血清CysC、β_(2)-MG与急性髓系白血病患者去甲基化治疗效果的关系

目的:分析血清胱抑素C(Cys C)、β_(2)-微球蛋白(β_(2)-MG)与急性髓系白血病(AML)患者去甲基化治疗效果的关系。方法:使用前瞻性队列研究方法,纳入2019年2月-2022年1月内蒙古医科大学附属医院收治的98例AML患者进行研究,全部患者均接受地西他滨(DAC)+HAG方案治疗,以28 d为1个疗程,治疗3-4疗程。每个疗程结束时评估患者的治疗效果,达到完全缓解(CR)的患者进入巩固治疗,全部疗程结束未达到CR的患者视为治疗失败。治疗前检查项目包括血常规参数、血清Cys C、β_(2)-MG,并统计患者一般临床资料。根据统计结果,使用logistic回归分析血清Cys C、β_(2)-MG与AML患者去甲基化治疗效果的关系;绘制受试者工作特征(ROC)曲线,以曲线下面积(AUC)评估血清Cys C、β_(2)-MG对AML患者去甲基化治疗效果的预测效能。结果:入组98例AML患者,治疗期间5例被剔除,最终93例患者完成化疗疗程,其中23例初次诱导化疗(1-2疗程)达到CR,再诱导化疗(3-4疗程)后11例达到CR,治疗成功率为36.56%(34/93)。去甲基化治疗失败患者预后不良、预后中等占比高于治疗成功患者,血小板(PLT)、血红蛋白(Hb)水平低于治疗成功患者,血清Cys C、β_(2)-MG表达水平高于治疗成功患者,差异有统计学意义(P<0.05)。logistic回归分析显示,血清Cys C、β_(2)-MG高表达及预后不良是AML患者去甲基化治疗失败的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,血清Cys C、β_(2)-MG单独及联合预测AML患者去甲基化治疗效果的AUC值分别为0.788、0.785、0.834。结论:AML患者去甲基化治疗失败与血清Cys C、β_(2)-MG高表达有关,治疗前检测血清Cys C、β_(2)-MG能够预测AML患者去甲基化治疗失败风险。

lncRNA MALAT1调控GPx3去甲基化参与非小细胞肺癌的发生发展

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)MALAT1通过调控谷胱甘肽过氧化物酶3(GPx3)对非小细胞肺癌(NSCLC)增殖与侵袭的影响及其机制。方法通过TCGA数据库分析NSCLC患者的mRNA表达信息、甲基化数据及其临床信息,确定关键基因MALAT1与GPx3在NSCLC中的表达差异及其与患者预后之间的关系。采用免疫组织化学染色评估GPx3在肺腺癌组织中的表达水平,通过细胞培养、实时定量PCR、MTT法检测细胞增殖、细胞克隆形成以及迁移与侵袭能力来研究抑制MALAT1表达对A549细胞增殖与侵袭能力的影响。蛋白免疫印迹实验用于检测相关蛋白表达的变化。结果在NSCLC组织中,MALAT1的表达显著升高且与患者不良预后相关;GPx3的表达水平则显著降低,GPx3低表达患者的总生存率显著低于高表达组。其中MALAT1高甲基化水平与肺腺癌发生发展关系密切。沉默MALAT1可显著抑制肺癌细胞的增殖、克隆形成以及迁移和侵袭能力,同时促进GPx3的表达。蛋白表达分析进一步证实MALAT1的沉默减少了肿瘤干细胞标志物的表达,并抑制了上皮-间充质转化(EMT)过程。MALAT1通过募集LSD2调控GPx3的表达,从而在NSCLC的发展中发挥关键作用。结论lncRNA MALAT1通过抑制GPx3表达,促进NSCLC肿瘤细胞的增殖与侵袭能力。MALAT1高表达及高甲基化水平与NSCLC患者不良预后之间存在密切关联,为NSCLC的早期诊断、治疗及预后评估提供了新的生物标志物。

C_(12)-2-E_n-C(12)·2Br与SDS混合水溶液的胶团化研究

与[C_(12)H_(25)N^+(CH_3)_2CH_2]_2·2Br^-(简记为 C_(12)-2-C_(12)·2Br)/C_(12)H_(25)SO_4Na(SDS)混合水溶液相比，随着联接链上乙氧基团(E)数目增加，[C_(12)H_(25)N^+(CH_3)_2]_2C_2H_4(OC_2H_4)_n·2Br^-(简记为 C_(12)-2-E_n-C_(12)·2Br，n=2，3)与 SDS 混合水溶液澄清区域明显增大，C_(12)-2-E_3-C_(12)·2Br/SDS 混合胶团化过程中二组分产生了协同效应，理论预测在澄清区域所能达到的最小临界胶团总浓度(cmc_(T.mim))=0.0339mmol·L^(-1)，对应的 SDS 在溶液体相中的摩尔分数(x_2^(*))=0.447．当水溶液体相中 SDS 摩尔分数(x_2)=0.5时，混合胶团总聚集数(N_T)=36，混合胶团中 SDS 的摩尔分数(x_2~M)=0.43。

5-氮-2'-脱氧胞苷对非霍奇金淋巴瘤p73基因甲基化的逆转作用

目的探讨5-氮-2'-脱氧胞苷对非霍奇金淋巴瘤(NHL)p73基因甲基化的逆转作用。方法用甲基化特异性PCR(MSP)方法对24例NHL p73基因启动子的甲基化进行检测,用5-氮-2'-脱氧胞苷处理部分NHL原代培养细胞后,检测p73 mRNA表达情况。结果 24例NHL中21例发生甲基化,甲基化阳性率高达87.5%;对照组(12例反应性增生淋巴结细胞及22例正常人外周血淋巴细胞)均未出现甲基化。部分未经治疗的NHL样本经5-氮-2'-脱氧胞苷处理后,p73 mRNA表达恢复。结论 p73基因启动子的甲基化可被5-氮-2'-脱氧胞苷逆转,导致因甲基化而被抑制的p73基因表达上调。

5-Aza-CdR对胃癌细胞系BGC823生长及p27kip1基因异常甲基化的影响

选择浓度为1×10-6mol/L的5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理体外培养的BGC823细胞后,用AO染色检测药物处理后细胞增殖情况;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法检测用药前后细胞中p27kip1的mRNA表达的变化。结果显示,药物作用细胞增殖明显受到抑制,p27kip1基因的甲基化状态得到了逆转,p27kip1基因的mRNA表达得到增加。认为5-Aza-CdR对BGC823细胞具有增生抑制作用,p27kip1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关。

非小细胞肺癌患者血浆 RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO 基因甲基化状态观察

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)患者血浆抑癌基因runt相关转录因子3(RUNX3)、ras相关结构域家族基因1A(RASSF1A)、3-0-硫基转移酶-2(3-OST-2)、死亡相关蛋白激酶(DAPK)、膜结合受体型蛋白酪氨酸磷酸酶O(PTPRO)等基因启动子区域的甲基化状态。方法采用甲基化特异PCR技术对63例NSCLC患者血浆中RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因是否甲基化进行观察,并以25例健康人作对照。结果 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率分别为46.0%、50.8%、26.9%、34.9%、41.3%;健康人血浆中甲基化PTPRO基因检出率为12.0%,而甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK均未检出;两者甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率相比,P均<0.05。NSCLC患者血浆中上述5种甲基化基因联合检测的敏感度为88.9%、特异度为88.0%。血浆甲基化RUNX3基因检出率与NSCLC的病理类型、临床分期以及分化程度有关(P均<0.05);甲基化RASSF1A基因检出率与NSCLC的分化程度有关(P<0.05)。结论 NSCLC患者血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因检出率明显高于健康人。联合检测血浆中甲基化RUNX3、RASSF1A、3-OST-2、DAPK、PTPRO基因有可能会有助于NSCLC的早期诊断及其生物学行为的判断。

靶向TLR9含非甲基化CpG寡核苷酸片段的合成及筛选

目的合成、筛选靶向Toll样受体-9(TLR9)含非甲基化磷酸胞苷酰(CpG)寡核苷酸片段。方法取系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血常规分离并培养外周血单一核细胞(PBMC),设计并人工合成含非甲基化CpG的寡核苷酸片段。实验分为A组(PBMC培养液中加入人工合成的寡核苷酸片段预处理后,再用小牛胸腺DNA作为免疫原刺激PBMC)、B组(仅用小牛胸腺DNA作为免疫原刺激PBMC)、C组(PBMC培养液中加入等量PBS,再用小牛胸腺DNA作为免疫原刺激PBMC)。用ELISA法检测各组抗dsDNA抗体。结果成功合成并筛选出含非甲基化CpG的寡核苷酸片段。A组抗dsDNA抗体浓度显著低于B组(P<0.05),但与C组近似(P>0.05)。结论成功合成并筛选出靶向TLR9含非甲基化CpG寡核苷酸片段。

IGF-1R、PRKCZ基因启动子区甲基化检测方法的探讨

目的探讨人和小鼠的IG-1R、PRKCZ基因启动子区DNA甲基化检测的方法。方法用亚硫酸氢钠处理人外周血白细胞基因组DNA及小鼠骨骼肌组织中DNA标本,以修饰后的DNA为模板,对人和小鼠两个不同基因分别设计合适的引物对启动子区进行Touch-Down PCR扩增,PCR产物进行克隆测序。结果在利用合适的引物对修饰后DNA模板进行扩增时均能扩增出目的片段,克隆测序结果显示IGF-1R、PRKCZ基因启动子区甲基化的胞嘧啶碱基C不变,而非甲基化的胞嘧啶碱基C转变为胸腺嘧啶碱基T。结论成功的建立了人和小鼠IGF-1R、PRKCZ基因启动子区甲基化的检测方法,为进一步探讨这两种基因启动子区甲基化与相关疾病的关系奠定基础。

非小细胞肺癌中AKAP12基因的表达与甲基化研究

目的:探讨AKAP12基因甲基化与非小细胞肺癌发生发展的关系。方法:采用实时荧光定量PCR检测43例非小细胞肺癌患者组织中AKAP12基因mRNA的RQ值。应用MSP法检测其甲基化状态,分析RQ值、甲基化状态与临床因素的关系。结果:非小细胞肺癌AKAP12的RQ值与正常组织比较差异具有统计学意义。非小细胞肺癌AKAP12甲基化阳性率与正常组织之间差异具有统计学意义。非小细胞肺癌组织中AKAP12 mRNA的RQ值在病理分型、临床分期、分化程度方面差异具有显著性。AKAP12基因甲基化在病理分型及临床分期方面比较差异具有统计学意义。非小细胞肺癌组织中甲基化组的mRNA RQ值较非甲基化组低,差异具有统计学意义。结论:AKAP12基因甲基化与非小细胞肺癌的发生发展可能有关。

NiAl催化剂催化5-羟甲基糠醛加氢制备2,5-二羟甲基四氢呋喃

[目的] 5-羟甲基糠醛(HMF)是最重要的生物质基平台化学品之一,可以通过催化加氢途径制备许多高附加值化学品.本文为设计在更加温和的条件下达到高效催化HMF加氢的非贵金属催化剂进行了一系列研究.[方法]通过尿素共沉淀法制备了一种NiAl催化剂,考察了NiAl催化剂催化HMF加氢制备2,5-二羟甲基四氢呋喃(BHMTHF)的性能,并利用X射线衍射(XRD)、氢气程序升温还原(H_(2)-TPR)、扫描电子显微镜(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、氨气程序升温脱附(NH_(3)-TPD)、X射线光电子能谱(XPS)等表征方法系统地研究了不同Ni/Al比、不同煅烧温度和还原温度对催化剂理化性质的影响.[结果] Ni和Al的投料原子比为3∶1,在350℃下煅烧、650℃下还原制备的催化剂Ni_(3)Al-350-650在100℃、氢气压力2.5 MPa的条件下反应1 h,HMF的转化率和BHMTHF产率分别高达99.5%和87.5%.过高的Ni/Al比制备的催化剂比表面积较小,导致暴露的活性位点较少从而降低了催化活性,通过煅烧温度可以调节NiAl催化剂的可还原性.[结论]本研究实现了在温和条件下HMF的高效催化加氢转化.该结果可为用于HMF定向转化的非贵金属催化剂的设计提供参考.

m6A甲基化修饰和非编码RNA在非小细胞肺癌中串扰的研究进展

肺癌是全球范围内最常见的一种癌症,也是导致癌症相关死亡的主要原因之一。其中非小细胞肺癌(NSCLC)占约85%。N6-甲基腺苷(m6A)是RNA的表观遗传修饰之一,异常的m6A修饰与多种疾病,尤其是肿瘤的进展和预后密切相关。非编码RNA(ncRNAs),如微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)和环状RNA(circRNA)等参与了肿瘤的发生、转移和其他相关恶性表型的过程。本文综述了m6A和ncRNAs之间的相互作用,阐明了它们之间错综复杂的相互作用,为NSCLC的临床诊断和治疗提供了新的思路。

含非甲基化胞苷-磷酸盐-鸟苷寡脱氧核苷酸在非小细胞肺癌治疗中的应用进展

非甲基化胞苷-磷酸盐-鸟苷(CpG)寡脱氧核苷酸(ODN)属于Toll样受体9(TLR9)激动剂,其功能主要通过TLR9信号系统来体现。根据构效关系,共鉴别出K型、D型、C型和P型4个类别的CpG ODN,分别对B细胞和浆细胞样树状突细胞产生不同刺激作用。无论单独应用CpG ODN,抑或联合化疗、放疗,还是联合靶向药物或疫苗,对非小细胞肺癌的治疗均有一定的增效作用。该文也简述了CpG ODN的安全性。

动脉粥样硬化与12/15-LOX基因启动子区甲基化状态的关系

目的探讨动脉粥样硬化(AS)与12/15-脂氧合酶(12/15-LOX)基因启动子区甲基化状态的关系。方法将40只SD大鼠随机分为两组,即模型组和对照组,每组20只。模型组:给予高脂+维生素D3粉剂饮食;对照组正常饮食。3个月后,处死大鼠,取其主动脉弓至腹主动脉的血管组织,用改进的半定量甲基化特异性PCR法检测血管组织中12/15-LOX基因启动子区甲基化状态。结果①经苏木精-伊红染色,显微镜下观察可见模型组大鼠的主动脉有明显的粥样斑块形成,对照组未见明显变化。②按照吸光度(A)比值把全部血管组织分为低甲基化状态和高甲基化状态,模型组大鼠的血管组织的低甲基化率显著高于对照组(P<0.01)。结论血管斑块处12/15-LOX基因启动子区的甲基化状态与AS的形成相关,在AS发病过程中可能发挥着重要的作用。

非小细胞肺癌CDH13及DAPK基因CpG岛甲基化的研究

目的探讨非小细胞肺癌患者抑癌基因CDH13及DAPK基因CpG岛甲基化情况及其临床意义。方法采用甲基化特异性-PCR方法检测40例非小细胞肺癌患者(肺癌组)和30例肺良性病变患者(肺良性病变组)的抑癌基因CDH13及DAPK的Cp G岛甲基化的情况。结果肺癌组织CDH13、DAPK基因CpG岛甲基化率分别为47.5%(19/40)、40.0%(16/40),癌旁组织分别为27.5%(11/40)、30.0%(12/40),肺良性病变组织均为0。癌组织、癌旁组织CDH13、DAPK的CpG岛甲基化率均明显高于良性病变组(P<0.05),但癌组织与癌旁组织间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。鳞癌与腺癌组织CDH13、DAPK的CpG岛甲基化率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论非小细胞肺癌组织存在CDH13、DAPK的CpG岛甲基化,其与非小细胞肺癌发生发展有着密切关系。

LncRNA GAS5通过TIMP-3启动子甲基化促进软骨胶原蛋白降解的实验研究

目的骨关节炎(osteoarthritis,OA)是一种常见的关节疾病,可由内源性和表观遗传因素引起。软骨退变可恶化为OA。本研究旨在探讨长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)GAS5在OA中的基本机制。方法14例正常膝关节软骨组织取自2018年7月至2020年7月因胫骨平台骨折在复旦大学附属中山医院吴淞医院行骨折内固定的患者,男8例,女6例;年龄19~40岁,平均(31±5)岁。35例OA膝关节软骨组织取自2018年7月至2020年7月在复旦大学附属中山医院吴淞医院就诊,诊断为OA且有膝关节置换手术指征的患者,男17例,女18例;年龄62~86岁,平均年龄(70±4)岁。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测金属蛋白酶抑制剂(tissue inhibitor of metalloproteinase,TIMP)-3 mRNA的表达情况。使用白细胞介素(interleukin,IL)-1β(10 ng/mL)建立OA细胞模型,分析OA基因芯片GSE16464。RT-qPCR和western-blot检测软骨分解代谢抑制因子TIMP-3的表达。用芯片定量聚合酶链反应(quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测TIMP-3启动子区富集的CpG岛情况。用生物信息学方法预测GAS5与TIMP-3的靶向关系,并用双荧光素酶报告基因检测法进行验证。结果在OA患者组织中TIMP-3 mRNA表达显著低于正常软骨组织,OA患者组与正常软骨组织软骨细胞TIMP-3启动子区甲基化阳性率分别为72.1%和35.7%。LncRNAGAS5在OA中高表达,LncRNAGAS5在OA中表达较正常软骨组织中表达明显上调(P<0.05)。Blast序列比对GAS5序列与TIMP-3启动子序列具有结合位点。沉默LncRNA GAS5促进TIMP-3表达,抑制OA软骨细胞胶原降解。双荧光素酶报告基因实验验证GAS5与TIMP-3具有靶向调控关系。结论OA软骨组织中TIMP-3低表达,而LncRNA GAS5表达上调;LncRNA GAS5可富集DNA甲基化转移酶,抑制TIMP-3的表达,促进软骨细胞胶原蛋白降解。

非酒精性脂肪性肝病患者外周血内皮素、C型凝集素-1水平与小肠细菌过度生长、肝纤维化的关系

目的探究非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)患者外周血内皮素(ET)、C型凝集素-1(Dectin-1)水平与小肠细菌过度生长(SIBO)、肝纤维化的关系。方法选择2021年10月至2022年10月沧州市中心医院收治的88例NAFLD患者作为研究对象(设为NAFLD组),另选择同期在该院体检的65名健康体检者作为对照组。采用ELISA法检测受试者血清ET和Dectin-1水平。采用Pearson相关系数法分析NAFLD患者外周血ET、Dectin-1水平与SIBO的相关性。采用ROC曲线分析外周血ET、Dectin-1水平对NAFLD患者肝纤维化的评估价值。结果与对照组相比,NAFLD组的SIBO阳性率及血清ET、Dectin-1水平均显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.001)。与SIBO阴性组相比,SIBO阳性组的乳果糖氢呼气试验(LHBT)集值及血清ET、Dectin-1水平均显著升高,差异均有统计学意义(P均<0.001)。Pearson相关性分析结果显示,NAFLD组血清ET、Dectin-1水平与LHBT集值均呈正相关(r=0.552,P<0.05;r=0.451,P<0.05)。与对照组相比,无肝纤维化组、轻度肝纤维化组和重度肝纤维化组的血清ET、Dectin-1水平均显著升高,且随肝纤维化程度加重,血清ET、Dectin-1水平随之升高(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清ET、Dectin-1水平评估NAFLD患者肝纤维化的最佳截断值分别为65.63 pg/mL、18.52 pg/mL。血清ET和Dectin-1联合检测评估NAFLD患者肝纤维化的曲线下面积(AUC)均大于单项检测,差异均有统计学意义(P均<0.05),且联合检测的特异度较高。结论与健康人群相比,NAFLD患者外周血ET、Dectin-1水平均显著升高,且其水平与SIBO阳性率呈正相关。NAFLD患者外周血ET与Dectin-1联合检测评估患者肝纤维化具有一定应用价值。

非小细胞肺癌患者紧密连接蛋白-1基因启动子甲基化分析及其临床意义

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者中紧密连接蛋白-1(ZO-1)基因甲基化检测的临床意义。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应MS-PCR检测101例NSCLC患者癌组织及癌旁组织ZO-1基因启动子甲基化状态,以61例肺部良性病变患者作为对照,并用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测63例甲基化阳性组和200例阴性组中的mRNA和蛋白表达。结果 ZO-1 mRNA和蛋白在启动子甲基化阳性和阴性组中的差异有显著统计学意义(t=-26.028,P<0.01;t=-37.216,P<0.01)。ZO-1启动子甲基化在癌组织(32.7%,33/101)和正常组织中(11.5%,7/61)的差异有显著统计学意义(χ2=9.190,P<0.01)。癌旁组织ZO-1启动子甲基化在淋巴结转移组(35.5%,11/31)和未转移组中(17.1%,12/70)中的差异有显著统计学意义(χ2=4.110,P<0.05),癌组织ZO-1启动子甲基化在2年生存组(27.5%,14/51)和2年死亡组(43.2%,19/44)中的显著差异有统计学意义(χ2=4.150,P<0.05)。结论 ZO-1启动子甲基化影响了其mRNA转录和蛋白的表达,癌旁组织和癌组织ZO-1启动子甲基化分别可能作为NSCLC患者淋巴结转移和2年内生存的预测因子。

C7ORF41在非酒精性脂肪肝中甲基化功能研究

非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)是众多代谢性疾病的共同病理基础,其发病机制尚未完全阐明,且临床上缺乏有效的治疗方法。大量研究表明,DNA甲基化在调控NAFLD相关代谢性疾病的发病机制中发挥重要作用。前期研究发现,C7ORF41参与非酒精性脂肪肝的发生,然而其作用机制需进一步探究。本研究采用棕榈酸(palmitate acid,PA)诱导的L02、HepG2细胞作为脂肪肝研究模型,探究C7ORF41基因启动子区DNA甲基化在脂肪肝中的作用。结果显示,C7ORF41在PA诱导的脂肪肝中表达明显降低(P<0.01),并且其启动子区CpG岛甲基化水平显著升高(P<0.01)。此外,DNA甲基转移酶抑制剂5-AzadC能够逆转PA诱导的C7ORF41低表达及脂质积累。进一步的研究发现,脂肪肝中DNMT3a表达增多,用siRNA将其敲低后能够逆转C7ORF41的低表达,表明脂肪肝发生过程中,DNMT3a介导C7ORF41启动子区甲基化是导致其表达降低的原因之一。

lncRNA MIR4435-2HG的表达水平及甲基化状态与脑胶质瘤病理分级的关系

目的探讨长链非编码RNA MIR4435-2HG的表达水平及甲基化状态与脑胶质瘤病理分级的关系。方法选取2019年1~12月手术切除的脑胶质瘤组织110例和颅脑损伤内减压术中切除正常脑组织20例(对照组)。采用实时荧光定量PCR和甲基化特异性PCR检测组织和血清MIR4435-2HG水平及甲基化状态。结果110例胶质瘤中,低级别胶质瘤(WHO分级Ⅰ~Ⅱ级)65例,高级别胶质瘤(WHO分级Ⅲ~Ⅳ级)55例;IDH1突变46例。脑胶质瘤组织和病人血清MIR4435-2HG表达水平均明显高于对照组(P<0.05),而甲基化率明显低于对照组(P<0.05)。低级别胶质瘤组织和病人血清MIR4435-2HG水平明显低于高级别胶质瘤(P<0.05),而甲基化率明显高于高级别胶质瘤(P<0.05)。IDH1突变型胶质瘤组织和病人血清MIR4435-2HG水平明显低于IDH1野生型(P<0.05),而甲基化率明显高于IDH1野生型(P<0.05)。MIR4435-2HG甲基化组胶质瘤组织和血清MIR4435-2HG水平明显低于非甲基化组(P<0.05)。ROC曲线分析显示,血清MIR4435-2HG水平鉴别脑胶质瘤级别的曲线下面积为0.752(95%置信区间0.701~0.804),最佳截断值为1.98,灵敏度和特异度分别为65.0%和91.5%。结论脑胶质瘤,尤其是高级别胶质瘤,血清MIR4435-2HG表达水平普遍升高,检测血清MIR4435-2HG水平有助于鉴别诊断脑胶质瘤级别。MIR4435-2HG转录受其基因甲基化水平的调控,并且与IDH1突变有关。

成肌细胞成脂过程中PPARγ、C/EBPα和Myogenin基因启动子的甲基化变化

【目的】利用C2C12成肌细胞探讨肌源性干细胞成脂过程与调控成脂和成肌分化的关键转录因子PPARγ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma)、C/EBPα(CCAAT/enhancer binding protein alpha)和Myogenin启动子区甲基化的关系。【方法】分别用2%马血清和三联诱导剂诱导C2C12细胞成肌和成脂分化,在马血清促进的成肌分化第0、1、3和5天收集细胞进行姬姆萨染色观察肌管形成情况;在三联诱导的成脂分化第0、2、4、6和10天收集细胞进行油红O染色观察脂滴形成情况;提取成肌诱导第0、1、3、5天和成脂诱导第0、2、4、6天的RNA和DNA,分别采用qRT-PCR检测成肌和成脂分化相关基因的表达,采用重亚硫酸盐测序的方法检测PPARγ、C/EBPα和Myogenin启动子区甲基化的变化,并分析基因表达与甲基化状态的相关关系。【结果】①C2C12细胞经马血清诱导形成了多核肌管,表达成肌相关基因,但不表达脂肪特异性基因;三联诱导使C2C12细胞自主分化的肌管中沉积了脂滴,同时表达成脂和成肌相关基因;②重亚硫酸盐测序结果表明,在未分化的成肌细胞中,PPARγ基因启动子的甲基化水平是61%,在三联诱导第2、4和6天,其甲基化程度依次为49%、39%和42%,呈逐渐去甲基化趋势,与PPARγ基因转录负相关;在马血清诱导第3和5天,甲基化水平为56%和48%,与未分化的成肌细胞相比差异不显著,同时PPARγ基因的表达水平也没有显著变化;③Myogenin基因在马血清促进的成肌过程中甲基化水平不断降低(49%、42%、35%和34%),转录水平急剧增加;在三联诱导过程中,Myogenin启动子的甲基化水平由0天的49%下降为第1天的37%、第3天的41%和第5天的38%,但下降幅度弱于马血清诱导的成肌过程,这一结果与降低的Myogenin转录上调相吻合;④C/EBPα基因在未分化的C2C12细胞中呈低甲基化状态,甲基化程度仅为1.6%,在成肌分化和脂肪沉积过程中均未发生显著变化,与基因表达无显著关联。【结论】成脂和成肌关键转录因子PPARγ和Myogenin启动子区的DNA甲基化变化参与了成肌细胞的分化和脂肪沉积的调控。