甲状腺乳头状癌组织中miR-338-3p、PLCD3表达及其与病理参数、上皮—间质转化、预后的关系

目的探讨甲状腺乳头状癌(PTC)组织中微小核糖核酸-338-3p(miR-338-3p)、磷脂酶Cδ-3(PLCD3)表达及与病理参数、上皮—间质转化(EMT)、预后的关系。方法选取2016年1月—2020年12月商洛市中心医院乳甲外科收治接受手术切除的PTC患者152例,取其癌组织及对应癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应检测miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达,免疫组织化学法检测EMT相关蛋白[N-钙黏蛋白(N-Cad)、E-钙黏蛋白(E-Cad)、波形蛋白(VIM)];分析miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达与PTC病理参数的关系;通过Targetscan数据库预测miR-338-3p与PLCD3的结合位点,采用Pearson法和二列相关性分析miR-338-3p与PLCD3 mRNA及二者与EMT相关蛋白在PTC组织中表达的相关性;根据PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达均值分为高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达组,通过Kaplan-Meier法绘制高/低miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达PTC患者无病生存率(DFS)生存曲线;通过Cox回归分析PTC患者DFS的影响因素。结果与癌旁组织比较,PTC组织miR-338-3p和E-Cad蛋白阳性表达率降低,PLCD3 mRNA和N-Cad、VIM蛋白阳性表达率升高(t/χ^(2)/P=32.875/<0.001、15.575/<0.001、37.351/<0.001、21.984/<0.001、16.604/<0.001);miR-338-3p与PLCD3 mRNA在PTC组织中表达呈负相关(r/P=-0.712/<0.001)。PTC组织中miR-338-3p与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈负相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈正相关(r/P=-0.642/<0.001、-0.617/<0.001、0.622/<0.001);PTC组织中PLCD3 mRNA与N-Cad、VIM蛋白阳性表达呈正相关,与E-Cad蛋白阳性表达呈负相关(r/P=0.657/<0.001、0.624/<0.001、-0.632/<0.001)。不同TNM分期、淋巴结转移的PTC组织miR-338-3p、PLCD3 mRNA表达差异有统计学意义(F/t/P=30.778/<0.001、3.430/0.001)。miR-338-3p高表达组3年DFS高于低表达组,PLCD3 mRNA高表达组3年DFS低于低表达组(χ^(2)/P=15.615/<0.001、16.088/<0.001)。TNM分期Ⅲ期、淋巴结转移、PLCD3 mRNA≥1.83为PTC患者DFS的独立危险因素[HR(95%CI)=3.127(1.361~7.604)、2.546(1.115~5.817)、2.854(1.178~6.919)],miR-338-3p≥0.57为独立保护因素[HR(95%CI)=0.306(0.116~0.804)]。结论PTC组织中miR-338-3p低表达和PLCD3 mRNA高表达,与TNM分期、淋巴结转移、EMT和预后有关,可能成为PTC诊治新靶点。

LncRNA SNHG16调节miR-212-3p/FAM3C轴对食管癌细胞增殖迁移和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码小核仁RNA宿主基因16(LncRNA SNHG16)靶向微小RNA-212-3p(miR-212-3p)/序列相似家族3成员C(FAM3C)轴对食管癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法:体外培养人食管癌细胞KYSE-510作为研究对象,将其分为对照组、si-NC组、si-SNHG16组、si-SNHG16+inhibitor NC组、si-SNHG16+miR-212-3p inhibitor组。各组细胞LncRNA SNHG16,miR-212-3p、FAM3C mRNA表达的检测用RT-qPCR法;用CCK-8试剂盒检测KYSE-510细胞增殖,用流式细胞术检测KYSE-510细胞凋亡,用划痕实验检测KYSE-510细胞迁移,用Transwell法检测KYSE-510细胞侵袭,双荧光素酶报告实验验证LncRNA SNHG16与miR-212-3p及miR-212-3p与FAM3C之间的靶向关系。结果:与对照组和si-NC组相比,si-SNHG16组中LncRNA SNHG16、FAM3C mRNA水平、OD值、划痕愈合率、细胞侵袭数降低,miR-212-3p水平、细胞凋亡率升高(P<0.05);与si-SNHG16+inhibitor NC组相比,si-SNHG16+miR-212-3p inhibitor组中miR-212-3p水平、细胞凋亡率降低、FAM3C mRNA水平、OD值、划痕愈合率、细胞侵袭数升高(P<0.05),而LncRNA SNHG16水平无差异(P>0.05);生物学信息网站预测miR-212-3p与LncRNA SNHG16和FAM3C均存在靶向结合位,且双荧光素酶报告基因实验验证了LncRNA SNHG16与miR-212-3p、miR-212-3p与FAM3C之间均存在靶向关系(P<0.05)。结论:在食管癌中LncRNA SNHG16表达上调,敲低LncRNA SNHG16的表达可靶向上调miR-212-3p,抑制FAM3C的表达,进而抑制食管癌细胞增殖、迁移和侵袭,促进食管癌细胞的凋亡。

电针关元穴经微RNA-199a-3p调控c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用

目的探讨电针关元穴经miRNA-199a-3p调控酪氨酸激酶受体c-kit/ERK通路对神经源性尿潴留大鼠的治疗作用。方法采用改良脊髓横断法建立神经源性尿潴留大鼠模型60只,按随机数字表法平均分为5组:模型组、电针组、miRNA-199a-3p抑制剂组、miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组,另选取SD大鼠12只作为假手术组。使用药物分组干预处理后,检测大鼠尿动力学,比较各组大鼠膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力;采用肌条实验检测大鼠逼尿肌兴奋性,比较各组肌条自发性收缩频率;采用H-E染色观察各组大鼠膀胱组织病理形态改变;用试剂盒测定各组大鼠血清炎症细胞因子环氧化酶2(COX-2)、IL-18、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平;采用qPCR检测各组大鼠膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平;采用蛋白质印迹法检测各组大鼠膀胱组织c-kit/ERK通路蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠膀胱组织呈现严重病理损伤改变,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织磷酸化(p)-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组、电针+miRNA-199a-3p抑制剂组相比,电针组大鼠膀胱组织病理损伤减轻,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均降低(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平、膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均升高(P均<0.05);miRNA-199a-3p抑制剂组大鼠膀胱组织病理损伤均加重,膀胱最大容量、膀胱基础压、漏尿点压力及血清COX-2、IL-18、iNOS水平均升高(P均<0.05),肌条自发性收缩频率、膀胱组织miRNA-199a-3p与c-kit mRNA表达水平及膀胱组织p-ERK/ERK与c-kit表达水平均降低(P均<0.05)。与模型组相比,miRNA-199a-3p抑制剂阴性对照组大鼠各指标水平差异无统计学意义(P均>0.05)。结论电针关元穴可通过上调miRNA-199a-3p表达激活c-kit/ERK通路,减轻神经源性尿潴留大鼠膀胱组织炎症损伤,增强逼尿肌兴奋性,修复膀胱功能,改善尿潴留症状。

针灸调节miR-221-3p/CCR5轴对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响

目的:观察针灸调节miR-221-3p/CCR5轴对缺血性脑卒中大鼠神经炎症的影响。方法:采用改良线栓法构建缺血性脑卒中大鼠模型,随机分为模型组、针灸组、miR-221-3p antagomir(拮抗剂)组、miR-221-3p antagomir阴性对照组、针灸+miR-221-3p antagomir组,每组12只;另取12只SD大鼠只分离颈动脉,不结扎、不插线,作为假手术组。大鼠分组以针灸疗法及miR-221-3p antagomir、miR-221-3p antagomir阴性对照处理后,采用Y迷宫实验及跳台实验测定各组大鼠学习记忆能力;对各组大鼠进行神经功能缺损评分并采用苏木精-伊红(HE)染色检测各组大鼠海马神经元形态;采用三苯基氯化四氮唑(TTC)染色检测各组大鼠脑梗死情况;采用酶标仪检测各组大鼠脑组织促炎因子白细胞介素(IL)-17、IL-18及抑炎因子IL-10水平;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各组大鼠脑组织miR-221-3p、CCR5 mRNA表达;采用双荧光素酶实验检测大鼠海马神经元中miR-221-3p对CCR5的靶向调节。结果:与假手术组比较,模型组大鼠海马神经元发生明显病理损伤,新异臂进入次数、新异臂停留时间比、跳台实验潜伏期、脑组织IL-10水平及miR-221-3p mRNA表达降低(P<0.05),跳台实验犯错次数、神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IL-17、IL-18水平及CCR5 mRNA表达升高(P<0.05)。与模型组比较,针灸组大鼠海马神经元病理损伤明显减轻,新异臂进入次数、新异臂停留时间比、跳台实验潜伏期、脑组织IL-10水平及miR-221-3p mRNA表达升高(P<0.05),跳台实验犯错次数、神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IL-17、IL-18水平及CCR5 mRNA表达降低(P<0.05);与针灸组比较,miR-221-3p antagomir组大鼠海马神经元病理损伤加重,新异臂进入次数、新异臂停留时间比、跳台实验潜伏期、脑组织IL-10水平及miR-221-3p mRNA表达降低(P<0.05),跳台实验犯错次数、神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IL-17、IL-18水平及CCR5 mRNA表达升高(P<0.05)。与针灸组比较,针灸+miR-221-3p antagomir组大鼠海马神经元病理损伤加重,新异臂进入次数、新异臂停留时间比、跳台实验潜伏期、脑组织IL-10水平及miR-221-3p mRNA表达降低(P<0.05),跳台实验犯错次数、神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IL-17、IL-18水平及CCR5 mRNA表达升高(P<0.05)。与miR-221-3p antagomir组比较,针灸+miR-221-3p antagomir组大鼠海马神经元病理损伤减轻,新异臂进入次数、新异臂停留时间比、跳台实验潜伏期、脑组织IL-10水平及miR-221-3p mRNA表达升高(P<0.05),跳台实验犯错次数、神经功能缺损评分、脑梗死面积、脑组织IL-17、IL-18水平及CCR5 mRNA表达降低(P<0.05)。大鼠海马神经元中miR-221-3p靶向下调CCR5的表达。结论:针灸通过上调miR-221-3p表达进而抑制CCR5表达,可减轻缺血性脑卒中大鼠神经炎症,增强学习记忆能力,改善神经功能损伤。

微RNA-124-3p在溃疡性结肠炎病人外周血中的表达及意义

目的检测溃疡性结肠炎(UC)病人外周血中微RNA-124-3p(miR-124-3p)的表达水平,并讨论其临床意义。方法选择121例UC病人(UC组)和60例健康体检者(对照组)作为研究对象进行前瞻性研究,UC组来源于2019年8月至2021年8月期间武汉市蔡甸区人民医院住院治疗的病人,对照组为同期来院进行健康体检的个体。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-124-3p在各组外周血中的表达水平,酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测C-反应蛋白(CRP)在各组外周血中的表达水平。UC活动期病人外周血miR-124-3p表达水平与CRP水平的相关性采用Pearson法,与UC内镜严重指数(UCEIS)评分、改良梅奥(Mayo)评分的相关性分析采用Spearman法。结果与对照组相比,UC组病人外周血中miR-124-3p的表达水平显著降低(0.84±0.22比0.52±0.17,P<0.05),CRP水平显著升高[(7.08±2.52)mg/L比(9.83±2.91)mg/L,P<0.05]。与UC缓解期病人相比,活动期病人外周血中miR-124-3p的表达水平显著降低(0.67±0.22比0.44±0.14,P<0.05),CRP水平显著升高[(9.06±2.85)mg/L比(10.25±2.94)mg/L,P<0.05]。UC不同临床活动度病人外周血miR-124-3p表达水平由高至低依次为轻度(0.53±0.16)、中度(0.45±0.13)、重度(0.30±0.09),CRP表达水平及UCEIS评分、改良Mayo评分由高至低依次为重度[(12.03±3.02)mg/L、(5.97±1.82)分、(11.53±0.46)分]、中度[(10.35±2.79)mg/L、(4.82±1.51)分、(7.70±1.64)分)]、轻度[(8.74±2.83)mg/L、(3.03±0.90)分、(3.98±0.95)分],组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。UC活动期病人外周血miR-124-3p表达水平与CRP、UCEIS评分及改良Mayo评分均呈负相关(r=−0.57、−0.44、−0.59,P<0.05)。结论UC病人外周血miR-124-3p表达水平降低,其水平变化与UC疾病活动和病情程度密切相关。

C（^3P）与H2S反应的反应机理

The mechanisms of the C(3P)+H 2SHCS+H and C(3P)+H 2S → HSC+H reactions have been studied at the UMP2/631G(d,p),UMP2/6311G(d,p),and G2 levels,and six transition states and three intermediates have been located along the reaction paths. The predicted path for the C(3P)+H 2SHCS+H reaction is:C(3P)+H 2SIM1TS1IM2TS4HCS+H,in line with the reaction process suggested by Lee et al. [1] in which only the intermediates were given. Our energetic results indicate that the C(3P)+H 2SHCS+H reaction is more favorable than the C(3P)+H 2SHSC+H reaction,in agreement with experiment.

miR-455-3p靶向调控VEGF-C对矽肺淋巴管增生的影响

目的探究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)在大鼠矽肺模型淋巴管增生中的调控作用,并探讨miR-455-3p靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响。方法将大鼠随机分为矽肺模型组和正常对照组,矽肺模型组气管内滴注二氧化硅(SiO 2)悬浊液,对照组滴注等量0.9%氯化钠溶液,采用HE、Masson、免疫组织化学染色观察肺组织病理改变及淋巴管增生情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织内miR-455-3p、VEGF-C表达水平;将miR-455-3p抑制剂(Inhibitors)及其阴性对照(NC)转染至HLECs中,RT-qPCR和Western blot检测细胞内miR-455-3p、VEGF-C表达水平,划痕实验检测HLECs迁移能力,基质胶管形成实验检测管状结构形成能力,双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p和VEGF-C的靶向关系。结果与正常对照组比较,大鼠矽肺模型组肺间质内大量炎性细胞聚集,胶原逐渐沉积,且肺内淋巴管增生,肺组织内miR-455-3p表达水平低于对照组,VEGF-C表达水平高于对照组;HLECs转染后,与NC组比较,Inhibitors组细胞内miR-455-3p表达水平降低,VEGF-C水平升高,细胞迁移能力及管状结构形成能力增强(P<0.05);双荧光素酶报告基因证实VEGF-C为miR-455-3p的靶基因。结论miR-455-3p可通过靶向调控VEGF-C表达从而影响HLECs的管状结构形成能力,调节淋巴管增生。

血浆miR-223-3p,PCT,IL-6和CRP水平联合检测对脓毒症实验诊断及预后的价值研究

目的探讨微小核糖核酸-223-3p(miR223-3p)联合降钙素原(PCT)、白细胞介素-6(IL-6)及C反应蛋白(CRP)对脓毒症诊断及预后预测的意义。方法选取2018年1月~2020年10月三亚市中医院和三亚中心医院收治的脓毒症患者146例,根据患者28天的生存情况,将其分为存活组(n=101)和死亡组(n=45)。选取同期60例体检健康者作为对照组。检测各组血浆miR-223-3p,PCT,IL-6及CRP水平。应用受试者工作特征(ROC)曲线分析miR-223-3p联合PCT,IL-6及CRP对脓毒症诊断及预后预测的价值。结果脓毒症组血浆miR-223-3p(2.15±0.92 vs 0.37±0.08),PCT(13.50±6.48 ng/ml vs 0.02±0.01ng/ml),IL-6(74.12±15.70 pg/ml vs 5.37±1.45pg/ml)及CRP(37.26±10.15 mg/L vs 3.82±1.46mg/L)水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(t=8.783~14.620,P<0.001)。死亡组血浆miR-223-3p(3.04±1.16 vs 1.31±0.50),PCT(21.28±10.28 ng/ml vs 6.72±3.15ng/ml),IL-6(102.83±21.75 pg/ml vs 56.17±10.20pg/ml)及CRP(56.40±15.30mg/L vs 25.75±8.24mg/L)水平均明显高于存活组,差异均有统计学意义(t=7.415~16.317,均P<0.001)。ROC曲线分析显示,miR-223-3p联合PCT,IL-6及CRP诊断脓毒症的曲线下面积最大(0.905,95%CI:0.847~0.968),其敏感度和特异度分别为92.0%和83.4%;miR-223-3p联合PCT,IL-6及CRP预测脓毒症患者死亡的曲线下面积最大(0.933,95%CI:0.875~0.990),其敏感度和特异度为分别95.3%和87.5%。相关性分析显示,脓毒症患者血浆miR-223-3p表达水平与PCT,IL-6及CRP均呈正相关性(r=0.825,0.792,0.753,均P<0.001)。结论脓毒症患者血浆miR-223-3p表达水平明显升高,联合PCT,IL-6及CRP检测对脓毒症的诊断及预后预测具有良好的价值。

氧原子（^3P）与环己酮反应速率常数研究

碳氢化合物被NO_x光氧化过程中会产生中间物质酮类化合物,与烷烃、烯烃不同的是,这类化合物与大气化学中感兴趣的自由基,如O、OH等的基元反应研究得不多。除有少量关于O(~3p)与丙酮反应速率常数测定的报道外,前文还报道了O(~3p)与丁酮反应速率常数的测定,并得出该反应速率常数与温度关系的Arrhenius表达式。

血清HMGB1 miR-200c-3p及cTnⅠ水平对新生儿呼吸窘迫综合征预后的预测价值

目的:探究血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平对新生儿呼吸窘迫综合征预后的预测价值。方法:选取2016年1月至2019年12月本院收治的NRDS患儿120例,根据患者病情分为轻度组(胸片结果为Ⅰ、Ⅱ级)、重度组(胸片结果为Ⅲ、Ⅳ级),各72、48例。另选取同期本院产科出生正常新生儿40例为对照组。对比三组血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平差异,并进行预后预测。结果:三组血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平重度组>轻度组>对照组(P<0.05)。住院期间,120例NRDS患者共34例(28.33%)死亡,86例(71.67%)存活。两组患者的年龄、性别、出生体重、母亲年龄、剖宫产、出现呼吸困难时间、母亲糖尿病、母亲高血压、胎粪吸入、宫内窘迫、新生儿窒息、等相比较均无明显差异(P>0.05),但两组在病情、HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平的差异间具有统计学意义(P<0.05),ROC曲线分析显示,HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平对NRDS患者的预测的AUC为0.933、0.892、0.766,具有较高准确性;以ROC曲线靠左上方约登指数的最大切点作为最佳临界值,该点预测,HMGB1、miR-200c-3p、cTnⅠ水平敏感度、特异度:为91.2%82.4%/50.0%、91.9%/100.0%100.0%,预测具有较高价值。三项联合预测AUC为0.925,敏感度、特异度为85.3%、98.8%,预测价值较高。结论:血清HMGB1、miR-200c-3p及cTnⅠ水平在NRDS患儿中呈高表达,且与病情程度相关密切,具有较高的预后预测评估价值。

MiR-221-3p调控c-Fos/beclin-1对大鼠冠状动脉微栓塞后心肌细胞自噬的影响

目的:探究miR-221-3p介导的c-Fos/beclin-1信号通路在大鼠冠状动脉微栓塞(CME)后对心肌细胞自噬的影响及意义。方法:将24只SD大鼠按随机数字表法分为Sham组(假手术组)、CME组(微栓塞组)、CME+shRNA组(CME+AAV9-miR-221-3p shRNA组)和CME+NC组(CME+AAV9-Control shRNA组),每组6只。经左心室注入微栓塞球建立CME模型,Sham组用等量生理盐水代替。各组术后9 h行心脏超声及心肌肌钙蛋白(IcTn-I)检测;组织取材做苏木精碱性复红苦味酸染色(HBFP)、透射电镜(TEM)、免疫荧光以及实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹(Western blot)等评估miR-221-3p介导的c-Fos/beclin-1信号通路在功能、形态和分子方面对CME的影响。结果:CME后心肌细胞中miR-221-3p表达升高,与Sham组相比,心脏功能抑制,cTn-I及心肌微梗死面积明显升高,c-Fos、beclin-1以及自噬指标LC3-Ⅱ蛋白表达降低(P<0.05)。下调miR-221-3p后,与CME组相比,cTn-I及心肌梗死面积显著下降(P<0.05),c-Fos、beclin-1以及LC3-Ⅱ蛋白表达增加(P<0.05),TEM提示自噬泡的双层膜结构数量增加,自噬部分恢复,心肌损伤减轻,心脏功能改善。结论:抑制miR-221-3p可改善大鼠CME后心脏功能,其可能通过c-Fos/beclin-1途径调节心肌自噬参与CME后诱导的心肌损伤。

miR⁃143⁃3p通过调控CX3CL1/CX3CR1信号通路对脂多糖诱导肺泡上皮细胞损伤的影响

目的探讨miR⁃143⁃3p通过调控趋化因子(C⁃X3⁃C基元)配体1/趋化因子(C⁃X3⁃C基元)受体1(CX3CL1/CX3CR1)信号通路对脂多糖(LPS)诱导肺泡上皮细胞损伤的影响。方法收集急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征(ALI/ARDS)患者及健康体检者外周血血清,标记为ALI/ARDS组和Normal组。双荧光素酶实验证实miR⁃143⁃3p与CX3CL1的靶向关系。体外培养人肺泡上皮细胞A549,并将细胞分成Con⁃trol组、LPS组、LPS+NC mimic组(转染NC mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic组(转染miR⁃143⁃3p mimic)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pcDNA组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pcDNA)、LPS+miR⁃143⁃3p mimic+pc⁃CX3CL1组(共转染miR⁃143⁃3p mimic和pc⁃CX3CL1)。qRT⁃PCR检测miR⁃143⁃3p和CX3CL1、CX3CR1 mRNA表达水平;Western blot检测CX3CL1、CX3CR1蛋白表达;MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡;ELISA分析肿瘤坏死因子⁃α(TNF⁃α)、白介素⁃1β(IL⁃1β)、白介素⁃6(IL⁃6)、血管内皮生长因子(VEGF)和降钙素原(PCT)水平。结果与Normal组相比,ALI/ARDS组患者外周血中miR⁃143⁃3p表达(0.52±0.05)降低,CX3CL1、CX3CR1的mRNA(1.79±0.08)、(1.65±0.06)和蛋白(1.03±0.15)、(0.98±0.12)表达升高(P<0.05)。与Control组比较,LPS组A549细胞中miR⁃143⁃3p表达减小,细胞活力降低,凋亡率[(23.56±0.85)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量增加(P<0.05)。miR⁃143⁃3p过表达后,细胞活力升高,凋亡率[(13.74±0.69)%]及TNF⁃α、IL⁃1β、IL⁃6、VEGF、PCT含量降低(P<0.05)。双荧光素酶实验结果显示,miR⁃143⁃3p直接负调控CX3CL1表达。CX3CL1过表达可明显逆转miR⁃143⁃3p过表达对LPS诱导的A549细胞损伤的影响和对CX3CR1 mRNA和蛋白表达的抑制作用(P<0.05)。结论miR⁃143⁃3p通过抑制CX3CL1/CX3CR1信号通路,减轻LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤。

微小RNA-3680-3p在肾癌组织中的表达及对人肾癌细胞ACHN迁移和增殖的影响

目的观察微小RNA-3680-3p(miR-3680-3p)在肾癌组织中的表达及其对人肾癌细胞ACHN迁移和增殖的影响,并分析其作用机制。方法实时定量PCR(q PCR)检测16例肾癌及癌旁组织miR-3680-3p表达量。分别以阴性对照慢病毒和携带miR-3680-3p的慢病毒感染ACHN细胞,分为对照组和实验组。生物信息学预测miR-3680-3p的靶基因。双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-3680-3p与靶基因的结合。q PCR和Western blot检测ACHN细胞中靶基因的表达水平。Transwell实验和MTT法分别检测ACHN细胞的迁移和增殖能力。结果 miR-3680-3p在肾癌组织和癌旁组织的表达分别为1. 58±0. 15和3. 44±0. 11(P <0. 01)。生物信息学预测显示,miR-3680-3p的靶基因是血管内皮生长因子C(VEGF-C)。双荧光素酶报告基因检测实验验证miR-3680-3p可靶向结合VEGF-C mRNA 3'非翻译区。在ACHN细胞株过表达miR-3680-3p可明显抑制VEGF-C基因的表达(P <0. 01)。对照组和实验组穿膜细胞数分别为166. 90±22. 81和51. 43±11. 57,两组间差异有统计学意义(P <0. 01)。实验组ACHN细胞的增殖能力明显被抑制(P <0. 05)。结论 miR-3680-3p在肾癌中表达显著下调,过表达miR-3680-3p可通过降低VEGF-C基因,明显抑制细胞迁移和增殖能力,可能为未来肾癌的治疗提供新的分子靶点。

C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7在子宫内膜癌组织中的表达及相关性研究

目的分析C-erbB-2、微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)、膜联蛋白A7(ANXA7)在子宫内膜癌组织中的表达及相关性。方法选取2019年11月至2020年11月青岛滨海学院附属医院与德州市妇幼保健院病理科归档的资料齐全完整的75例子宫内膜癌组织石蜡标本和距离癌组织边缘5cm的癌旁组织石蜡标本作为研究对象。采用免疫组化法检测C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7的表达,分析C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7在子宫内膜癌进展过程中的表达变化及三者相关性。结果与癌旁组织相比,癌组织中C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7表达量升高(P<0.05)。C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7表达与子宫内膜癌患者肿瘤直径无关,与TNM分期、分化程度、淋巴结转移、肌层浸润深度相关,Ⅲ~Ⅳ期、中低分化、有淋巴结转移、≥1/2肌层浸润子宫内膜癌患者C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7表达升高(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,C-erbB-2与miR-103a-3p的表达量存在正相关(r=0.564,P=0.001);C-erbB-2与ANXA7的表达量存在正相关(r=0.676,P=0.001);miR-103a-3p与ANXA7的表达量存在正相关(r=0.577,P=0.001)。结论C-erbB-2、miR-103a-3p、ANXA7在子宫内膜癌组织中高表达,随着疾病的进展表达升高,三者可能共同参与此病的发生发展。

涎腺腺样囊性癌中miR-22-3p 的表达及与VEGF-C和MLVD的关系

目的检测涎腺腺样囊性癌中微小RNA-22-3p(miR-22-3p)的表达,探讨其临床意义及与血管内皮生长因子-C(VEGF-C)和微淋巴管密度(MLVD)的关系。方法选取我院2011年1月~2014年7月收治的61例涎腺腺样囊性癌患者为研究对象,留取肿瘤组织(观察组)和距肿物边缘>2 cm的正常涎腺组织(对照组)。应用实时荧光定量PCR法检测两组中miR-22-3p的表达,免疫组化方法检测观察组中VEGF-C和D2-40的表达,Western Blot法检测观察组中VEGF-C的表达。结果观察组中miR-22-3p的表达明显低于对照组,且观察组中miR-22-3p的表达在不同肿瘤直径、血管淋巴管累犯、有无远处转移、淋巴结转移和不同TNM分期中差异均有统计学意义(均P<0.05),而在不同性别、年龄、神经累犯中差异均无统计学意义(均P>0.05)。生存分析显示,miR-22-3p低表达患者的生存时间短。miR-22-3p与VEGF-C、MLVD呈负相关。结论miR-22-3p在涎腺腺样囊性癌中低表达,可能与病变的进展及淋巴管生成有关。miR-22-3p可能是涎腺腺样囊性癌独立的预后因子。

慢性丙型肝炎患者血清microRNA-1273g-3p水平预测肝硬化价值分析

目的探讨慢性丙型肝炎(CHC)患者血清microRNA-1273g-3p水平预测发生肝硬化的价值。方法2018年3月~2020年8月我院收治的CHC患者125例,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测外周血microRNA-1273g-3p水平。应用Logistic回归分析CHC患者发生肝硬化的影响因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC),计算曲线下面积,评估血清microRNA-1273g-3p水平预测CHC患者发生肝硬化的价值。结果在本组125例CHC患者中,发现肝硬化42例(33.6%);肝硬化组BMI高、有输血史、血脂异常、未抗病毒治疗和血清microRNA-1273g-3p水平与CHC患者比,差异显著(P均<0.05),肝硬化组病程为(12.4±2.7)年,显著长于CHC组[(8.2±2.1)年,P<0.01],肝硬化组血清microRNA-1273g-3p水平为(2.1±0.5),显著高于CHC组[(1.3±0.3),P<0.01];经Logistic回归分析发现,以上因素均为影响CHC患者发生肝硬化的独立危险因素;经ROC分析显示,以血清microRNA-1273g-3p水平1.56为最佳截断点,其AUC值为0.844(95%CI:0.768~0.902),预测CHC患者发生肝硬化的灵敏度为78.6%(33/42,95%CI:73.1%~83.2%),特异度为86.8%(72/83,95%CI:82.5%~90.6%),准确度为90.4%(113/125,95%CI:73.1%~83.2%)。结论检测血清microRNA-1273g-3p水平可能帮助预测CHC患者发生肝硬化,对及时诊治和管理具有一定的临床意义。

急性脑梗死患者血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP的变化特点及临床意义

目的探讨急性脑梗死(acute cerebral infarction,ACI)患者的血清微小RNA(MicroRNA,miR)-151a-3p、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、超敏C反应蛋白(high sensitivity C reactive protein,hs-CRP)变化特点及其与病情间的相关性。方法选取我院收治的ACI患者140例(ACI组)和健康体检者70例(对照组),检测两组的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平,并分析这些指标与ACI患者美国国立卫生研究院卒中量表(National Institute of Health stroke scale,NIHSS)评分间的关系。结果ACI组的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);重型ACI组患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平均显著的高于轻型组及中型ACI组,差异有统计学意义(P<0.05);中型ACI组患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平均显著高于轻型ACI组,差异具有统计学意义(P<0.05)。ACI组患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平与其NIHSS评分间均呈显著正相关性(P<0.05)。多元线性回归模型显示,miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP、TG、血糖水平升高是ACI患者NIHSS评分增高的独立危险因素(P<0.05)。结论ACI患者的血清miR-151a-3p、MMP-9、hs-CRP水平显著高于健康人群,且与ACI患者神经功能受损程度有一定的相关性。

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制。方法收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织。使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达。体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组。在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达。结果卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05)。miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05)。结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控VEGF-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关。

慢性丙型肝炎外周血miR-1273g-3p水平变化及其诊断肝纤维化分期的效能分析

目的探讨检测血清miR-1273g-3p水平诊断慢性丙型肝炎(CHC)患者肝纤维化分期的效能。方法我院诊治的57例CHC患者和同期入选的21例经体检显示为正常的健康人,采用实时荧光定量PCR法检测血清miR-1273g-3p水平。CHC患者接受长效干扰素α2b联合利巴韦林标准疗法治疗12 m,并接受肝穿刺活检行组织病理学检查。结果 13例肝组织呈F0期患者血清miR-1273g-3p相对水平为(1.02±0.3),20例F1-2期患者为(1.68±0.26),24例F3-4期患者为(4.21±0.42),存在肝纤维化的CHC患者血清miR-1273g-3p相对水平显著高于健康人【(1.03±0.2),P<0.05】;在抗病毒治疗12 m末,CHC F0期、F1-2期和F3-4期患者血清miR-1273g-3p相对水平依次变化为(1.03±0.4)、(1.43±0.22)和(3.97±0.2),均显著低于治疗前(P<0.05);在治疗前,分别以血清miR-1273g-3p水平>1.68和血清miR-1273g-3p水平>4.20为截断点诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化,其ROC曲线下面积(AUC)分别为0.830,95%CI为0.714～0.973,诊断的灵敏度为72.2%,特异度为86.4%,和0.864,95%CI为0.701～0.976,诊断的灵敏度为83.6%,特异度为78.4%;在治疗后,经肝组织病理学检查发现CHC患者F0期、F1期、F2期、F3、F4期依次为15例、9例、14例、11例、8例,血清miR-1273g-3p水平诊断存在肝纤维化和显著肝纤维化的效能仍然较好。结论血清miR-1273g-3p水平随着CHC患者肝纤维化进展而逐渐升高,在抗病毒治疗后,随着肝纤维化的缓解而降低,因而具有一定的判断肝纤维化程度的效能,值得进一步研究。

miR-505-3p对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响及机制研究

目的检测胃癌组织及细胞中miR-505-3p表达,并探究其对胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭的影响及潜在分子机制。方法利用实时荧光定量PCR实验(qRT-PCR)检测胃癌组织、癌旁正常组织及胃癌细胞和人正常胃黏膜细胞中miR-505-3p相对表达;构建miR-505-3p过表达、c-MYC过表达和敲低表达细胞系,通过CCK-8法,克隆斑点形成实验、Transwell侵袭/迁移实验检测miR-505-3p和c-MYC对胃癌细胞增殖、克隆形成及迁移、侵袭的影响;裸鼠皮下成瘤实验验证miR-505-3p对裸鼠肿瘤生长的影响;双荧光素报告实验验证miR-505-3p和c-MYC的靶向关系,并探究其两者间的表达调控作用;Western blot检测miR-505-3p和c-MYC对Wnt/β-catenin通路关键蛋白表达的影响。结果临床胃癌组织中miR-505-3p表达水平较正常癌旁组织显著下调(0.92±0.37 vs 1.74±0.59),差异有统计学意义(t=3.723,P<0.01)。胃癌细胞系MGC803(1.12±0.35),AZ521(2.31±0.24)和HGC-27(2.28±0.43)中miR-505-3p相对表达较人正常胃黏膜细胞系GES1(4.62±0.79)明显降低,差异有统计学意义(F=26.109,P<0.001)。miR-505-3p过表达组细胞增殖(0.92±0.27)、克隆形成(51.67±21.75)、迁移(43.25±15.47)、侵袭(38.53±14.76)能力较NC组(1.85±0.34,128.36±36.42,100.08±2.12,100.12±1.94)明显降低,差异均有统计学意义(t=3.131~7.166,均P<0.05);miR-505-3p过表达抑制了裸鼠生长。c-MYC是miR-505-3p的靶基因,miR-505-3p靶向负调控c-MYC。c-MYC过表达组细胞增殖(2.72±0.68)、迁移(147.15±20.36)、侵袭(145.46±22.73)能力较NC组(1.85±0.34,100.08±2.12,100.12±1.94)明显增高,差异均有统计学意义(t=2.455~4.456,均P<0.05);c-MYC过表达可逆转miR-505-3p对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭的抑制作用。miR-505-3p过表达组Wnt(0.46±0.07),β-catenin(0.50±0.05)蛋白相对表达水平明显低于NC组(1.01±0.02,1.02±0.02),差异均有统计学意义(t=8.139,7.342,均P<0.001);过表达c-MYC能够逆转miR-505-3p对Wnt和β-catenin蛋白表达的抑制作用。结论胃癌中miR-505-3p显著低表达,其可通过靶向调控c-MYC表达介导Wnt/β-catenin信号通路激活进而发挥作用参与胃癌的发生发展过程。