BsNPV和BmNPV重组毒株生物学特性

为了扩大油桐尺蛾核型多角体病毒(Buzura suppressaria nucleopolyhedrovirus,BsNPV)宿主域和实现规模化生产,将其与家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)共同侵染油桐尺蛾幼虫,虫体死亡后收集并纯化获得的病毒(P1)再侵染家蚕,待家蚕死亡后收集并纯化获得的病毒(P2)再侵染油桐尺蛾幼虫,虫体死亡后收集并纯化获得病毒(P3),以此获得能感染油桐尺蛾和家蚕的自然重组病毒新株系,并对该株病毒进行超微结构鉴定和毒力测定(LT_(50))。结果表明,第1代(P1)和第3代(P3)重组病毒的超微形态和大小接近于亲本BsNPV,第2代(P2)重组病毒则与亲本BmNPV更接近,其大小介于亲本BmNPV与P1、P3之间。P3侵染油桐尺蛾幼虫的LT_(50)比亲本BsNPV提前1.79 d。因此,本试验获得的重组病毒对油桐尺蛾的杀虫活性增强。

油桐尺蠖病毒杀虫剂的药效分析

油桐尺蠖核型多角体病毒（BsSNPV）是一种高致病力的病毒株，生物测定nPIB（LC50）=1．657×104mL．经过全国7个省20多个单位联合试验，生物统计结果表明：BsSNPV防治第1代油桐尺蠖虫口下降率为97．2％；防治第2代油桐尺蠖虫口下降宰为93．97％；F测验其t值为0．184，小于理论t0．05（29）＝2．045．优于敌百虫、DDVP、辛硫磷和BT等农药是一种杀虫效果稳定、使用安全、经济有效的生物杀虫剂．

油桐尺蛾核型多角体病毒lef-8基因结构及系统进化分析

lef-8基因作为杆状病毒重要的早期表达基因,编码病毒RNA聚合酶的最大亚基。本文通过对油桐尺蛾核型多角体病毒lef-8基因进行测序,对其基因结构及其在杆状病毒中的系统进化进行了分析。发现lef-8基因在油桐尺蛾核型多角体病毒中编码区长2 634 bp,编码877个氨基酸。在5’-UTR区具有可能为其启动子及转录起始位点的信号序列,在3’-UTR区具有加尾信号序列,但这些序列的具体功能还有待进一步研究。其蛋白序列与常见的模式NPV同源性较低,但具有共同的签名序列。通过对杆状病毒lef-8基因的系统进化分析,发现颗粒体病毒和核型多角体病毒明显分为两支,而核型多角体病毒中又明显分为4个分支,其进化关系在很大程度上与其寄主的进化关系相关。

油桐尺蠖核型多角体病毒(羊楼洞株)基因组特性

用多种限制性内切酶单酶切、双酶切分析了油桐尺蠖核型多角体病毒（羊楼洞株）基因组DNA，同时用[α－32p）－dATP对几种酶的酶切产物进行末端标记。结果表明，此株病毒基因组约129kb，组成比较单一。与国内其它分离株基因组大小及酶切电泳图谱均有较大差别。

油桐尺蠖核多角体病毒多角体蛋白基因定位与克隆

以[^(32)P]-dATP标记含AcNPV DNA的EcoRI-I片段的重组质粒为探针,在35℃条件下对油桐尺蠖核多角体病毒(BsNPV)多角体蛋白基因进行了定位,将其分别定位在BamH Ⅰ-A,Bgl Ⅰ-A,Bgl Ⅱ-F,EocR Ⅰ-R,Hind Ⅲ-A,Kpn Ⅰ-Ⅰ,Pst Ⅰ-D,Xba Ⅰ-A(或B),Xho Ⅰ-F和G片段上,并以M13mp18为载体,克隆了Kpn Ⅰ-Ⅰ片段。

油桐尺蠖核型多角体病毒感染Bs484细胞的研究

本文报道利用油桐尺蠖核型多角体病毒感染处于不同培养基及不同培养时间的Ｂｓ４８４细胞的部分感染效果和特征。结果表明，细胞培养基的类型和细胞传代后的时间对病毒感染率和多角体产量以及其它感染特征都有比较明显的影响；经过比较，处于Ｇｒａｃｅ培养基组的传代后三天的Ｂｓ４８４细胞是一个理想的ＢｓＮＰＶ感染受试系统。同时发现，健康的油桐尺蠖血淋巴具有提高细胞活性及病毒感染效果的作用。

油桐尺蠖核型多角体病毒毒力的生物测定

我们分离的油桐尺蠖(Buzura suppressaria)核型多角体病毒(BsNPV)GW-846是一种极有潜力的生物杀虫剂。本文通过叶片感染,添食饲喂进行其毒力的生物测定,感染剂量与三龄幼虫死亡率的回归直线方程为y=2.23+x。由此计算的LD_(50)为5.91×10~2/cm^2叶片。当感染剂量为1.25和2.0×10~4PB/头虫时,LT_(50)为4.8和4.9d,各龄幼虫均很敏感。五龄幼虫的LT_(50)也只有7.7d。工作中,我们推导了一个计算死亡率的公式,有一定的实用价值。

大尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白基因的结构分析

大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)定位在2.3kb 的 BamHI-H片段上,用 Xhol、Smal、HindⅢ和 PstⅠ构建了 H 片段的物理图谱,并测定了两端636bp 序列。在5′端发现了杆状病毒 ocu 基因共有的典型特征,即:ATG 起始区;启动子区(14bp保守序列);TATA box 和 CATA box 区等。单一 Xhol 位点在 ATG 上游-15bp 处,适于作为构建 ocu 基因转移载体的插入位点。在这一基因5′端序列中发现了五个反转重复单元CGAGC GCTCG,讨论了这一单元在杆状病毒 ocu 基因高效表达中的调控功能。

油桐尺蠖核型多角体病毒DNA在3株昆虫细胞系中的转染

使用 DNA 磷酸钙共沉淀方法,把油桐尺蠖核型多角体病毒 DNA 导入3株昆虫细胞株。结果表明,同源细胞株的被转染率显著高于非同源细胞株。用间接免疫酶技术检测细胞中病毒多角体蛋白的存在来确定转染率的方法,可在转染21小时后就获得结果,该方法快速、简便。同时,还研究了吸附时间和病毒 DNA 浓度对转染的影响。

油桐尺蠖核型多角体病毒的空斑测定

在油桐尺蠖卵巢细胞系上对油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)进行了空斑测定。用此方法测定了BsNPV的感染力,并将所得的结果与其TCID_(50)进行比较,结果显示这两种方法在测定病毒感染力时敏感性相似。

油桐尺蠖核型多角体病毒在同源和异源细胞中复制效果的比较

自从昆虫细胞系建立以后,杆状病毒在体外系统中的复制一直是人们感兴趣的课题。油桐尺蠖核型多角体病毒(Bozura suppressaria Nuclear Polyhedrosis Virus,Bs一NPV)作为一种生物杀虫剂已成功地在茶园、杉木林中大面积使用,并已建立了对该病毒敏感的细胞系。多粒包埋型核多角体病毒(MNPV)在体外复制成功的报道较多。有的MNPV在体外感染的范围较宽,不仅能感染同源的细胞系,亦能感染异源的细胞系。单粒包埋型核多角体病毒(SNPV)在体外复制的报道较少,且大多数SNPV仅在同源细胞系内增殖。BsNPV是一种SNPV。本文用BsNPV接种1种同源细胞和3种异源鳞翅目细胞,比较BsNPV的感染和复制规律的异同。

昆虫病毒多角体蛋白基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

将含有大尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)多角体蛋白基因(ocu)的BamHI-H片段克隆到表达载体pDR 540的BamHI位点,得到能抗高浓度氨苄青霉素(200μg/ml)的两个阳性重组体,其胞外总蛋白比亲本质粒高1.1—1.4倍。在大肠杆菌细胞中,BsNPV ocu基因在原核杂合启动子tac驱动下能高水平的表达,表达量达到0.8和4.7mg/ml。免疫沉淀反应证明,表达蛋白为BsNPV的包涵体蛋白,凝胶过滤法测定的平均分子量为32.1×10~3道尔顿。

组建油桐尺蠖核型多角体病毒基因组物理图谱的计算机方法

本文报道了一种双酶混合切割后用计算机对结果进行分析、比较及组建出物理图谱的方法。用Bam HⅠ、BglⅡ等限制性内切酶进行单酶双酶切割,计算出油桐尺蠖核型多角体病毒基因组DNA的分子量为120.23Kb,BamHⅠ切割DNA后产生10条带;BglⅡ切割后产生7条带。经计算机分析后打印出前者在物理图谱中的顺序为A(GE)C(HI)B(DFJ),后者在物理图谱中的顺序为AGC(EF)BD。在本文中还提出了组建图谱的计算机程序思想,并讨论了此法的可靠性。

油桐尺蠖核型多角体病毒感染Bs484细胞的增殖与病理研究

用油桐尺蠖核型多角体病毒（ＢｓＮＰＶ）感染Ｂｓ４８４细胞，对感染后病毒增殖的部分性质及细胞病理变化进行了研究。结果表明：１．病毒子代的增殖在感染后的不同时间具有不同的变化形式，且增殖量与感染剂量具有一定程度的相关，２．病毒感染细胞后１２小时开始在培养物上清检测到明显的胞外病毒粒子；３．就ＢｓＮＰＶ的增殖而言，２４～２６℃是其最佳发育温度；４．病毒感染细胞后的明显病变特征是核内充满多用体，细胞堆积以及细胞体积膨大，同时观察到二类感染细胞，一种核内含较多的多角体，另一种核内则只有几个多用体。

大尺蠖核多角体病毒多角体蛋白基因的物理图谱和部分序列测定

分子杂交证明,大尺蠖核多角体病毒(BsNPV)的多角体蛋白基因(ocu)定位在BamHI-H片段上。进一步构建了该片段的XhoⅠ,SmaⅠ,Hind Ⅲ及PstⅠ的物理图谱,测定了377个核苷酸序列。由于在所测序列中具有杆状病毒ocu基因的典型特征,如14bp保守序列和ATG上游的AT丰富区等,并经与AcNPV的ocu基因对比,我们认为,从BamH I-H片段5’端第26个核苷酸起始,包含了BsNPV ocu基因的全部序列。在ATG上游-15bp处有一个Xho Ⅰ位点,在此位点插入质粒pUC18的多聚接头,构建成带有多克隆位点的转移载体pBsA39。

油桐尺蠖核型多角体病毒多角体蛋白的理化性质及二级结构预测

由SDS及梯度胶电泳测得油桐尺蠖核型多角体病毒（BsNPV）多角体蛋白天然状态及亚基分子量分别为363kD与31.5kD，从而推断此蛋白为十二聚体，亚基间无二硫键作用．BsNPV多角体蛋白的远紫外圆二色谱显示，它的二级结构含有31．7％的α螺旋，23．8％的β折叠及44．5％的无规卷曲，与二级结构预测结果相符．通过荧光光谱实验推知，BsNPV多角体蛋白的表面疏水性弱，其色氨酸残基位于蛋白疏水核内部．

油桐尺蠖感染核型多角体病毒后血淋巴酯酶的变化

用核型多角体病毒（ｎｕｃｌｅａｒｐｏｌｙｈｅｄｒｏｓｉｓｖｉｒｕｓ）感染油桐尺蠖（Ｂｕｚｕｒａｓｕｐｐｒｅｓｓａｒｉａ）四龄初幼虫，以染病后１２，２４，４８，７２ｈ分别对幼虫血淋巴进行酯酶同工酶（ＥＳＴ）电泳分析（Ｎａｔｉｖｅ－ＰＡＧＦ）。并用薄层扫描仪检测酶带的相对含量。染病幼虫血淋巴的一部分ＥＳＴ含量低于同期对照组，而另一部分却高于对照组；就谱带而言，某些样品酶带在感染后出现迁移率的变化，而有些则出现新的酶带，这二种变化均表现在某一特定的酶带上，提示该酶带在病毒感染的血淋巴病理生化方面可能具有特殊意义。

油桐尺蠖核型多角体病毒防治油桐尺蠖的研究

油桐尺蠖能被油桐尺蠖核型多角体病毒感染致死。防治试验表明:病毒浓度大时,潜伏期短,死亡快、死亡率大,浓度低时,潜伏期相应延长,死亡率也相应增大;不同的感染方式其致病力不同,死亡时间也不相同;在林地大面积防治效果为95％以上,并有远距离的扩散和后效作用。

原位化学切割法对油桐尺蠖核型多角体病毒两种相似多肽的比较研究

油桐尺蠖核型多角体病毒(BsNPV)自1978年分离以来,对其形态结构、形态发生、毒力测定、血清学、理化特性、安全性试验、剂型研究及大田应用等已进行了广泛的研究,其基因组物理图谱也已构建。采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)研究BsNPV蛋白质时发现,多角体蛋白与病毒粒子的一种主要蛋白质的分子量非常接近,