补肾益髓方及其拆方对星形胶质细胞胶质瘢痕中GFAP与CSPGs表达的影响

目的观察补肾益髓方及其拆方补肾方与化痰活血方对星形胶质细胞损伤后细胞活性的影响及胶质瘢痕中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、硫酸软骨素糖蛋白(CSPGs)表达的影响。方法体外原代培养星形胶质细胞,划痕法建立胶质瘢痕模型,分别加入补肾益髓方、补肾方和化痰活血方含药血清,继续培养24 h后,用CCK-8法测定细胞存活率,高内涵法测定GFAP与CSPGs蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.01),GFAP与CSPGs蛋白显著上调(P<0.01)。与模型组相比,补肾益髓方、补肾方及化痰活血方含药血清均能够促进星形胶质细胞细胞存活率(P<0.01);均能够下调CSPGs蛋白的表达(P<0.01或P<0.05)。补肾益髓方及补肾方升高细胞存活率优于化痰活血方(P<0.05或P<0.01);降低CSPGs蛋白的表达方面补肾益髓方优于化痰活血方(P<0.05)。结论补肾益髓方及其拆方均能够抑制损伤后星形胶质细胞胶质瘢痕中CSPGs蛋白的表达,以促进轴突的修复与再生,以补肾益髓方效果最佳。

补肾益髓方及其拆方调控实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠轴突再生抑制信号通路相关分子的实验研究

目的观察补肾益髓方(Bushen Yisui formula,BSYSF)及其拆方补肾方(Bushen formula,BSF)和化痰活血方(Huatan Huoxue formula,HTHXF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠轴突再生抑制信号通路NogoA/NgR/RhoA/ROCK的调控作用。方法将雌性C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为正常对照组(normal control,NC)、模型组(model,MO)、醋酸泼尼松组(prednisone acetate,PA,6 mg/kg)、梓醇组(catapol,CA,40 mg/kg)、BSYSF组(生药3.02 g/kg)、BSF组(生药1.44 g/kg)、HTHXF组(生药1.57 g/kg),每组16只。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein35-55,MOG35-55)免疫小鼠制备EAE模型。NC和MO组小鼠灌服蒸馏水,各治疗组予相应药物灌胃,每日1次,共40 d。免疫第25天和40天,分别取小鼠脑和脊髓。应用实时荧光定量-PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA表达;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和蛋白质印迹(Western blotting,WB)法测定上述指标蛋白的表达。结果MO组小鼠脑和脊髓NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白表达较NC组明显上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。经BSYSF及其拆方BSF和HTHXF治疗后,NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白的表达均有不同程度的降低,BSYSF组的上述指标差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论BSYSF及其拆方BSF和HTHXF均具有调节EAE小鼠轴突抑制因子NogoA/NgR及其信号通路RhoA/ROCK作用,并且BSYSF作用明显。上述结果为阐释BSYSF促进轴突再生的作用机制提供了实验依据。