AGTR1 (A1166C)基因多态性与脑梗死预后的相关性分析

目的:探究血管紧张素II-1型受体(AGTR1) (A1166C)基因多态性与脑梗死风险因素及预后相关性,为进一步推动脑梗死的二级预防以及治疗提供依据。方法:选取2021年4月至2021年8月期间就诊于北华大学附属医院神经内科首发症状性脑梗死患者50例(男性39例,女性患者11例),平均年龄(66.6 ± 10.54)岁。以A1166C基因型进行分组:野生型组(AA)、突变组(AC CC),收集患者一般资料、量表评分(NIHSS评分、Barthel指数)及疾病是否复发。结果:1) 单因素分析结果显示在年龄、症状首发年龄、出院时NIHSS评分、AGTR1 (A1166C)基因型比例比较,差异无统计学意义(P > 0.05);2) 单因素分析示AGTR1 (A1166C)基因多态性均与脑梗死患者的严重程度、复发、Barthel指数具有相关性(P < 0.05),差异有统计学意义;3) 多因素分析结果表明AGTR1 (A1166C)基因是脑梗死复发的独立危险因素,AC、CC基因型脑梗死患者的复发率是AA型的8.72倍,即AGTR1 (A1166C)基因突变时,脑梗死的复发率增高。结论:AGTR1 (A1166C)基因多态性与脑梗死的发生有关联,是脑梗死的独立危险因素。

MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死风险因素及预后的相关性分析

目的:探究亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死风险因素及预后相关性,为脑梗死的二级预防及治疗提供理论支持。方法:选取2021年4月至2021年8月期间就诊于北华大学附属医院神经内科首发症状性脑梗死患者50例(男性39例,女性患者11例),平均年龄(66.6 ± 10.54)岁。以C677T基因型进行分组:野生型组(CC)、突变组(CT TT),收集患者一般资料、个人史、既往史、量表分数(NIHSS评分、Barthel指数)及症状复发。结果:1) 单因素分析结果显示在MTHFR (C677T)基因年龄、症状首发年龄、冠心病病史、糖尿病病史、吸烟史、饮酒史比较,差异无统计学意义(P > 0.05);2) 单因素分析结果显示MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死患者的性别、高血压、入院时严重程度、症状复发具有相关性,差异有统计学意义(P < 0.05);3) 在多变量分析结果显示MTHFR (C677T)是脑梗死复发的独立危险因素,CT TT基因型复发的概率是CC基因型的9.25倍,即MTHFR (C677T)基因突变时,脑梗死的复发率增高。结论:MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死的发生具有相关性,是脑梗死发生的独立危险因素。

MTHFR(C677T)基因多态性和同型半胱氨酸与急性脑梗死患者静脉血栓形成的相关性研究

目的探讨MTHFR(C677T)基因多态性和同型半胱氨酸(Hcy)与急性脑梗死患者静脉血栓形成的相关性。方法回顾性分析2020年11月至2021年10月该院收治的334例急性脑梗死患者作为脑梗死组,另选取同期在该院体检中心就诊的100例健康体检者作为健康组。脑梗死组患者根据是否发生静脉血栓分为血栓组(80例)和非血栓组(254例)。检测所有研究对象MTHFR(C677T)基因型及Hcy水平,比较脑梗死组和健康组的MTHFR(C677T)基因型和等位基因频率,比较血栓组和非血栓组的MTHFR(C677T)基因型和基因频率、临床资料、携带不同MTHFR(C677T)基因型患者的Hcy水平。采用二元Logistic回归分析急性脑梗死患者静脉血栓形成的危险因素。结果脑梗死组MTHFR(C677T)基因的TT基因型与T等位基因频率高于健康组,差异均有统计学意义(P<0.05)。血栓组MTHFR(C677T)CT基因型、TT基因型和T等位基因频率高于非血栓组,差异均有统计学意义(P<0.05);血栓组和非血栓组年龄、吸烟情况比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。血栓组与非血栓组携带MTHFR(CT77T)基因TT基因型患者的Hcy水平高于CT和CC基因型,且CT基因型高于CC基因型,差异均有统计学意义(P<0.05);二元Logistic回归分析结果显示,携带MTHFR(CT77T)基因TT基因型、Hcy≥15μmol/L是急性脑梗死患者静脉血栓形成的危险因素(P<0.05)。结论MTHFR(C677T)基因多态性会对Hcy水平产生影响,从而引发急性脑梗死患者形成静脉血栓,在临床中应对携带MTHFR(C677T)基因TT基因型的急性脑梗患者给予关注,预防静脉血栓的形成。

CryIA(c)基因植物表达载体的构建及转基因甘蔗的获得

构建了玉米UBI启动子驱动Bt CryIA(c)基因的高效植物表达载体pUBTC,通过农杆菌介导法导入甘蔗愈伤组织,经过除草剂PPT 3次连续筛选,获得89株抗性植株,经过PCR扩增检测,得到71株阳性植株,对其中7株进行RT-PCR检测,证明外源基因已经成功的整合到甘蔗基因组中,并得到有效的表达。

中国福建泉州地区心脑血管患者CYP2C19,ABCB1基因多态性的检测分析

目的检测分析泉州地区心脑血管病患者氯吡格雷相关基因细胞色素P4502C19(CYP2C19)和三磷酸腺苷黏合转运体B1 (ABCB1)的突变情况。方法收集2018年5月~2019年5月到泉州第一医院住院接受治疗的2 029例心脑血管病患者的全血标本,采用sanger测序法检测CYP2C19,ABCB1基因型,应用Hardy-Weinberg遗传平衡吻合度检验方法,判断选取的标本是否具有群体代表性。根据性别、年龄因素对患者进行分组,采用四格表资料的χ^2检验,R×C表资料的χ^2检验比较各组间氯吡格雷代谢相关基因CYP2C19,ABCB1,氯吡格雷代谢型的分布差异。结果 CYP2C19*2(G681A),*3(G636A),*17(C806T),ABCB1(C3435T)的等位基因频率分别为57.1%,10.0%,1.5%和60.1%,每个等位基因分布的观察值和预期值差异有统计学意义(χ^2=0.000~3.316,均P>0.05),符合遗传平衡定律,具有群体代表性。CYP2C19*1/*1,CYP2C19*1/*2,CYP2C19*1/*3,CYP2C19*1/*17,CYP2C19*2/*2,CYP2C19*2/*3,CYP2C19*2/*17,CYP2C19*3/*17基因型频率分布分别为35.5%,42.1%,6.4%,0.9%,11.1%,3.4%,0.4%和0.2%,氯吡格雷超代谢型、快代谢型、中代谢型、慢代谢型的频率分别为0.9%,35.5%,49.1%和14.5%。CYP2C19基因型及氯吡格雷代谢类型在不同性别之间分布差异有统计学意义(χ^2=838.9~1361.134,均P<0.05),氯吡格雷代谢类型在男性不同年龄段的差异无统计学意义(χ^2=11.408,P>0.05),氯吡格雷代谢类型在女性不同年龄段的差异无统计学意义(χ^2=21.262, P>0.05)。ABCB1(C3435T)基因型CC,CT和TT的频率分别为39.9%,44.4%和15.7%,ABCB1基因型在不同性别之间分布差异有统计学意义(χ^2=139.445,P<0.05)。结论泉州地区心脑血管患者CYP2C19基因型主要以CYP2C19*1/*2 (42.1%)为主,ABCB1基因型主要以CT(44.4%)为主,氯吡格雷代谢表型以中代谢(49.1%)为主。CYP2C19基因型、ABCB1基因型及氯吡格雷代谢类型在不同性别之间是有差异的。氯吡格雷代谢类型在同性不同年龄段是没有差异的。

猪泛素C端水解酶L1基因的克隆与序列分析

从人泛素C端水解酶L1（UCH_L1）基因出发，在dbEST数据库中同源搜索，找到1条与人UCH_L1基因编码氨基酸同源性较高且在香猪背最长肌中表达的EST（BM194679）．通过电子克隆和进一步RT—PCR试验验证，获得猪UCH_L1基因全长cDNA序列，其全长1105bp，开放阅读框（ORF）位于60～728bp，编码223个氨基酸．同源性分析结果表明，与人、鼠UCH_L1基因cDNA编码区（CDS）同源性分别为91．2％和86．5％，蛋白质序列同源性均为96．6％．对该基因编码蛋白的结构和功能预测显示含有2个典型的疏水性区域，不含有信号肽，存在1个UCH—L1（pfam01088）保守结构域和多个磷酸化位点，属UCH—L1蛋白家族，故将该基因命名为猪泛素C端水解酶L1基因（登录号AY495532）．

PRODH-1945(T/C)基因多态性与广西壮族和汉族精神分裂症易感性的关联性研究

目的探讨PRODH-1945(T/C)基因多态性与广西壮族、汉族精神分裂症易感性之间的关联性,为进一步探明壮族、汉族精神分裂症的遗传机制提供科学参考依据。方法采用病例对照研究方法,以国际疾病及相关健康问题分类第10版(ICD-10)为诊断标准,使用TaqMan MGB荧光定量实时PCR实验技术对纳入的广西精神分裂症患者282例(病例组,其中壮族94例、汉族188例),健康对照者282例(对照组,其中壮族94例、汉族188例)的PRODH-1945(T/C)基因多态性进行检测。数据统计均使用SPSS 13.0 for windows软件进行。结果无论在壮族、汉族样本中,还是在两个民族的合并样本中,病例组与对照组的PRODH-1945(T/C)基因型频率、等位基因频率的分布差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 PRODH-1945(T/C)基因多态性与广西壮族、汉族精神分裂症的易感性均不相关联。

羊驼皮肤中肌钙蛋白C(TnC)基因表达分析

从羊驼皮肤cDNA文库中筛选到TnC基因的克隆,经PCR鉴定并测序得知:克隆大小为722 bp,含有一个完整的开放阅读框(ORF)。并利用生物信息学方法对该基因进行分析,发现该基因编码160个氨基酸,为膜蛋白,部分具有高度同源性,并还有一个EFh家族的保守区域,是该蛋白的功能区域。

农作物中Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分双重实时荧光PCR检测方法的建立

采用羧基荧光素(FAM)和六氯荧光素(HEX)荧光基团标记探针,建立针对农作物中常见抗虫和抗除草剂基因的双重实时荧光PCR检测方法,通过特异性、检出限以及模拟掺假试验验证此方法在转基因检测中的适用性。特异性检测试验中仅转基因作物(转基因棉花、转基因水稻、转基因大豆)和阳性质粒检测出相应转基因成分,其余样品均未出现明显PCR扩增曲线;检出限结果表明,双重实时荧光PCR方法对Cry1A(c)、CP4-EPSPS基因的检出限分别为1、0.1 ng,所建立的标准曲线r^(2)值均大于0.98,具有对农作物中的转基因成分进行定量检测的能力;模拟掺假检测显示此方法可检测到1%的Cry1A(c)和5%的CP4-EPSPS转基因成分。综上所述,本试验建立的双重实时荧光PCR法适用于对Cry1A(c)和CP4-EPSPS转基因成分的快速检测和定量分析。

基于COI基因分析长江下游典型水域翘嘴鲌的遗传多样性

为了解长江下游典型水域翘嘴鲌(Culter alburnus Basilewsky)群体遗传多样性现状,利用线粒体COI基因序列对淀山湖(DSH)、太湖(TH)、长漾湖(CYH)和长江水域江苏段(CJ)的4个翘嘴鲌群体进行了遗传多样性分析。结果显示,在816 bp的COI基因序列中,碱基A、T、C和G的平均含量分别为26.3%、28.7%、26.8%和18.2%,表现出较明显的AT偏倚性;4个群体共检测到302个多态性位点,定义了43个单倍型;单倍型多样性指数(Hd)为0.639~0.912,表现为CJ>CYH>DSH>TH,核苷酸多样性指数(Pi)为0.0052~0.0874,表现为CJ>DSH>CYH>TH。群体间遗传分化系数Fst和遗传距离分析表明,TH群体与其它群体间均存在较高的遗传分化,且与其它群体间的遗传距离均较远。AMOVA分析结果表明,遗传变异主要来自群体内,群体间遗传分化未达到显著水平。中性检验结果显示DSH群体的Tajima′s D和FuLiF均为负值,表明DSH群体可能经历过群体爆发和扩张事件,可能与淀山湖的形成历史有关。研究表明,翘嘴鲌不同地理群体间的遗传分化程度不同,4个水域的翘嘴鲌群体遗传多样性均较丰富,每个群体都可单独作为一个保护单元,其中CJ群体的遗传多样性最高,表明长江江苏段翘嘴鲌种质资源状况较好。

EPCR基因mRNA在人胃癌细胞系中的表达及其shRNA干扰载体内源性筛靶研究

目的检测人胃癌细胞株中内皮细胞蛋白C受体(endothelial protein creceptor,EPCR)基因的mRNA表达水平,构建EPCR基因特异的短发夹RNA(shRNA)干扰载体,并通过内源性筛靶实验检测EPCR mRNA表达,筛选出最佳的干扰靶序列。方法通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western blot)检测胃癌细胞系(SGC7901、MGC803、HGC27、AGS)中EPCR mRNA和蛋白的表达,筛选出EPCR高表达的细胞株;设计5对EPCR基因特异性短发夹RNA(shRNA)干扰片段pGPH1/GFP/Neo-EPCR,用Lipofectamine 2000将pGPH1/GFP/Neo-EPCR转染入EPCR高表达的人胃癌细胞,以pGPH1/GFP/Neo空载体作对照;转染后通过观察绿色荧光蛋白来判断转染的效率,选出最优质粒/脂质体比;转染后收集样本,采用RT-PCR及Western blot进行检测,筛选出有效的干扰片段。结果 EPCR在MGC803细胞中表达量最高;最佳质粒:脂质体比值为1μg︰1μL;pGPH1/GFP/Neo-EPCR-homo-555为最有效的干扰质粒。结论成功筛选出针对EPCR基因特异的shRNA干扰载体,转染细胞后可下调EPCR的表达,为进一步研究EPCR的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础。

甘露糖筛选系统的建立及在甘蔗转基因中的应用

用甘露糖作为筛选底物,对甘蔗品种福农95-1702外植体的再生进行研究,建立福农95-1702的甘露糖筛选体系;在甘蔗愈伤组织的继代、分化、生根三个阶段进行抗性筛选时,甘露糖占总糖的比例分别是60%、60%和30%。在以上筛选体系的基础上,将福农95-1702作为受体材料,通过基因枪轰击法,将含有cryIA(c)抗虫基因的基因表达盒与筛选标记基因(pmi)进行共转化,通过甘露糖筛选,最终获得26株抗性再生植株,经PCR检测,其中4株呈阳性。初步说明cryIA(c)基因已经整合到福农95-1702的基因组中,获得了4株转基因阳性甘蔗植株。

基于eDNA技术的舟山近海中国团扇鳐定性与定量分析

为探讨环境DNA (environmental DNA, eDNA)技术用于中国团扇鳐监测方面的可行性,同时开展基于eDNA技术的舟山近海中国团扇鳐定性与定量分析。本实验将中国团扇鳐与其同属汤氏团扇鳐COI基因片段序列进行比较分析,使用Primer Express 3.0软件设计中国团扇鳐特异性引物与Taq Man探针。在舟山朱家尖近海设计了A、B、C共3个定置网调查站位,定期收集中国团扇鳐样品。于2017年12月19日、2018年4月13日和2018年7月14日分别采集水样(站位A、B1、B2、C1、C2、D),开展eDNA微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)检测,并将检测结果与水温和采样点进行差异显著性分析。结果显示,不同站位、不同时间的中国团扇鳐eDNA浓度不同,水样采集点对中国团扇鳐eDNA浓度的影响极显著,不同采样点eDNA在不同季节存在极显著差异。研究表明,eDNA检测技术灵敏度高,水温、底质和水深对中国团扇鳐的分布皆有影响。研究结果为其他海域的中国团扇鳐e DNA追踪监测奠定了基础。

NIK和IKKβ连接蛋白、C-myc和细胞周期蛋白D1在结肠癌组织中的表达及意义

目的检测结肠癌组织中NIK和IKKβ连接蛋白(NIBP)、磷酸化p65(p-p65)和C-myc、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达,并探讨其意义。方法收集广西医科大学第一附属医院结直肠外科2013年2月—2014年2月经外科手术切除及消化内科肠镜活检的部分标本151例,其中正常结肠黏膜16例、结肠腺瘤21例、结肠癌114例。采用SP免疫组化法分别检测正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织及结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率;分析结肠癌组织中NIBP、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率的相关性。结果正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织、结肠癌组织的NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率高于正常结肠黏膜组织和结肠腺瘤组织(P<0.017);正常结肠黏膜组织、结肠腺瘤组织中NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异无统计学意义(P>0.017)。不同组织学类型、浸润深度及有无淋巴结转移、远处转移患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。分化程度越低、TNM分期越高、Duke's分期越高患者结肠癌组织NIBP、p-p65、C-myc和cyclin D1阳性细胞表达率越高(P<0.05)。NIBP、C-myc、cyclin D1阳性细胞表达率与p-p65阳性细胞表达率均呈正相关(P<0.05)。结论 NIBP可能通过激活核因子κB(NF-κB)信号转导通路上调C-myc和cyclin D1等的表达而影响结肠癌的治疗发生、发展、侵袭和转移,为临床发现结肠癌的治疗新靶点提供了参考依据。

气肿疽梭菌不同靶基因检测方法的比较

为检测牛、羊等反刍动物的气肿疽梭菌,筛选出更为特异、敏感的PCR检测方法,分别以fli A(C)、nan A、cct A为靶基因进行PCR检测,并对其敏感性、特异性等方面进行比较。结果表明,以cct A为靶基因的PCR检测方法敏感性最高,最小检测DNA量为12.30×10^(-5)pg/μL;以fli A(C)、nan A为靶基因的PCR检测方法敏感性较低,最小检测DNA量为0.123 ng/μL;3种靶基因引物菌未扩增出D型产气荚膜梭菌、E型产气荚膜梭菌、腐败梭菌、巴氏杆菌等基因片段,具有较好的特异性。本试验为气肿疽的快速诊断提供了更为敏感、特异的检测技术。

56例不良妊娠MTHFR基因多态性分析

目的:探讨MTHFR基因多态性与不良妊娠的关系及个性化补充叶酸意义。方法:选取56例不良妊娠妇女,采集患者静脉血2 ml,应用MTHFR(C677T)基因检测试剂盒,分析出其MTHFR C677T基因型。结果:56例不良妊娠妇女中CT(突变杂合型)及TT(突变纯合型)占总数的92.86%。结论:MTHFR基因的多态性导致个体代谢叶酸能力具有差异,同时也是导致每日叶酸补充量差异的重要原因,为临床补充叶酸提供了一定的参考。

双价抗虫植物表达载体p3300-bt-pta转化苜蓿的初步研究

以中苜1号无菌苗子叶为外植体,采用农杆菌介导的叶盘法,将含有CryIA(a)/CryIA(c)基因、半夏凝集素(pta)基因和bar基因的双价抗虫植物表达载体p3300-Bt-pta导入苜蓿子叶中,在含除草剂的筛选培养基中连续筛选,获得抗性转化植株。研究了农杆菌菌液浓度、浸染时间、共培养时间等因素对苜蓿转化效率的影响,结果表明:各因素对苜蓿转化率均有不同程度的影响,当转化的菌液浓度OD600为0.6、浸染时间为10min、共培养时间为3d时转化效率较好。载体的抗性基因为除草剂草丁膦抗性的Bar基因,对子叶外植体的最佳筛选浓度为8mg/L;抑制农杆菌所用Carb的有效工作浓度为400mg/L,以后继代逐次减少用量到100mg/L;按此方法以根癌农杆菌菌株EHA105介导,将双基因Bt和pta导入紫花苜蓿品种"中苜1号",最终获得122棵除草剂草丁膦(ppt)抗性的植株,经过初步的PCR及RT-PCR分子生物学检测,有30棵检测到特异性条带,表明外源基因已成功整合到苜蓿基因组中,并在转录水平得到表达。

31例维吾尔族黏膜黑素瘤临床与c-kit基因突变研究

目的 分析维吾尔族黏膜黑素瘤临床特点,检测c-kit基因突变,探讨与黏膜黑素瘤临床特征之间的关系.方法 收集经病理确诊的31例维吾尔族黏膜黑素瘤患者的临床资料,采用PCR及DNA直接测序法进行c-kit基因突变检测.结果 维吾尔族黏膜黑素瘤男女性别比为1∶1.2,平均年龄61.35岁.60 ～ 70岁为高发年龄段,51 ～ 59岁为次高发年龄段.头颈部为最常见的发病部位,其中以鼻腔黏膜居多;其次为泌尿生殖道和直肠黏膜.31例黏膜黑素瘤有4例发生c-kit基因突变（12.9％,4/31）,突变均位于11外显子,以L576P突变为主.4例突变中,3例发生于直肠黏膜,1例发生于尿道黏膜.直肠黏膜与其他黏膜部位c-kit基因突变率分别为3/7、4.17％（1/24）.发生淋巴结转移患者c-kit基因突变率高于无淋巴结转移者（P=0.043）.c-kit基因突变与性别、年龄无相关性（P＞0.05）.结论 维吾尔族黏膜黑素瘤好发于老年人,发病部位以头颈部黏膜为主.c-kit基因突变与黏膜黑素瘤发生部位、有无淋巴结转移密切相关.

大鼠PLCG2基因的pHBAd-MCMV-GFP真核表达载体构建及鉴定

[目的]构建大鼠PLCG2(rPLCG2)的pHBAd-MCMV-GFP真核重组质粒,为进一步构建rPLCG2高表达腺病毒载体奠定基础。[方法]以合成的rPLCG2-pUC57质粒为模板,PCR扩增获得r PLCG2基因,并克隆至真核表达载体pHBAd-MCMV-GFP中。转化DH5α感受态,菌液PCR阳性克隆鉴定,并对阳性样本进行测序。[结果]成功构建了真核重组质粒pHBAd-MCMV-GFP-rPLCG2。[结论]pHBAd-MCMV-GFP-rPLCG2真核表达载体的成功构建为后续rPLCG2高表达腺病毒载体的构建及其功能的研究奠定基础。

GDNF、GFRα1和RET在先天性直肠肛门畸形中的表达及意义

目的探讨神经胶质细胞源性的神经营养因子(GDNF)、其受体GFRα1和原癌基因RET在先天性直肠肛门畸形肠壁组织中的表达及意义。方法收集经手术治疗的直肠肛门畸形患者12例,男8例,女4例,年龄3 d^2岁,高位无肛2例,中位无肛4例,低位无肛6例。采用免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测12例患儿肠壁盲端组织和距离盲端3 cm处的组织标本中RET、GDNF和GFRα1的表达。结果高、中、低位无肛患儿盲端标本中均缺乏神经节细胞,且RET、GDNF和GFRα1在盲端中均未见表达;距离盲端3 cm处,高、中、低位无肛组织中有神经节细胞,存在RET、GDNF和GFRα1的表达,中、低位无肛组织中呈棕褐色为强阳性,而高位无肛呈淡黄色和棕黄色为弱阳性或者阳性;术后功能随访,高位无肛中1例出现污粪,1例出现稀便不能控制,无肛门失禁情况。中、低位无肛中有1例出现直肠黏膜脱出,经坐浴肛门护理好转,1例出现排气时偶有污便,其余8例术后排便功能未见异常。结论先天性直肠肛门畸形患儿的直肠末端中神经营养因子GDNF、GFRα1和RET的低表达可能与直肠肛门畸形术后排便功能不良关系密切。