补中益气丸对DSS诱导的结肠炎模型小鼠不同病理阶段NLRP3炎性体通路的影响

目的:探讨补中益气丸对结肠炎小鼠的干预作用及机制。方法:64只C57BL/6小鼠随机分为2周空白组、2周模型组、2周补中益气丸(12 g·kg^(-1))组、2周补中益气丸(6 g·kg^(-1))组、4周空白组、4周模型组、4周补中益气丸12 g·kg^(-1)组及4周补中益气丸6 g·kg^(-1)组。采用3%右旋葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮水7 d诱导结肠炎小鼠模型,于造模后第8天开始给予补中益气丸(12、6 g·kg^(-1))灌胃,每天1次。分别于第2、4周处死动物,测量小鼠结肠长度及质量,苏木素-伊红(HE)染色病理观察并进行结肠黏膜炎症评分,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、胱天蛋白酶-1(Caspase-1)的mRNA和蛋白表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测结肠组织中的炎性细胞因子白细胞介素(IL)-1β、IL-18和IL-33含量。结果:与2周空白组比较,2周模型组小鼠结肠长度明显缩短、质量明显增加(P<0.05),光镜下可见上皮细胞缺失、腺体结构破坏、黏膜及黏膜下层大量炎细胞浸润,局部出现隐窝脓肿,黏膜炎症评分显著增加(P<0.01),结肠组织中IL-1β、IL-18和IL-33含量明显增高(P<0.05),NLRP3、ASC、Caspase-1的mRNA及蛋白表达明显上升(P<0.05);与2周模型组比较,补中益气丸(12 g·kg^(-1))干预可恢复结肠长度,缓解黏膜损伤程度(P<0.05),下调炎性因子IL-18含量(P<0.05),降低NLRP3、ASC的mRNA表达和ASC、Caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05)。与4周空白组比较,4周模型组小鼠结肠长度明显减少,质量明显增加(P<0.05),光镜下见黏膜层腺体减少、腺腔扩张,隐窝萎缩,局部结缔组织增生及淋巴细胞浸润,炎症评分明显升高,呈现慢性炎症阶段(P<0.01);炎性细胞因子IL-1β、IL-18和IL-33表达增高(P<0.05),NLRP3炎性体复合物的mRNA和蛋白表达水平增高(P<0.05);与4周模型组比较,两种剂量的补中益气丸干预均可改善结肠长度及质量(P<0.05),其中,补中益气丸(12 g·kg^(-1))干预还可改善结肠炎症评分(P<0.05)。与急性期不同的是,此时补中益气丸(两种剂量)干预提高肠黏膜IL-33含量并显著上调NLRP3炎性体复合物ASC、Caspase-1 mRNA及蛋白表达(P<0.05)。结论:补中益气丸可减轻DSS模型小鼠结肠炎症损伤,其机制与调节NLRP3炎性体介导的肠道免疫反应有关,且在急、慢性炎症阶段呈现不同的调节作用。