补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠髓鞘再生的作用

目的观察补肾益髓方促进实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠髓鞘再生的作用。方法 80只雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照、模型、醋酸泼尼松及补肾益髓方组。以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(myelin oligodendroglia glycoprotein,MOG)35-55诱导小鼠EAE模型。治疗组小鼠每天给予相应药物灌胃治疗,共40天,醋酸泼尼松为阳性对照药物。每天观察动物的一般情况,记录小鼠神经功能评分,统计小鼠的发病率、潜伏期、病程和疾病负荷等。取小鼠脑和脊髓经固蓝染色观察其髓鞘变化,免疫组化法测定髓鞘再生相关蛋白硫酸软骨素蛋白多糖2胶质细胞和髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)的表达。结果补肾益髓方能够延长小鼠发病潜伏期、缩短EAE病程、降低小鼠疾病负荷(P<0.05),减少小鼠脑和脊髓内炎细胞浸润和髓鞘脱失;本方还可促进NG2和MBP蛋白的表达(P<0.01)。结论补肾益髓方对EAE小鼠有神经保护作用,并能减轻髓鞘损伤和促进髓鞘修复。

益髓补肾方对高危弥漫大B淋巴瘤化疗后患者临床疗效及免疫功能的影响

目的:研究益髓补肾方对高危弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)化疗后患者临床疗效及免疫功能的影响。方法:将河南中医药大学第三附属医院收治的74例高危DLBCL患者随机分为2组,观察组(n=36)对照组(n=38)。其中对照组采用CHOP为基础的化疗方案,而观察组在对照组的基础上,给予益髓补肾方治疗。治疗后观察2组患者临床疗效、免疫功能及不良反应发生情况。结果:治疗后,与对照组相比,观察组高危DLBCL患者近期临床疗效并无显著提升(P>0.05),KPS评分及QLQ-C30评分更高(P=0.022,0.018),治疗后总不良情况发生率更低(P=0.017),T淋巴细胞亚群及细胞因子显著改善(P<0.05)。结论:益髓补肾方提高了CHOP为基础方案治疗高危DLBCL患者的生存质量及免疫功能,减轻了化疗毒副反应。

补肾配伍化痰活血药对低血清培养SH-SY5Y神经细胞轴突生长的影响

目的:观察补肾益髓(BSYS)方(即补肾化痰活血方药)及其拆方补肾方(BS)、化痰活血(HTHX)方对低血清培养SH-SY5Y细胞致神经轴突生长抑制的作用。方法:将低血清培养基与SHSY5Y细胞培养24h,建立神经轴突生长抑制模型,再将BSYS方、BS方和HTHX方含药血清与损伤的SH-SY5Y细胞培养24h,CCK-8法测定细胞存活率,βtubulin-Ⅲ免疫荧光法观察细胞形态,计算神经突起细胞率、测量细胞轴突长度及积分光密度(IOD)值。结果:和空白对照组(NC)细胞比较,模型组(MO)细胞存活率显著下降(P<0.05),轴突变短(P<0.001),IOD值明显降低(P<0.001)。和MO细胞比较,BSYS方和BS方含药血清均能明显升高细胞存活率(P<0.001);BSYS方明显提高神经突起细胞率(P<0.05)、促进轴突生长(P<0.05)和升高IOD值(P<0.001);补肾方只在升高IOD值方面效果明显(P<0.01);而化痰活血方对以上指标的作用均不明显。结论:补肾配伍化痰活血方药和补肾方药对低血清致SH-SY5Y细胞轴突生长抑制的改善作用明显,其作用机制有待进一步探讨。

补肾益髓方及其拆方对星形胶质细胞胶质瘢痕中GFAP与CSPGs表达的影响

目的观察补肾益髓方及其拆方补肾方与化痰活血方对星形胶质细胞损伤后细胞活性的影响及胶质瘢痕中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、硫酸软骨素糖蛋白(CSPGs)表达的影响。方法体外原代培养星形胶质细胞,划痕法建立胶质瘢痕模型,分别加入补肾益髓方、补肾方和化痰活血方含药血清,继续培养24 h后,用CCK-8法测定细胞存活率,高内涵法测定GFAP与CSPGs蛋白的表达。结果与正常对照组比较,模型组细胞存活率明显下降(P<0.01),GFAP与CSPGs蛋白显著上调(P<0.01)。与模型组相比,补肾益髓方、补肾方及化痰活血方含药血清均能够促进星形胶质细胞细胞存活率(P<0.01);均能够下调CSPGs蛋白的表达(P<0.01或P<0.05)。补肾益髓方及补肾方升高细胞存活率优于化痰活血方(P<0.05或P<0.01);降低CSPGs蛋白的表达方面补肾益髓方优于化痰活血方(P<0.05)。结论补肾益髓方及其拆方均能够抑制损伤后星形胶质细胞胶质瘢痕中CSPGs蛋白的表达,以促进轴突的修复与再生,以补肾益髓方效果最佳。

补肾益髓方及其拆方调控实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠轴突再生抑制信号通路相关分子的实验研究

目的观察补肾益髓方(Bushen Yisui formula,BSYSF)及其拆方补肾方(Bushen formula,BSF)和化痰活血方(Huatan Huoxue formula,HTHXF)对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)小鼠轴突再生抑制信号通路NogoA/NgR/RhoA/ROCK的调控作用。方法将雌性C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为正常对照组(normal control,NC)、模型组(model,MO)、醋酸泼尼松组(prednisone acetate,PA,6 mg/kg)、梓醇组(catapol,CA,40 mg/kg)、BSYSF组(生药3.02 g/kg)、BSF组(生药1.44 g/kg)、HTHXF组(生药1.57 g/kg),每组16只。用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(myelin oligodendrocyte glycoprotein35-55,MOG35-55)免疫小鼠制备EAE模型。NC和MO组小鼠灌服蒸馏水,各治疗组予相应药物灌胃,每日1次,共40 d。免疫第25天和40天,分别取小鼠脑和脊髓。应用实时荧光定量-PCR(quantitative real time-PCR,qRT-PCR)检测NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA表达;免疫组织化学(immunohistochemistry,IHC)和蛋白质印迹(Western blotting,WB)法测定上述指标蛋白的表达。结果MO组小鼠脑和脊髓NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白表达较NC组明显上调(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。经BSYSF及其拆方BSF和HTHXF治疗后,NogoA、NgR、RhoA和ROCKⅡmRNA和蛋白的表达均有不同程度的降低,BSYSF组的上述指标差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。结论BSYSF及其拆方BSF和HTHXF均具有调节EAE小鼠轴突抑制因子NogoA/NgR及其信号通路RhoA/ROCK作用,并且BSYSF作用明显。上述结果为阐释BSYSF促进轴突再生的作用机制提供了实验依据。

苁蓉舒痉颗粒对帕金森病患者黑质代谢物影响随机对照研究

目的评估苁蓉舒痉颗粒对帕金森病(PD)患者黑质代谢物影响的临床疗效及安全性。方法采用双中心分层随机化的方法,两中心分别将符合入组标准的PD患者30例,随机分2组,观察组15例予苁蓉舒痉颗粒加基础西药治疗,对照组15例予中药安慰剂加基础西药治疗,疗程12周。治疗前后进行国际运动障碍学会帕金森病综合评定量表(MDS-UPDRS)评分、磁共振波谱检测、肌电图检查、39项帕金森病生活质量问卷(PDQ-39)、非运动症状评定量表(NMSS)评分,并检测血尿常规、肝肾功能、心电图,记录不良反应事件。结果两中心意向性分析人群60例,安全性分析人群60例,磁共振波谱符合方案人群53例,肌电图符合方案人群45例。与本组治疗前比较,对照组治疗后MDS-UPDRSⅠ、PDQ-39及NMSS评分均降低(P<0.05);观察组治疗后MDS-UPDRS量表各部分评分及总分、PDQ-39与NMSS评分均降低,病轻侧黑质N-乙酰天冬氨酸/肌酸(NAA/Cr)值升高(P<0.05)。与对照组同期比较,观察组治疗后MDS-UPDRSⅠ、MDS-UPDRSⅢ、PDQ-39及NMSS评分均降低,病轻侧黑质NAA/Cr值升高(P<0.05)。治疗期间,对照组出现不良反应1例,观察后症状减轻至消失。与治疗前比较,所有患者的安全性指标无显著改变(P>0.05)。结论苁蓉舒痉颗粒可改善PD患者的运动症状及非运动症状,提高生活质量,提高黑质神经元活性,其治疗PD具有较好的安全性。

补肾益髓方对帕金森病模型小鼠脑组织NLRP3炎症小体激活相关蛋白表达的影响

目的观察补肾益髓方对帕金森病(PD)模型小鼠运动症状的影响并探讨其可能的作用机制。方法34只C57BL/6J小鼠随机选取10只作为正常组,其余24只予MPTP溶液30 mg/(kg·d)连续5天腹腔注射制备PD模型,将造模成功的24只小鼠随机分为模型组和补肾益髓方组各12只。补肾益髓方组小鼠予补肾益髓方配方颗粒水溶液(浓度0.22 g/ml)0.1 ml/10 g灌胃,正常组及模型组小鼠予等体积生理盐水灌胃,各组均每天1次,连续14天。各组小鼠采用转棒疲劳试验进行行为学评价,尼氏染色观察中脑黑质纹状体病理学形态,免疫组化检测中脑黑质纹状体酪氨酸羟化酶(TH)阳性细胞表达,Western Blot法检测小鼠脑组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)炎症小体激活相关蛋白[包括NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、信号转接凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)]表达。结果与正常组比较,模型组小鼠在转棒上停留时间显著缩短,中脑黑质纹状体TH阳性细胞表达减少,脑组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达升高(P<0.01);尼氏染色结果显示,模型组小鼠黑质纹状体区神经元减少、萎缩、紊乱,胞体变小,尼氏小体减少。与模型组比较,补肾益髓方组小鼠转棒上停留时间延长,黑质纹状体TH阳性细胞表达增多,脑组织中IL-1β、TNF-α、NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达下降(P<0.05);尼氏染色结果显示,补肾益髓方组小鼠黑质纹状体区大部分神经元细胞结构完备,核固缩、破裂现象减少,尼氏小体数量增多。结论补肾益髓方可改善PD的运动症状,其作用机制可能与调节NLRP3炎症小体介导的细胞焦亡有关。

补肾益髓方及其拆方对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠的神经保护作用及NF200和CSPGs表达的影响

目的:观察补肾益髓(BSYS)方及其拆方补肾(BS)和化痰活血(HTHX)方对实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)小鼠的神经保护作用及脑和脊髓神经丝蛋白(NF)200和硫酸软骨素蛋白多糖(CSPGs)表达的影响。方法:雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、模型组、醋酸泼尼松组、梓醇组、BSYS组、BS组和HTHX组。各造模小鼠以髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG)35-55诱导EAE模型。各治疗组小鼠每日予相应药物灌胃,共40d。醋酸泼尼松和梓醇为阳性对照药物。每日观察小鼠神经功能评分。取小鼠脑和脊髓,HE染色观察其病理变化,透射电镜观察轴突和髓鞘变化,免疫组化法测定NF200和CSPGs蛋白表达。结果:发病第25-40天,BSYS方和BS方明显降低小鼠神经功能评分(P<0.05,P<0.01);第37-40天,BSYS方优于BS方(P<0.05)。BSYS方及BS方可明显减轻小鼠脑和脊髓内炎细胞浸润评分(P<0.05,P<0.01);降低髓鞘/轴突面积比值(P<0.05,P<0.01),明显减轻髓鞘及轴突损伤;升高NF200蛋白表达(P<0.05,P<0.01);下调CSPGs表达(P<0.05,P<0.01)。HTHX方只升高NF200蛋白表达(P<0.05)。结论:补肾益髓方及其拆方补肾方具有明显的神经保护作用。并通过上调NF200及下调CSPGs促进轴突修复及再生,化痰活血方的作用不明显。

益髓补肾方改善恶性淋巴瘤化疗患者相关性贫血及对免疫功能的影响

目的:探讨益髓补肾方改善恶性淋巴瘤化疗患者相关性贫血临床疗效,观察其对免疫功能的影响。方法:选取河北省中医院血液病科2010年1月—2015年12月收治的恶性淋巴瘤化疗相关性贫血患者110例,按随机数字表法分为对照组和治疗组,各55例,对照组常规化疗;治疗组在常规化疗基础上予以益髓补肾方(1剂/d)口服治疗,治疗15 d为1疗程,共治疗2个疗程。两组采血测定血常规,记录生活质量,同时比较临床疗效及并发症。结果:对照组总有效率为69.09%,治疗组有效率为89.09%,治疗组优于对照组(P<0.05);与治疗前比较,两组治疗后血红蛋白(Hb),血细胞比容(Hct),红细胞计数(RBC)含量升高(P<0.05),促红细胞生成素(EPO)含量降低(P<0.05);治疗后躯体、角色、社会、情绪等指标评分升高(P<0.05);治疗后与对照组比较,治疗组治疗后Hb,Hct,RBC含量较高,EPO含量降低,治疗后躯体、角色、社会、情绪等评分升高(P<0.05);治疗组T淋巴细胞亚群CD3^+,CD4^+,CD4^+/CD8^+水平升高,CD8^+细胞水平下降(P<0.05);对照组不良反应发生率为12.73%,治疗组不良反应发生率为7.27%,治疗组低于对照组(P<0.05)。结论:益髓补肾方治疗恶性淋巴瘤化疗相关性贫血疗效确切,可提高生活质量及患者免疫功能,具有较好的增效减毒作用。

补肾化痰活血法对视神经脊髓炎谱系疾病缓解期患者疼痛的疗效观察

目的:评价补肾化痰活血法治疗视神经脊髓炎谱系疾病(NMOSD)缓解期患者疼痛的临床疗效。方法:采用前瞻性自身前后对照的研究方法,纳入2016年12月至2017年12月就诊的缓解期NMOSD伴疼痛患者23例,给予补肾化痰活血法中药治疗,疗程6个月。应用视觉模拟评分法(VAS)评估患者疼痛程度,应用汉密尔顿抑郁量表和焦虑量表(HRSD和HAMA)评估患者是否存在抑郁与焦虑,应用多发性硬化影响量表(MSIS-29)评估疾病对患者生活质量的影响程度,应用扩展残疾状态量表(EDSS)评估患者神经功能损伤情况。计算治疗前后年复发率(ARR)。结果:治疗后患者VAS评分、MSIS-29评分、HAMA评分和EDSS评分均较治疗前显著降低(P<0.01,P<0.05),ARR显著下降(P<0.01)。结论:补肾化痰活血法能有效改善NMOSD缓解期患者的疼痛症状,提高患者生活质量。