罕见A1Bw亚型伴不规则抗-B研究

准确鉴定献血者血型对临床血液正确发放和安全输血至关重要[1],输血前应正确鉴定供、受血者血型,而ABO亚型会使抗原抗体反应出现异常、减弱或消失,导致血型正反定型不符,定型出现困难[2]。由于ABO亚型很多,不同的ABO亚型常呈现独特的正反定型结果,笔者在血液检验工作中遇到1例A1Bw11亚型伴不规则抗-B标本,现报道如下。

两例ABO变异型Bw亚型的分子遗传学分析

目的研究ABO变异型Bw亚型的分子生物学特性。方法通过标准血型血清学方法鉴定2例Bw亚型，采用聚合酶链反应一序列特异性（polymerasechainreactioIsequencespecificprimer，PCR-SsP）技术进行ABO基因分型，特异性扩增B基因第6～7外显子，PCR产物纯化后直接测序分析。结果血清学鉴定2例Bw亚型，PCR-SSP结果显示样本基因型为B／（）2。B基因直接测序结果发现1例与B101序列比对第7外显子存在721C〉T突变，导致多肽链R241S替换；另1例与B101比对第6外显子存在278C〉T突变，导致多肽链P93L替换。结论发现Bw03、Bw12亚型各1例，其表达B抗原的强弱存在差异。

三例罕见ABO变异型Bw亚型的基因鉴定及序列分析

目的对3例ABO变异型Bw亚型进行基因鉴定及序列分析。方法采用常规血清学检测ABO血型,并应用Sanger测序进行ABO基因鉴定。结果3例ABO血型鉴定均符合Bw亚型,基因分型分别为ABO*Bw.11/0.01.02、ABO*Bw.12/0.01.01、ABO*Bw.34/A1.02,测序发现分别存在c.695T>C变异致多肽链Leu232Pro替换,c.278C>T变异致多肽链Pro93Leu替换,c.889G>A变异致多肽链Glu297Lys替换。结论本研究分别发现了Bw11、Bw12、Bw34亚型各一例。基因检测可作为血清学结果的补充确定ABO血型的亚型。

1例Bw11亚型的血型血清学及基因型分析

1900年奥地利科学家KARL LANDSTEINER发现了人类ABO血型系统,1990年YAMAMOTO等[1]首次成功克隆了人类ABO血型基因并进行了测序,这就标志着ABO血型鉴定进入了基因水平。ABO血型系统能引起溶血性输血反应、新生儿溶血等疾病,具有十分重要的临床意义,因此ABO血型鉴定至关重要,是输血安全的重要保障。除正常的ABO血型外,还存在一些抗原性减弱的亚型,至今已报道的A亚型有A1、A2、A3、Am、Aend、Ax、Ael、Ay、Aw等,B亚型有B1、B3、Bx、Bel、Bw、CisAB、B(A)等,目前常规的血型血清学检测技术还无法鉴定一些疑难血型,需要采用基因检测技术进行进一步的分析。

BW.03等位基因的鉴定及序列分析——附1例报告

目的对1例Bw血型的血清学及分子生物学特性进行分析。方法应用聚合酶链反应-序列特异性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)和ABO等位基因第6、7外显子PCR产物直接测序方法进行ABO亚型基因分型。结果先证者红细胞未检测到B抗原,但血清中含有抗-A。PCR-SSP结果显示标本基因型为B/O2。直接测序分析发现c.297A>G、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.721C>T、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A 8个突变,可推断为BW.03/O.02.01基因型。该序列与B.01基因序列比对仅在721位发生C>T的突变导致多肽链R241S替换。结论B等位基因c.721C>T突变产生BW.03等位基因,导致B抗原表达减弱。

ABO血液基因型引物特异性PCR体系的构建及在1个B_(w11)亚型家系分析中的应用

目的构建1个简单、有效,用于ABO基因分型的AS-PCR体系,及基于AS-PCR体系的PCR测序方法,并将此方案用于1个B亚型家系分析。方法参照ABO血液基因型cDNA的261,297,467和803位点,通过设计针对这些位点的AS-PCR引物构建可用于ABO血液基因型分型的AS-PCR体系,并将该AS-PCR体系应用于1个B亚型家系进行分析,并依据其分析结论设计PCR测序方法,以进行单体型分型。结果该家系成员母亲和两名子女的基因型分别为O01Bw11、O01Bw11和O02Bw11。结论 AS-PCR体系和PCR测序相结合的方案,操作简单、耗时短、结果准确,可用于ABO亚型的基因型分型。

Bw11亚型家系表现ABO等位基因竞争现象的研究

目的分析携带ABO*BW.11等位基因的家系成员ABO血清学和分子生物学特征。方法应用血清学方法检测先证者及其家系成员共9人的ABO血型表型。采用PCR方法扩增ABO基因第6、7外显子并对扩增产物直接测序,同时克隆测序先证者及其父亲的标本。结果血清学检测初步判断先证者及其弟弟为AB亚型,先证者的父亲及其两女儿为B亚型。克隆测序发现先证者ABO等位基因第7外显子在B101的基础上第695位碱基发生T>C变异,表明为ABO*BW.11等位基因。先证者的父亲、弟弟及其两个女儿均携带该变异等位基因。A基因与BW.11以及BW.11与O基因同时遗传时竞争现象存在明显差异。结论ABO基因c.695T>C变异可能会导致Bw11亚型存在等位基因竞争现象。分子生物学方法结合血清学方法有助于精准鉴定ABO疑难血型。

ABO血型变异与B糖基转移酶关系研究

目的研究ABO血型B亚型系统Bw亚型与B糖基转移酶的关系。方法运用血型血清学鉴定方法鉴定1个家庭2例ABO血型的Bw亚型,运用聚合酶链式反应的方法扩增糖基转移酶1~7号外显子,送到试剂公司测序。结果直接测序发现2例ABO血型的Bw亚型,其中B糖基转移酶基因第721位C>T的转变,导致糖基转移酶多肽链Arg241Trp的转变。结论糖基转移酶基因第721位的C>T的突变引起糖基转移酶活性的消失或者减弱,导致Bw亚型。

一例Bw11亚型的鉴定及分子生物学分析

目的分析一例Bw11亚型的血清学和分子生物学特征。方法应用经典试管法、微柱凝胶法和吸收放散法检测ABO抗原和血清中存在的ABO抗体。应用序列特异引物(sequence-specific primer,SSP)引导的聚合酶链反应进行ABO基因分型,进一步测序分析ABO基因第1~7外显子核苷酸序列,对发生变异外显子进行单倍型分析。结果微柱凝胶法正反定型相符提示为O型;经典试管法正反定型不符;吸收放散实验证实存在B抗原;抗体筛查排除同种抗体存在。SSP基因分型为B/O1;第6、7外显子测序与B101/O01基因序列比对存在第7外显子695T>C变异,导致232位亮氨酸转变为脯氨酸,证实为Bw11/O1杂合子。结论nt695T>C变异可能是导致B抗原减弱的分子遗传机制。Bw11亚型可能存在较强抗B抗体,人源及部分单克隆试剂不能检测出Bw11亚型易被误判为O型,应用分子生物学方法有助于ABO亚型的准确鉴定。

1例B亚型的血型鉴定及其输血策略探究

目的:研究1例正反定型不对照的B亚型患者的血清学和分子生物学特征。方法:取患者的静脉血进行正反定型、吸收放散实验、不规则抗体筛查及唾液物质检测等一系列血清学检验,并通过PCR-SSP方法基因分型,最终经DNA测序第6和第7外显子明确亚型种类。结果:血清学检测提示为弱B亚型,PCR-SSP分型为BO1,DNA测序显示与B101序列相比发生nt695位T/C点突变,232位亮氨酸突变为脯氨酸(L232P),国际命名为Bw11亚型。据此结果指导临床用血。结论:检测到1例Bw11亚型,加强围术期血液管理,减少血液丢失及异体血输入,为临床安全用血提供相应的经验参考。

ABO*BW.03等位基因的鉴定及特性研究

目的探讨1例ABO正反定型不符,B抗原表达减弱样本的血清学及分子生物学特性。方法使用常规血型血清学方法鉴定样本的ABO血型表型;PCR方法扩增ABO基因7个外显子及其侧翼内含子,对扩增产物进行直接测序和克隆测序进行分析。结果血清学定型:AB_(弱)表型;直接测序:ABO*A1.02/B.01杂合,伴c.721C/T突变;克隆测序:c.467C>T、c.297A>G、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.721C>T、c.796C>A、c.803G>C和c.930G>A 9个突变,判定为ABO*A1.02/BW.03基因型。该例ABO正反定型不符样本是由ABO*B_(W).03等位基因导致的。结论ABO*B.01等位基因上c.721C>T的突变可以产生ABO*BW.03等位基因,从而导致红细胞上B抗原的表达减弱。ABO亚型的鉴定分析要慎重,必要时应用血型基因分型技术辅助定型,保障输血安全。

ABO亚型分析及基因测序研究方法的建立

目的:建立一种ABO血型基因的测序检测方法,对ABO血型的基因突变位点进行分析,并对ABO亚型进行准确分型。方法:采用PCR-序列特异性引物(PCR-SSP)技术,选取特异性引物对ABO基因的第6、7外显子及第6内含子进行扩增,并用PCR直接测序方法对该序列进行分析,在此基础之上,用该方法对经血清学鉴定为亚型的样本进行检测。结果:建立的PCR产物直接测序方法,能够准确的对ABO基因的第6、7外显子序列进行分析,并通过此方法鉴定了1例B亚型,其基因型为B/O杂合,其中α-1,3半乳糖基转移酶基因在第7外显子上发生第721位C>T突变,导致了多肽链Arg241Trp的替换。结论:建立了一种ABO血型基因产物的PCR直接测序方法,并对ABO亚型进行了分析,为以后血型鉴定及其亚型分子机制的研究奠定了基础。

一例ABO变异型Bw37等位基因的鉴定

目的对一例罕见的ABO变异型Bw37等位基因进行鉴定及测序,探讨其分子机制。方法采用试管凝集法鉴定ABO正反血型,用序列特异性引物-聚合酶链反应(polymerase chain reaction-sequence specific primer,PCR-SSP)法进行ABO基因分型,直接测定ABO基因第6、7外显子的核苷酸序列并对结果进行分析。结果先证者血清学鉴定ABO正定型为B弱、反定型为B型。ABO基因分型为B/B。第6、7外显子测序提示存在c.297A>G、c.526C>G、c.657C>T、c.703G>A、c.796 C>A、c.803G>C、c.930G>A变异,导致p.R176G、p.G235S、p.G268A氨基酸改变。ABO血型基因型为ABO*Bw37/B101。其母亲ABO正反定型均为O型,ABO血型基因型为ABO*O.01.02/ABO*O.01.01。结论采用常规血型血清学结合基因分型技术对一例ABO亚型Bw37进行了鉴定。