BsNPV和BmNPV重组毒株生物学特性

为了扩大油桐尺蛾核型多角体病毒(Buzura suppressaria nucleopolyhedrovirus,BsNPV)宿主域和实现规模化生产,将其与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)共同侵染油桐尺蛾幼虫,虫体死亡后收集并纯化获得的病毒(P1)再侵染家蚕,待家蚕死亡后收集并纯化获得的病毒(P2)再侵染油桐尺蛾幼虫,虫体死亡后收集并纯化获得病毒(P3),以此获得能感染油桐尺蛾和家蚕的自然重组病毒新株系,并对该株病毒进行超微结构鉴定和毒力测定(LT_(50))。结果表明,第1代(P1)和第3代(P3)重组病毒的超微形态和大小接近于亲本BsNPV,第2代(P2)重组病毒则与亲本BmNPV更接近,其大小介于亲本BmNPV与P1、P3之间。P3侵染油桐尺蛾幼虫的LT_(50)比亲本BsNPV提前1.79 d。因此,本试验获得的重组病毒对油桐尺蛾的杀虫活性增强。

保存时间对油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂毒力的影响

以半合成人工饲料饲养的8天龄油桐尺蠖幼虫为供试虫,测定用同一标准方法生产的油桐尺蠖核型多角体病毒杀虫剂的毒力。当年生产的病毒杀虫剂感染幼虫,其死亡率达97.03％,LC50为2.35×10~3PIB/ml。室温保存2年、7年和10年的病毒杀虫剂,其病毒活性分别丧失6.1％,20.6％和90.2％。

油桐尺蠖核型多角体病毒DNA在3株昆虫细胞系中的转染

使用 DNA 磷酸钙共沉淀方法,把油桐尺蠖核型多角体病毒 DNA 导入3株昆虫细胞株。结果表明,同源细胞株的被转染率显著高于非同源细胞株。用间接免疫酶技术检测细胞中病毒多角体蛋白的存在来确定转染率的方法,可在转染21小时后就获得结果,该方法快速、简便。同时,还研究了吸附时间和病毒 DNA 浓度对转染的影响。

油桐尺蠖核型多角体病毒及其基因组某些理化性质研究

油桐尺蠼核型多角体病毒(BsNPV)的多角体大小为1～1.5μm×0.8～1.6μm。病毒粒子长度为0.31～0.8μm。直径为0.05～0.06μm。在0.1×SSC溶液中测得其基因组DNA T_m值为76.5℃,(G+C)%为55.14%,电镜法测得其DNA分子平均长度为41.3μm,计算出对应分子量为81.36×10~6 daltons。用限制性内切酶混合酶解后琼脂塘凝胶电泳,测出DNA积加分子量为79.36×10~6 daltons(120.23kb)。

油桐尺蠖核型多角体病毒p35基因的克隆及在大肠杆菌中的表达

用PCR技术从油桐尺蠖核型多角体病毒基因组中扩增得到p35基因的DNA序列,把PCR产物克隆到pMD 18载体上,核苷酸序列测定表明此片段与AcNPVp35基因同源性为100%,继而构建了表达质粒pGBp35,诱导后经SDS PAGE检测表明获得了BsNPVp35基因在大肠杆菌BL21中包涵体形式的特异表达。