粒体比例明显增多,且线粒体溶酶体的数量也减少,免疫双染中发现LC3II的存在量明显减少,LC3II与TOMM20的双重标记减少,自噬相关指标PINK1、Parkin、LC3II/I、P62的基因与蛋白表达减少(P<0.05)。结论 疏肝补肾毓麟汤能改善精子活力低下症模型大鼠的精子活动力,可能是通过提高模型大鼠的线粒体膜电位水平,保护线粒体功能,下调PINK1、Parkin、LC3 II/I、P62的表达,并畅通自噬流,减轻线粒体的过度自噬来发挥作用。

补肾止颤方联合针刺治疗帕金森病睡眠障碍的疗效及对血谷氨酸、胱抑素C水平的影响

目的分析补肾止颤方联合针刺在治疗帕金森病(Parkinson’s disease,PD)睡眠障碍中的疗效及其对血谷氨酸(glutamate,Glu)、胱抑素C(cystatin C,CysC)水平的影响。方法随机选取医院2019年6月—2021年6月收治的124例肝肾阴虚型PD合并睡眠障碍患者,随机数字表法将其均分为观察组与对照组,对照组接受常规西医治疗,观察组在此基础上联合应用补肾止颤方与针刺治疗,观察两组治疗后睡眠质量[帕金森病睡眠量表(Parkinson’s disease sleep scale,PDSS)、匹兹堡睡眠质量指数量表(Pittsburgh sleep qulality,PQSI)]、生活质量[39项帕金森生存质量量表(the 39-item Parkinson’s disease questionnaire,PDQ-39)]、中医临床疗效、治疗前后血浆Glu、血清CysC水平,日平均多巴丝肼用量以及不良反应。结果治疗后,两组PDSS量表得分均较其同组治疗前上升,PQSI量表得分均较其同组治疗前下降,差异具有统计学意义(P<0.05),且观察组治疗后PDSS量表得分高于对照组,PQSI量表得分低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。两组治疗后,PDQ-39量表中运动能力、日常生活、躯体不适、社交、社会支持、耻辱感、情感、认知等维度得分及量表总得分均较其治疗前下降,差异具有统计学意义(P<0.05),且观察组治疗后PDQ-39量表各维度得分及总得分均低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。观察组睡眠障碍中医临床治疗有效率高于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组血浆Glu水平均较同组治疗前上升,血清CysC水平均较同组治疗前下降,差异具有统计学意义(P<0.05),且观察组治疗后血浆Glu水平高于对照组,血清CysC水平低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。治疗后,对照组多巴丝肼日平均用量与治疗前比较,差异无统计学意义(P>0.05),观察组多巴丝肼日平均用量较同组治疗前下降,差异具有统计学意义(P<0.05),且明显低于对照组治疗后药物平均用量(P<0.05)。观察组治疗中恶心欲吐发生率低于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05),两组流涎、便秘发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05),此外,观察组针刺治疗后,有5例患者出现针刺部位过敏现象,经热敷等简单处理后均好转。结论在常规西药治疗基础上联合补肾止颤方与针刺能有效改善PD合并睡眠障碍患者相关临床症状,提高其生活质量,且治疗安全性高,值得临床推广。

基于Wnt通路研究补肾活血复方对心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化的影响

目的探讨补肾活血复方能否通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。方法将45只SD大鼠随机分为4组,即假手术组、模型组、补肾活血复方组及赖诺普利组,按照实验分组采用结扎左冠状动脉前降支配合力竭式游泳造成慢性心力衰竭模型,在结扎冠状动脉前后进行超声心电图检测,判断手术结扎成功后进行力竭式游泳,并行超声心动图检查,当左室射血分数(LVEF)<45%为造模成功。模型建立完成后采用补肾活血复方或赖诺普利或0.9%氯化钠溶液持续灌胃4周。治疗结束后,称取体质量(BM)、全心质量(HM)和左心室质量(LVM),计算全心质量指数(HWI)和左心室质量指数(LVMI),判断心肌肥厚程度;ELISA检测大鼠中脑钠肽(BNP)、N末端B型脑钠肽前体(NT-proBNP)、心肌肌钙蛋白(cTnI)、Wnt家族成员3a(Wnt3a)含量;马松染色检测心肌纤维化情况,并测定心肌间质胶原容积分数(CVF)、心肌细胞横截面积(CSA)、血管周围胶原面积(PVCA)变化;Western blot检测心肌组织中Ⅰ型胶原(Col I)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、蓬乱蛋白1(Dvl1)、磷酸化糖原合成酶激酶-3β(p-GSK3β)、β-连环蛋白(β-catenin)表达;Real-time PCR检测心肌组织中基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)mRNA表达。结果与结扎前比,结扎后大鼠心电图显示T波倒置或低平,ST段较术前明显抬高(绝对值≥0.1 mV)。与假手术组相比,模型组、赖诺普利组及补肾活血复方组的LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均上调,模型组与赖诺普利组HWI升高,差异有统计学意义(P<0.05),补肾活血复方组HWI升高,差异无统计学意义。与模型组相比,赖诺普利组及补肾活血复方组的HWI、LVMI,血清中BNP、NT-proBNP、cTnI、Wnt3a、CSA、CVF及PVCA,心肌组织中Col I、ColⅢ、α-SMA、Dvl1、p-GSK3β、β-catenin蛋白表达及MMP2、MMP9 mRNA表达均降低,差异有统计学意义(P<0.01),赖诺普利组与补肾活血复方组比差异无统计学意义。马松染色检测结果显示,假手术组心肌细胞呈红色,结构完整,心肌纤维排列完整,心肌间质可见少量胶原蓝染;模型组心肌细胞数量变少,心肌间质排列松散且无规则,出现大量胶原纤维的增生,呈波状;与模型组相比,赖诺普利及补肾活血复方组心肌细胞排列相对整齐,心肌间质内胶原纤维增生减少。结论补肾活血复方通过抑制Wnt通路改善心力衰竭大鼠心肌肥厚及纤维化。

补肾止颤方调控miR-296-5p/GSDMD通路抑制帕金森病大鼠神经元焦亡机制研究

目的从焦亡角度探讨补肾止颤方保护帕金森病(Parkinson's disease,PD)大鼠中脑黑质区神经元的作用以及可能机制。方法将60只雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,补肾止颤方低(15 g·kg-1)、中(30 g·kg-1)、高(60 g·kg-1)剂量组,美多芭组(0.2 g·kg-1)。除正常组外,余各组予背部皮下注射蛋白酶体抑制因子I(proteasome inhibitors I,PSI)溶液构建慢性PD模型。模型组与正常组予等体积生理盐水灌胃,余各组予对应药物剂量灌胃,连续干预3周。采用行为学观察爬杆实验评估各组大鼠行为学改变,予透射电镜观察大鼠中脑黑质区神经元细胞结构变化;实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative PCR,RT-PCR)检测大鼠中脑黑质区miR-296-5P及Gasdermin D(GSDMD)蛋白、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)的mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)蛋白表达;双荧光素酶报告基因技术测定miR-296-5p与GSDMD上的靶向调控作用。结果与正常组比较,余各组大鼠出现自主活动减少、全身不自主震颤、行走迟缓等症状,悬挂实验评分下降(P<0.05);电镜下可见神经元细胞呈不同程度的水肿,部分细胞膜结构模糊,细胞核呈不规则形,细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA表达明显升高(P<0.05),TH及miR-296-5p表达水平明显下降(P<0.05)。与模型组比较,补肾止颤方低、中、高剂量组大鼠全身不自主震颤、行走迟缓等症状改善,悬挂实验评分升高(P<0.05),细胞水肿减轻,细胞中α-syn、Caspase-1、IL-1β、GSDMD mRNA表达呈不同程度下降(P<0.05),TH及miR-296-5p表达水平升高(P<0.05),以补肾止颤方高剂量组改变显著;荧光素酶报告显示miR-296-5p可靶向调控GSDMD的表达。结论补肾止颤方能改善PD大鼠的运动协调能力及受损的神经元细胞,其机制可能与调控miR-296-5p/GSDMD通路,下调Caspase-1蛋白及炎性因子水平,减轻神经炎症反应,从而抑制PD大鼠神经元细胞焦亡有关。

补肾止颤方对帕金森病大鼠Caspase-4/11表达的影响

目的探讨补肾止颤方对帕金森病(Parkinson′s disease,PD)大鼠Caspase-4/11表达的影响。方法采用蛋白酶抑制因子注射法建立慢性PD大鼠模型,将造模成功的大鼠分为模型组、多巴丝肼组(2 g·kg^(-1)·d^(-1)),补肾止颤方低、中、高剂量组(15、30、60 g·kg^(-1)·d^(-1)),假手术组采用等量的70%乙醇溶液注射。假手术组、模型组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)生理盐水;其余各组给予相应药物;连续灌胃3周。观察大鼠的一般情况,于灌药前1周及灌药后第3周进行悬挂实验并评分。采用HE染色、透射电镜观察中脑黑质区神经元病理改变,qPCR技术检测中脑黑质区α-syn、TH、IL-1β、GSDMD、Caspase-4/11的mRNA表达变化。结果补肾止颤方能增加悬挂实验时间及评分,减轻神经元病理损伤,明显抑制α-syn、IL-1β、GSDMD、Caspase-4/11表达,增加TH表达。结论补肾止颤方可有效改善PD模型大鼠的行为障碍、减轻神经元病理损伤,可能通过下调Caspase-4/11,抑制GSDMD蛋白的表达,减少α-syn、IL-1β分泌,从而减轻细胞焦亡,达到神经元保护作用。

补肾健脾活络方联合针刺治疗肾炎蛋白尿临床研究

目的 观察总结补肾健脾活络方联合针刺治疗对慢性肾炎的临床疗效。方法 将60例患者随机分为治疗组、对照组,分别为30例。治疗组方案为西医基础治疗+补肾健脾活络方联合针刺;对照组方案为西医基础治疗+针刺治疗。结果 治疗组总有效率分别为86.7%,高于对照组、60.0%(P<0.05)。两组组内比较尿转铁蛋白测定(尿)、视黄醇结合蛋白(尿)、免疫球蛋白测定(尿)、α-1微球蛋白(尿)、β-2微球蛋白(尿)、胱抑素-C(尿)、尿24 h蛋白定量、尿微量白蛋白、尿红细胞数有统计学差异(P<0.05),两组间比较经统计学处理有差异。肾功能方面:两组组内血肌酐、尿素氮水平比较有统计学意义(P<0.05),两组组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。血白蛋白方面:治疗组血清白蛋白较疗前升高(P<0.05);两组间有统计学意义(P<0.05)。结论 提示补肾健脾活络方联合针刺治疗可有效降低尿蛋白、尿红细胞,改善患者肾功能,同时有升高血清白蛋白的作用。

补肾活血方对肾虚血瘀型不明原因月经过少患者血清中VEGF、TGF-β1的影响

目的补肾活血方治疗肾虚血瘀型不明原因月经过少患者临床疗效并探讨其对患者血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的影响。方法对收集2019年6月—2021年6月南京市中西医结合医院门诊诊治肾虚血瘀型不明原因月经过少患者60例,随机分为观察组和对照组。对照组给予戊酸雌二醇联合黄体酮胶囊序贯治疗,观察组在此基础上给予补肾活血汤口服,疗程为3个月经周期。同时收集月经正常的30例妇女作为正常组,观察两组治疗前后分泌晚期血清中VEGF、TGF-β1及子宫内膜厚度、月经失血图积分、中医证候积分的变化,并与正常组比较。结果(1)观察组脱落2例,剔除1例,对照组脱落3例,剔除1例,最终观察组共27例,对照组26例。(2)观察组、对照组分泌晚期血清中VEGF、TGF-β1均低于正常组(P<0.05);治疗后两组VEGF、TGF-β1较前均明显升高(P<0.05);观察组上升趋势明显,优于对照组(P<0.05),且与正常组无明显差异(P>0.05)。子宫内膜厚度比较,治疗前观察组与对照组内膜厚度均明显低于正常组(P<0.05);治疗后,两组子宫内膜厚度较前均明显增厚(P<0.05),但观察组优于对照组(P<0.05)。对于中医证候积分的改善及月经失血图评分的评估,观察组优于对照组(P<0.05)。结论不明原因月经过少的发病机制可能与分泌晚期血清中的VEGF、TGF-β1水平下降有关,补肾活血方可通过提高分泌晚期血清中VEGF及TGF-β1水平,使得子宫内膜增厚、增加月经量,明显改善患者的中医证候,临床疗效显著,优于单用雌孕激素序贯治疗。

补肾健脾活血方调节尾部悬吊大鼠肌蛋白合成与分解的机制研究

目的探究补肾健脾活血方对废用性肌萎缩的影响及过程中肌蛋白合成与分解机制。方法选取40只2月龄雌性大鼠,分为5组:空白组(A)、造模组(B)、低药量组(C)、中药量组(D)、高药量组(E),每组8只。除A组自由活动外,其余4组按照尾部悬吊法进行造模。C、D、E组给予不同剂量补肾健脾活血汤干预,A、B组给予等量蒸馏水。给药28 d后处死大鼠,称重比目鱼肌,测量湿重/体质量比。采用HE染色法对比目鱼肌肌肉组织形态与细胞核聚集状态进行病理形态学观察。ELISA检测补肾健脾活血方对血清中肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)的干预情况。Western blot检测补肾健脾活血方对比目鱼肌肌肉组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激(AKT)、SMAD蛋白3(Smad3)、叉头蛋白转录因子(FOXO1)、肌萎缩F-box蛋白(MAFbx)、肌环指蛋白-1(MuRF1)蛋白表达的干预情况。结果形态学观察显示,同A组相比,B组大鼠比目鱼肌湿重/体质量比值显著降低(P<0.01),肌纤维横截面明显减少,肌纤维密度明显增加,肌纤维间筋膜横截面明显增加,肌束间筋膜横截面明显减少,细胞核高度聚集;同B组比较,C、D、E组肌肉湿重/体质量比值有所上升(P<0.05),肌纤维横截面明显增加,肌纤维密度明显降低,肌束间筋膜横截面显著增加,核聚集程度降低;同D组比较,C组和E组肌肉湿重/体质量比值无明显差异(P>0.05),但伴随药物浓度的增加,C、D、E组肌肉湿重/体质量比值呈现逐渐增加趋势,且肌纤维横截面逐渐增大,肌纤维密度逐渐减小,肌束间筋膜横截面增加逐渐显著,核聚集减少逐渐显著。ELISA检测发现,同A组相比,B组大鼠血清中的MSTN水平显著升高(P<0.01);同B组相比,C组MSTN水平下降(P<0.05),D、E组MSTN水平明显下降(P<0.01);同D组比较,C、E组MSTN水平没有显著性差异(P>0.05)。Western blot检测结果显示,同A组相比,B组大鼠体内Smad3、Akt蛋白表达量减少(P<0.05),FOXO1、MuRF1、MAFbx表达增加(P<0.05);同B组比较,C、D、E组AKT表达均有所增加(P<0.05),FOXO1、MuRF1、MAFbx表达均减少(P<0.05),但C组Smad3表达无明显差异(P>0.05),D组和E组Smad3表达明显增加(P<0.01);同D组比较,C组Smad3、AKT、MuRF1表达减少(P<0.01),FOXO1与MAFbx表达参数差异无统计学意义(P>0.05),E组Smad3、MuRF1表达明显增加(P<0.01),AKT、FOXO1、MAFbx表达参数差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾健脾活血方可以调控肌蛋白合成与分解,对废用性肌萎缩起到防治作用,其机制可能与调节TGF-β/myostatin信号通路以及泛素蛋白酶体途径相关。

补肾疏肝方联合克罗米芬治疗黄体功能不全不孕(肝郁肾虚)随机平行对照研究

[目的]观察补肾疏肝方联合克罗米芬治疗黄体功能不全不孕(肝郁肾虚)疗效。[方法]使用随机平行对照方法,将80例门诊患者按随机数字表法随机分为两组。对照组40例克罗米芬,50mg/次,1次/d,月经第5d开始服用,持续5d。治疗组40例补肾疏肝方(柴胡、枸杞子、地黄熟各12g,淫羊藿、菟丝子各15g,白芍、当归、车前子、泽泻、茯苓、牡丹皮、山萸肉、牛膝各10g,甘草炙6g),水煎400mL,2次/d;克罗米芬治疗同对照组。连续治疗3个月为1疗程。观测临床表现、催乳激素、尿促卵泡素、促黄体生成素、睾酮、孕酮、雌二醇、不良反应。治疗1疗程(4周),判定疗效。随访1年,观测妊娠率。[结果]治疗组显效23例,有效15例,无效3例,总有效率92.50%;对照组显效11例,有效12例,无效17例,总有效率57.50%;治疗组疗效优于对照组(P<0.05)。PRL、FSH、LH、T、P、E2两组均有改善(P<0.05,P<0.01),治疗组改善优于对照组(P<0.01)。随访1年,治疗组妊娠率77.50%优于对照组52.50%(P<0.05)。[结论]补肾疏肝方联合克罗米芬治疗黄体功能不全不孕(肝郁肾虚),疗效满意,无严重不良反应,值得推广。

补肾化瘀生新方优化缺血缺氧微环境对间充质干细胞旁分泌效应及分化率的影响

目的观察补肾化瘀生新方优化缺血缺氧微环境对间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)旁分泌效应调控作用,探讨其对MSCs增值分化能力的影响。方法采用无血清的1640培养基和低氧细胞工作站培养24 h建立缺血缺氧微环境细胞体外模型。随机分为:正常组:以完全培养基培养(L-DMEM+10%FBS);对照组:加入生理盐水血清培养基,放入低氧细胞工作站培养24 h;模型组:以完全培养基培养(L-DMEM+10%FBS),低氧细胞工作站培养24 h;治疗组:加入含有补肾化瘀生新方含药血清培养基,低氧细胞工作站培养24 h。采用液相色谱-串联质谱技术分析鉴定补肾化瘀生新方大鼠体内吸收入血成分。采用流式细胞仪检测MSCs细胞周期、ELISA法检测VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10和TNF-α含量变化;免疫细胞化学染色检测NF-κBp65的细胞核转位;实时荧光PCR技术检测microRNA-124a-mRNA表达情况;Western blot检测microRNA-124a蛋白表达;免疫荧光技术检测MSCs向内皮细胞、神经元、神经胶质分化情况。结果与正常组比较,模型组S期细胞数增多,G0/G1期明显降低(P<0.05),与模型组比较,治疗组、对照组S期细胞数减少,G0/G1期比例逐渐升高(P<0.05),与对照组相比,治疗组S期细胞数减少,G0/G1期比例逐渐升高(P<0.05)。与正常组比较,模型组VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10降低明显(P<0.05),与模型组比较,治疗组VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10增多明显(P<0.05),与治疗组相比,对照组VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10减少(P<0.05)。随缺血缺氧时间延长VEGF、bFGF、SDF-1、IL-10呈减少动态变化。与正常组比较,模型组NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达增多明显(P<0.05),与模型组比较,治疗组NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达降低明显(P<0.05),与治疗组相比,对照组NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达增多(P<0.05)。随缺血缺氧时间延长NF-κBp65、TNF-α、microRNA-124a-mRNA和蛋白表达呈升高动态变化。与正常组比较,模型组GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数增多明显(P<0.05),与模型组比较,治疗组GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数增多明显(P<0.05),与治疗组相比,对照组GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数降低明显(P<0.05)。随缺血缺氧时间延长GFAP、Ⅲβ-Tubulin、VWF阳性细胞数呈升高动态变化。补肾化瘀生新方动物含药血清共分析鉴定出阿魏酸、黄芩苷、梓醇、地黄苦苷、甲基异茜草素、大黄素甲醚6个为主要吸收入血成分。结论补肾化瘀生新方通过优化缺血缺氧微环境调控MSCs旁分泌效应可以提高MSCs增殖、分化能力,其体内吸收入血成分可能是参与此过程发挥药效的物质基础。

基于蛋白质组学的补肾化痰方治疗多囊卵巢综合征痰湿证患者血清差异蛋白的研究

目的应用临床及蛋白质组学结合的方法观察补肾化痰方治疗多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)痰湿证的疗效。方法以鹿特丹诊断标准纳入PCOS痰湿证患者30例,应用补肾化痰方治疗3个月,采集治疗前后临床及血清样本,进行性激素、糖脂代谢水平检测,并选取12例血清样本采用相对和绝对定量同位素标记(iTRAQ)联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选治疗前后血清差异表达蛋白。结果补肾化痰方治疗后患者空腹胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、甘油三酯(TG)、载脂蛋白B/A1(ApoB/A1)显著下降,SHBG较治疗前升高;经质谱分析PCOS痰湿证组与健康对照组比较,共发现87个差异蛋白,上调蛋白10个,下调蛋白77个。补肾化痰方组与PCOS痰湿证组比较,共发现63个差异蛋白,上调蛋白25个,下调蛋白38个。在PCOS痰湿证组表达上调或下调,经补肾化痰方干预后,明显回调的蛋白有7个。补肾化痰方干预后主要富集的KEGG通路包括补体和凝血级联、Fc-γ-R介导的吞噬作用和Jak-STAT信号通路。结论补肾化痰方治疗PCOS痰湿证的作用机制可能与调控炎症反应、糖脂代谢、抗氧化反应、补体活化调节等病理环节相关。

调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗帕金森病伴抑郁的临床疗效

目的探讨调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗帕金森病伴抑郁患者的临床疗效。方法选取2019年3月—2021年3月医院收治的108例帕金森病伴抑郁患者,依照随机数表法分为观察组和对照组。对照组采用多芭丝肼片配合普拉克索治疗,观察组在对照组的基础上另给予调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗,两组治疗时间均为3个月。比较两组患者帕金森病综合评分表(unified Parkinson’s disease rating scale,UPDRS)评分,汉密尔顿抑郁量表(Hamilton Depression Scale,HAMD)评分,中医症状评分,临床疗效,血清人软骨糖蛋白39(human cartilage glycoprotein-39,YKL-40),脑源性神经营养因子(rain-derived neurotrophic factor,BDNF)水平及不良反应。结果治疗后两组患者UPDRS-Ⅰ、UPDRS-Ⅱ、UPDRS-Ⅲ、UPDRS-Ⅳ评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05);治疗后两组患者HAMD评分和中医症状评分较治疗前均降低(P<0.05),且观察组均低于对照组(P<0.05);观察组总有效率较对照组更高(P<0.05);治疗后两组患者血清YKL-40水平较治疗前均降低(P<0.05),且观察组低于对照组(P<0.05),两组患者血清BDNF水平较治疗前均升高(P<0.05),且观察组高于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论调神针法联合补肾活血疏肝汤治疗帕金森病伴抑郁患者可以改善临床症状,疗效确切,同时可以减轻炎症反应,促进认知功能恢复,安全可靠。

补肾化痰方对去势骨质疏松大鼠脂骨代谢的影响及中枢调控机制研究

目的观察补肾化痰方对去卵巢骨质疏松模型大鼠脂骨代谢的干预作用。方法将6月龄未孕雌性SD大鼠75只随机分为假手术组、模型组、阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组,模型组、阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组大鼠摘除双侧卵巢,假手术组仅切除卵巢周围同等质量的脂肪组织。术后第5周开始给予不同药物灌胃干预8周:补肾化痰组9.4 g/kg、阿托伐他汀组0.92 mg/kg、利维爱组0.23 mg/kg,模型组和假手术组2 mL生理盐水,1次/d。采用Micro-CT检测各组大鼠右侧股骨BMD,采用ELISA法检测各组大鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平,采用蛋白免疫印迹法(Western Blot,WB)、免疫组化检测下丘脑组织瘦素(leptin,LPN)、瘦素受体(leptin receptor,OBR)、神经肽Y(neuropeptide Y,NPY)及其Y2受体的相对表达量。结果与假手术组比较,模型组大鼠BMD明显下降(P<0.05),TG、TC、HDL-C明显升高(P<0.05),LDL-C明显下降(P<0.05),LPN、OBR表达明显下降(P<0.05),NPY、Y2受体表达显著升高(P<0.01)。与模型组比较,阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组BMD明显升高(P<0.05),TG、TC、HDL-C明显下降(P<0.05),LDL-C明显升高(P<0.05)。与模型组比较,补肾化痰组LPN、OBR表达明显升高(P<0.05),阿托伐他汀组和利维爱组LPN、OBR表达显著上升(P<0.01),补肾化痰组LPN、OBR蛋白水平较阿托伐他汀组和利维爱组低(P<0.05)。与模型组比较,阿托伐他汀组、利维爱组、补肾化痰组NPY、Y2蛋白水平显著降低(P<0.01),补肾化痰组和利维爱组NPY、Y2蛋白水平较阿托伐他汀组低(P<0.05),补肾化痰组NPY、Y2蛋白水平较利维爱组低,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾化痰方可通过LPN-下丘脑NPY轴调控去势骨质疏松大鼠的脂骨代谢异常,从而改善骨质疏松。

基于“心脑肾轴”理论探究补肾活血方对慢性心衰大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA表达影响

目的旨在基于“心脑肾轴”理论通过该实验探讨补肾活血方对心肌梗死后慢性心衰(chronic heart failure,CHF)大鼠心肌线粒体能量代谢及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达的影响。方法从80只健康雄性大鼠中,随机选取20只大鼠,作为空白对照组,其余大鼠经结扎法配以节食、力竭式游泳以建立慢性心衰大鼠模型,将造模成功的60只大鼠随机分为中药组、西药组以及模型对照组。中药组(9.2 g·kg^(-1)·d^(-1))、西药组(1.5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),灌胃予以相应药物,空白对照组、模型对照组予以等量的去离子水,对每组大鼠行灌胃处理,每日1次。予以灌胃处理28 d后,通过酶联免疫吸附法(ELISA)检测大鼠外周血中ATP、ADP、NT-proBNP浓度;采用实时荧光定量PCR和免疫蛋白印迹法(Western blot)检测大鼠心肌组织中PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达量。结果与空白对照组比较,心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的ATP浓度明显下降,ADP、NTproBNP浓度显著升高(P<0.01);与模型对照组比较,中药组和西药组大鼠ATP表达升高,ADP、NT-proBNP表达下降(P<0.05)。与空白对照组比较,心衰模型对照组、中药组、西药组大鼠的PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平降低,组内之间的差异均有统计学意义(P<0.05);与模型对照组比较,中药组和西药组大鼠PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平升高,组内之间的差异均有统计学意义(P<0.05)。中药组与西药组的ATP、ADP、NT-proBNP浓度以及PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA和蛋白表达水平无明显差异,组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论补肾活血方可使得心梗后心衰大鼠心肌细胞PGC-1α、NRF-1、mtTFA mRNA的表达上调,促进PGC-1α、NRF-1、mtTFA蛋白含量增加,从而增加线粒体的生成和ATP产能,改进心肌细胞的能量代谢,以此来改善和纠正心衰。

补肾活血化浊方对肝豆状核变性肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证患者血清IL-4、IL-13影响及联合APRI、FIB-4对其诊断价值

目的观察补肾活血化浊方对肝豆状核变性[hepatolenticular degeneration,HLD,又称Wilson病(Wilson disease,WD)]肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证患者血清白细胞介素-4(interleukin 4,IL-4)、白细胞介素-13(interleukin 13,IL-13)的影响,及IL-4、IL-13联合无创性诊断模型APRI评分、FIB-4指数对该类患者的联合诊断价值。方法以106例WD肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证患者(WD组)和53例健康体检者(健康组)作为研究对象,按照随机数字表法将WD组分为观察组和对照组。其中,对照组患者采用常规西药驱铜保肝治疗,观察组患者在对照组的基础上加用自拟方补肾活血化浊方,连续治疗4个疗程。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析IL-4、IL-13联合无创性诊断模型APRI评分、FIB-4指数诊断WD肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证的价值。结果WD组患者IL-13水平、APRI评分及FIB-4指数均显著高于健康组,IL-4水平明显低于健康组;WD组患者治疗4个疗程后,观察组患者IL-13水平、APRI评分及FIB-4指数显著下降(P<0.05),且观察组降低幅度较对照组更为明显(P<0.05),IL-4水平显著升高(P<0.05),且观察组较对照组升高幅度更为显著(P<0.05);IL-4、IL-13水平及APRI评分、FIB-4指数诊断WD肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证的最佳临界值分别为34.65 pg/mL、275.25 pg/mL、0.78、1.85,4项指标联合诊断WD肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证的ROC曲线下面积(AUC)为0.953,其灵敏度(87.50%)和特异度(92.80%)较高。结论补肾活血化浊方可有效缓解WD肝肾亏虚、痰瘀互结证患者肝纤维化进程,其机制可能与抑制IL-4、IL-13相关的炎症反应有关;FIB-4、APRI联合检测IL-4、IL-13在WD肝纤维化肝肾亏虚、痰瘀互结证的诊断中具有一定的价值。

补肾活血协定方治疗膝关节骨性关节炎肾虚血瘀证的疗效及机制

目的观察补肾活血协定方治疗膝关节骨性关节炎(knee osteoarthritis,KOA)(肾虚血瘀证)的疗效。方法选取2018年2月—2020年2月医院收治的KOA患者186例,按照随机数字表法将患者分为对照组(n=93例)和观察组(n=93例)。对照组给予依托考昔片口服,观察组在对照组基础上加用补肾活血协定方口服,连续治疗2个月。分别以疼痛视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)、美国特种外科医院量表(hospital for special surgery scores,HSS)评价膝关节疼痛程度与膝关节功能,用膝关节高频超声检查软骨厚度、滑膜厚度,检测关节液中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、Toll样受体-4(Toll-like receptor 4,TLR-4)、P物质(Substance P,SP)含量及血清中脂联素(adiponectin,APN)、低氧诱导因子1α(hypoxic induction factor-1α,HIF-1α)水平,对比两组治疗效果。结果:观察组的有效率93.55%(87/93),与对照组82.79%(77/93)的有效率比较,以观察组显著升高(χ2=5.155,P<0.05);两组患者的VAS评分在治疗治疗2周、治疗4周后均降低,HSS评分在治疗2周、治疗4周后均升高,以观察组VAS评分显著高于对照组,HSS评分显著高于对照组(P<0.05);治疗后,两组在增加关节软骨厚度、降低滑膜厚度等方面均具有一定效果,以观察组软骨厚度增加程度、滑膜厚度降低程度更明显(P<0.05);观察组患者经治疗后关节液中TNF-α、TLR-4、P物质水平均显著低于对照组(P<0.05);血清APN水平显著升高,HIF-1α水平显著降低(P<0.05)。结论补肾活血协定方利于减轻膝骨性关节炎患者的关节疼痛,提高膝关节功能,其机制可能与调节关节液、血清中相关因子水平以减轻滑膜炎症、调节软骨代谢有关,值得进行临床推广。

疏肝补肾活血汤联合刮痧对女性更年期综合征患者内分泌紊乱状态的调节作用研究

目的评价疏肝补肾活血汤联合刮痧对女性更年期综合征患者内分泌紊乱状态的调节作用研究。方法选择2018年3月—2020年7月该院收治的女性更年期综合征患者136例,按随机数表法分为研究组(68例)和参照组(68例)。参照组采用尼尔雌醇片治疗。口服,2 mg/次,2周1次。在经期及其后5 d停药。研究组在参照组治疗的基础上,口服疏肝补肾活血汤结合刮痧治疗。两组均规范治疗3个月。比较两组治疗前后中医证候积分和治疗疗效,比较两组治疗前后Kupperman评分,比较两组治疗前后促黄体生成素(LH)、促卵泡生成素(FSH)和雌二醇(E;)水平。结果参照组治疗总有效率低于研究组(P<0.05);两组治疗后中医证候积分较治疗前降低,研究组下降幅度优于对照组(P<0.05);两组治疗后Kupperman评分较治疗前降低,研究组降低幅度优于对照组(P<0.05);两组治疗后内分泌激素水平LH、FSH较治疗前降低,E;较治疗前升高。研究组改善幅度优于对照组(P<0.05)。结论疏肝补肾活血汤联合刮痧能更大幅度地改善女性更年期综合征患者的临床症状,缓解病情,调节患者的内分泌水平,改善机体内分泌功能紊乱状态,疗效优于西医治疗。

补肾填精方治疗肾虚型崩漏临床疗效观察

目的探讨和分析补肾填精方治疗肾虚型崩漏的临床疗效。方法研究对象为肾虚型崩漏患者92例,选取时间为2018年10月—2020年8月,按照数字表法随机分为两组,对照组46例患者给予常规治疗,观察组46例患者联合给予补肾填精方治疗。观察并比较两组痊愈率、有效率、治疗前后阴道流血量、腰膝酸软、神疲力乏等中医证侯评分和两组治疗前后血管紧张素(Ang-2)、雌二醇(E2)、黄体生成素(LH)等血清指标水平。结果观察组痊愈率、有效率、无效率等水平均优于对照组(P<0.05)。治疗前两组阴道流血量、神疲力乏等评分差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组阴道流血量、神疲力乏等评分低于对照组(P<0.05)。治疗前两组Ang-2、LH等水平差异无统计学意义(P>0.05),治疗后观察组Ang-2、LH等水平优于对照组(P<0.05)。结论研究对肾虚型崩漏患者联合给予补肾填精方治疗,可提高临床疗效,降低中医证候评分,同时改善血清指标水平,值得推广。