嗜热链球菌c-di-AMP合成酶的结构预测

作为一种新兴第二信使分子,c-di-AMP具有全局调控胞内渗透压平衡、DNA损伤和生物膜形成等生理功能。本实验室在实验前期筛选出了一株高产胞外多糖的嗜热链球菌菌株S-3,但未对其进行c-di-AMP信号通路研究。本研究在嗜热链球菌S-3全基因组中筛选出c-di-AMP合成酶(StDAC),对其二级结构进行预测,结果显示St DAC二级结构包含42.98%α-螺旋、15.32%β-折叠和38.30%无规则卷曲。利用SWISS-MODEL和Modeller对StDAC进行单模板和多模板同源建模,由SWISS-MODEL建立的模型通过了Ramachandran、Errat和Verify-3D评估,表明其结构较为合理;而Modeller建立的模型仅通过了Ramachandran评估,总体结构评分较低。本研究预测的嗜热链球菌StDAC三维模型为解析其结构和功能奠定了基础。

乳酸菌第二信使分子c-di-AMP研究进展

微生物依赖信号识别和信号传递来感知并响应外界环境变化。c-di-AMP作为第二信使分子在信号传导过程中发挥着关键作用,其通过酶、转录调控因子和核糖开关等受体靶标来调控细胞生长、生物膜形成、K^(+)稳态、DNA完整性、细胞壁合成和脂肪酸合成等与生理功能相关的基因和蛋白的表达。尽管对于c-di-AMP代谢调控在枯草芽孢杆菌、单增李斯特氏菌和金黄色葡萄球菌等细菌中的研究较为深入,但对其在乳酸菌中的研究却相对较少。基于此,文章重点关注乳酸菌中cdi-AMP的代谢及其在K^(+)稳态和抑制甘氨酸甜菜碱转运中的信号传导作用;同时,通过总结现有研究中的乳酸菌c-di-AMP代谢调控,深化对乳酸菌第二信使分子信号调控的认知。

单味黄芩煎剂对内毒素“二次打击”脓毒症大鼠体内Fn及肺组织EPCR、AMPK表达的影响

目的观察单味黄芩煎剂对内毒素“二次打击”脓毒症大鼠体内纤维结合蛋白(Fn)及肺组织血管内皮细胞蛋白C受体(EPCR)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)表达的影响。方法28只健康SPF级成年雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、黄芩正常剂量组、黄芩高剂量组,每组7只,予腹腔注射内毒素(LPS)(1 mg/kg),16 h后气管内注入LPS(5 mg/kg),建立大鼠脓毒症急性肺损伤模型。黄芩正常剂量、高剂量组建模术前6 h分别经口灌胃2 mL不同剂量的黄芩煎剂,其中正常剂量组为1 g/kg,高剂量组为4 g/kg;假手术组和模型组均注射等体积的生理盐水,每天给药1次,连续3 d。结束实验后留取肺组织、血标本,HE染色观察肺组织病理学变化,测定肺组织湿/干重比,酶联免疫吸附法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、Fn,血气分析检测氧气分压(PaO_(2))并计算氧合指数,蛋白免疫印迹法(Western blotting)检测肺组织EPCR、AMPK。结果模型组较假手术组肺组织出现炎性病理改变,血清Fn明显下降,TNF-α、IL-6显著上升,湿干重比升高明显,氧合指数显著下降,肺组织EPCR表达降低明显,AMPK表达增加明显;与模型组相比,黄芩正常剂量组、高剂量组血清Fn明显升高,肺组织EPCR表达升高明显,湿干重比明显下降,氧合指数明显改善,减轻肺组织病理变化(均P<0.05或P<0.01);黄芩正常剂量组、高剂量组之间Fn、EPCR、AMPK表达差异无统计学意义(P>0.05),湿干重比、氧合指数差异无统计学意义(P>0.05)。结论单味黄芩煎剂对内毒素“二次打击”脓毒症大鼠肺损伤有保护作用,能够降低肺损伤程度,改善氧合指数,其机制可能与抑制炎症反应,提高Fn、EPCR表达,保护内皮细胞有关,但与黄芩的剂量关系不密切。

特立帕肽通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控高糖微环境下的成骨细胞分化

目的探讨特立帕肽对高糖微环境下小鼠胚胎成骨细胞(MC3T3-E1)分化的影响及作用机制。方法将MC3T3-E1细胞分为正常糖组(NG,5.5 mmol/L葡萄糖)、NG+特立帕肽组(5.5 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)、高糖组(HG,25 mmol/L葡萄糖)、HG+特立帕肽组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽)和HG+特立帕肽+PKA抑制剂组(25 mmol/L葡萄糖+10 nmol/L特立帕肽+20μmol/L H-89)。CCK-8法检测细胞增殖;ELISA实验检测各组cAMP水平;试剂盒检测碱性磷酸酶(ALP)活性;茜素红染色检测细胞矿化结节生成情况;鬼笔环肽染色后观察细胞骨架;Real-time PCR检测细胞中PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达水平。结果各组细胞增殖能力差异无统计学意义(P>0.05)。与NG组相比,NG+特立帕肽组细胞cAMP水平升高(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05);与NG组相比,HG组的上述检测结果则呈减弱趋势。与HG组相比,HG+特立帕肽组细胞cAMP水平上升(P<0.05),ALP活性增强(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力增强(P<0.05),细胞骨架清晰程度有所提升,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达上调(P<0.05)。与HG+特立帕肽组相比,HG+特立帕肽+H-89组细胞cAMP水平下降(P<0.05),ALP活性减弱(P<0.05),茜素红矿化结节生成能力减弱(P<0.05),细胞骨架清晰程度下降,PKA、CREB、RUNX2和Osx的mRNA表达下调(P<0.05)。结论特立帕肽可通过激活cAMP/PKA/CREB信号通路有效改善高糖微环境对MC3T3-E1细胞分化的抑制作用。

附子及附子干姜配伍对心衰大鼠血流动力学和cAMP-PKA信号转导通路的影响

目的研究附子和附子干姜配伍对心衰大鼠血流动力学和环磷酸腺苷(c AMP)-蛋白激酶A(PKA)信号转导通路的影响。方法采用盐酸普罗帕酮注射液静脉注射法建立心力衰竭动物模型,实验分为空白组、模型组、附子高、低剂量组(5、2.5 g/kg)、附子∶干姜(1∶1)高、低剂量组(10、5 g/kg),记录左心室内压(LVSP)、左心室内压最大上升/下降速率(±LVdp/dtmax);采用酶联免疫吸附法检测心脏组织中c AMP、PKA的含量。结果与模型组比较,给药组均可以升高LVSP和±LVdp/dtmax,其中附子∶干姜(1∶1)高剂量组效果最显著;与模型组比较,各组给药后心脏组织中c AMP和PKA含量均增加,其中附子∶干姜(1∶1)高剂量组最显著。结论附子干姜配伍有明显的抗心衰作用,可升高心肌组织c AMP、PKA含量,这可能是其作用机制之一。

脾虚证大鼠模型胃组织cAMP-PKA信号传导通路变化的研究

目的:探讨脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号通路的相关性。方法:将24只雄性SD大鼠按随机数字表法分为正常组、脾气虚组、脾阳虚组,脾气虚采用饱食1 d、禁食2 d、游泳15 d,脾阳虚采用脾气虚证加灌服番泻叶造模,造模后检测大鼠胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白的表达。结果:脾气虚组和脾阳虚组胃组织c AMP活性及PKA、CREB mRNA和蛋白表达均减弱。结论:脾气虚证和脾阳虚证大鼠胃组织的改变与c AMP-PKA信号传导通路有一定的相关性。

脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织cAMP/PKA-Gp信号通路变化的研究

目的:通过分别观察脾虚痰浊证大鼠胃、心肌及下丘脑组织c AMP/PKA-Gp信号转导通路相关蛋白的变化,探讨脾虚痰浊证的改变与c AMP/PKA-Gp信号转导通路的相关性。方法:16只SPF级雄性SD大鼠,随机分为正常组和脾虚痰浊组,每组各8只,脾虚痰浊证模型采用喂养高脂饲料,时间6个月。造模结束后,首先通过大鼠的一般状态和生理情况的改变进行模型评价,再分别取胃、心和下丘脑组织。分别采用ELISA法检测痰浊证大鼠不同组织c AMP活性,采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测PKA、CREB、PHK和Gp mRNA和蛋白的表达情况。结果:与正常组大鼠比较,脾虚痰浊证大鼠胃、心及下丘脑组织c AMP活性和PKA、CREB mRNA和蛋白的表达均有所减弱(P<0.01或P<0.05);并且脾虚痰浊证大鼠胃和心组织Gp mRNA和蛋白的表达也均有所减弱(P<0.01或P<0.05);此外,脾虚痰浊证大鼠心组织的PHK mRNA和蛋白的表达与正常组比较也存在显著性差异(P<0.01)。结论:脾虚痰浊证大鼠模型成立后,其胃、心及下丘脑组织的改变均与c AMP/PKA-Gp信号转导通路存在一定的相关性。

阴沟肠杆菌AmpC酶的特性研究

本文对阴沟肠杆菌 Amp C酶进行了以下 5个方面研究 ,其内容和结果分别为 :(1)联合药敏实验 :用平皿二倍稀释法研究第四代头孢菌素头孢吡肟 ,第三代头孢菌素头孢他啶、头孢噻肟、头孢呋辛与 β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦联合对 34株头孢他啶耐药菌 ,6株头孢他啶中敏菌及 15株头孢他啶敏感菌的体外抗菌活性。结果表明舒巴坦使头孢他啶对 32 .7% (18/ 5 5 )的阴沟肠杆菌的抗菌作用有明显抗菌增效作用。 96 .4%(5 3/ 5 5 )的阴沟肠杆菌对第四代头孢菌素头孢吡肟敏感。 (2 )酶稳定性实验 :紫外测定法测定 4株标准菌和 6株临床分离菌产生的 Amp C酶对 β-内酰胺类抗生素的水解率 ,结果表明阴沟肠杆菌产生的 β-内酰胺酶对第一代头孢菌素头孢唑林、头孢氨苄 ,第二代头孢菌素头孢克洛 ,第三代头孢菌素头孢哌酮及青霉素、氨苄西林、哌拉西林的水解率高。对第二代头孢菌素头孢呋辛、第三代头孢菌素头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶 ,第四代头孢菌素头孢吡肟以及亚胺培南、美洛培南和单环类 β-内酰胺抗生素氨曲南的水解率较低。 β-内酰胺酶抑制剂舒巴坦对 4株标准产酶菌及 6株临床分离菌产生的 β-内酰胺酶均无抑制作用 ,而三唑巴坦则对上述酶有明显的抑制作用。 (3) Amp C酶分子量测定 :用 SDS- PAGE测定酶的分子量 。

吗啡依赖小鼠脑组织cAMP系统的变化及腺苷酸环化酶磷酸化调节

目的 观察吗啡依赖小鼠脑组织腺苷酸环化酶 (AC) /c AMP信号系统的变化、AC活性的磷酸化调节及蛋白激酶 A(PKA)抑制剂对吗啡依赖形成的影响。方法 采用放射免疫和酶学方法。结果 (1)吗啡依赖小鼠纹状体、海马及大脑皮质 AC活性、c AMP含量及可溶相蛋白激酶 A(PKA)活性明显增加 ,小脑未见此变化 ;每日给吗啡前 15 min脑室注射 PKA抑制剂的小鼠纹状体、海马及大脑皮质 AC活性明显低于吗啡依赖小鼠 ;(2 )纳洛酮拮抗组未见上述变化 ;(3)吗啡依赖小鼠纹状体及大脑皮质 AC体外磷酸化水平明显高于对照 ;(4)每日给吗啡前15 m in脑室注射 PKA抑制剂可抑制吗啡依赖的产生。结论 吗啡依赖时脑组织存在着 AC/c AMP- PKA系统的上调 ,此变化由阿片受体所介导 ;PKA可通过影响 AC的磷酸化状态使 AC活性升高 ,造成吗啡长时作用下 AC/c AMP系统的正反馈调节 ,这可能是吗啡依赖机制中的重要环节。

降钙素基因相关肽对局灶性脑缺血再灌注大鼠脑cAMP反应元件结合蛋白mRNA表达的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质cAMP反应元件结合蛋白(CREB)mRNA表达的影响。方法用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,应用原位杂交和图像分析技术检测大鼠缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA表达。结果假手术组右侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA有明显表达,缺血再灌注组右侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA阳性产物吸光度值减少,CGRP组缺血侧海马CA1区和顶叶皮质CREB mRNA表达的吸光度值比缺血再灌注组增高(P<0.05)。结论CGRP上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马和顶叶皮质CREB mRNA的表达,CGRP对缺血神经元的保护作用可能通过激活CREB的转录与翻译,从而启动一系列信号通路来实现。

肝硬化患者胰高糖素负荷的血c-AMP及血糖反应性观察

目的 :观察肝硬化患者对胰高糖素负荷后的血c -AMP及血糖反应能力。方法 :38例肝硬化患者按Child -Pugh肝功能分级 ,分为A级 (10例 ) ,B级 (14例 ) ,C级 (14例 )三个亚组。 11例健康者为对照组。清晨空腹静卧 ,套管针肘静脉穿刺并固定 15min后采集基础血c -AMP和血糖标本 ,即刻以每公斤体重 2 .5 μg胰高糖素快速静脉注射 (30s内 ) ,分别于注射后 5 ,15 ,30及 45min采集血c -AMP和血糖标本。以放射免疫法测定血浆c -AMP浓度。以葡萄糖氧化酶法测定血糖浓度。结果 :肝硬化各组与对照组比较 ,基础血浆c-AMP浓度均显著高于对照组 ,而基础血糖无显著差异。胰高糖素负荷后 5min血浆c -AMP浓度即明显增高 ,于 10～ 15min达高峰 ,多数达峰时间在 10min ;血糖于 5min开始升高 ,15～ 30min达高峰 ,多数达峰时间在30min ,肝硬化各组的血c-AMP及血糖反应曲线均低于对照组 ,且肝硬化严重程度愈重 ,血c -AMP及血糖反应曲线愈低 ,峰值血浆c -AMP及峰值血糖浓度 ,肝硬化总体 (12 2 .0 8± 84.39pmol/ml,5 .71± 0 .75mmol/LA级 (148.0 7± 85 .0 8pmol/ml,6 .2 5± 0 .48mmol/L)、B级 (12 0 .47± 173 .34pmol/ml,5 .84± 0 .6 0mmol/L)及C级 (83 .0 4± 5 0 .96 pmol/ml,5 .11± 0 .6 7mmol/L)均显著低于对照组 (2 19.

癫癎持续状态对发育期大鼠学习记忆及海马磷酸化的c-AMP反应元件结合蛋白表达的影响

目的探讨癫癎持续状态(SE)对发育期大鼠学习记忆功能及海马磷酸化的c-AMP反应元件结合蛋白(pCREB)表达的影响。方法6周龄SD大鼠32只随机分为SE组和9g/L盐水对照组(NS组)。戊四氮(PTZ)诱导发育期大鼠SE。采用Morris水迷宫和Y迷宫观察大鼠学习记忆功能的改变,应用免疫组织化学方法检测大鼠海马各区pCREB的表达。结果与NS组比较,SE组在Morris水迷宫测试中平均逃避潜伏期明显延长(P<0.05),原平台所在象限的游泳时间明显缩短(P<0.05);Y迷宫中达标所需的训练次数显著增多(P<0.05),24h记忆保持率明显降低(P<0.05)。海马CA1区和齿状回(DG)区pCREB表达显著下调(P<0.05)。结论SE可使发育期大鼠学习记忆功能受损,其机制可能与海马pCREB表达减少有关。

AmpC酶的研究进展

大部分肠杆菌属及铜绿假单胞菌可以产生染色体介导的AmpC酶而引起对第三代头孢菌素的耐药。在缺乏β-内酰胺类抗生素诱导剂时 ,阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌、铜绿假单胞菌只产生少量的β-内酰胺酶 ,但在β-内酰胺类抗生素诱导剂存在时 ,AmpC酶的产量明显增加。然而 ,在缺乏调节基因ampR的大肠杆菌中 ,AmpC酶却不能被诱导。AmpC酶诱导调节的机理目前尚未完全阐明 ,但认为与ampR、ampE、ampG、ampD有关。最近 ,肺炎克雷白杆菌、大肠杆菌、产气肠杆菌、沙门菌中发现了质粒介导的AmpC酶 ,这些质粒介导的AmpC酶与阴沟肠杆菌、弗劳地枸橼酸杆菌及铜绿假单胞菌的AmpC酶的氨基酸序列具有同源性。

人参多糖对低温下大鼠卵巢黄体细胞cAMP生成量的调节作用

目的探讨低温暴露对大鼠黄体细胞环磷酸腺苷(c AMP)生成量的影响及人参多糖的调节作用。方法采用体外细胞培养法分离培养大鼠卵巢黄体细胞,设人参多糖组和实验组,进行37℃、0℃、-10℃环境温度多次暴露,观察黄体细胞c AMP生成量的变化;采用放射免疫分析方法测定c AMP生成含量。结果 0℃第1次低温暴露,c AMP生成量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);第2、3次低温暴露,c AMP均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);-10℃第1次低温暴露,c AMP生成量升高,差异有统计学意义(P<0.05),第2、3次低温暴露均明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。人参多糖组增高和下降幅度明显减少,第2、3次0℃冷暴露后及第3次-10℃冷暴露后,c AMP生成量明显高于实验组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论寒冷程度及暴寒次数对大鼠卵巢黄体细胞产生c AMP功能有影响,人参多糖对其有良好的调节作用。

疏水缔合AM/C_(10)AM/AMPS三元共聚物的合成与盐水溶液粘度性能

采用胶束氧化还原聚合方法合成了AM/C10AM/AMPS三元疏水缔合共聚物。简介了合成过程,给出了主要的合成参数。保持其他合成条件不变,分别改变疏水单体N 癸基丙烯酰胺C10AM和阴离子单体2 丙烯胺基 2 甲基丙磺酸AMPS在单体总量中的摩尔百分数(0～1.5%和15%～40%),得到了16个共聚物,在45℃、3.67和7.34s-1下测定了用矿化度4000mg/L的模拟大庆盐水配制的1000mg/L共聚物溶液的粘度,讨论了引起粘度变化的原因。有7个样品的粘度能满足大庆油田聚合物驱油的要求(7.34s-1下的粘度大于40mPa·s),其中由1.2%C10AM、35%AMPS及AM合成的共聚物样品粘度最高(61.5mPa·s)。对共聚温度等合成条件的影响作了一般性的讨论。表1参6。

改良三维试验方法检测阴沟肠杆菌高产AmpC酶和ESBLs实验研究

目的:评价酶提取物三维实验方法检测阴沟肠杆菌高产Am pC酶和超广谱β内酰胺酶ESBL s的可行性,探讨本地区阴沟肠杆菌产不同类型β内酰胺酶的流行状况。方法:应用改良酶提取物三维实验检测阴沟肠杆菌高产Am pC酶和ESBL s。结果:154株阴沟肠杆菌中,35株产Am pC酶,29株单产ESBL s,8株同时产两类酶,82株均不产生两种酶。结论:本地区阴沟肠杆菌产Am pC酶和ESBL s的流行处于一个相对较高的水平,改良的酶提取物三维实验可用于阴沟肠杆菌Am pC酶和ESBL s的检测。

基于C++ AMP加速并行蚁群算法

蚁群算法与同类智能算法相比具有计算速度快、收敛迅速、算法稳定性好等优点,但是随着数据量的增大,计算用时呈现指数型增长。为了更好地解决大数据量蚁群算法计算慢的问题,结合蚁群算法天然的并行性,基于最新的GPU并行化接口C++AMP实现了并行蚁群算法,使计算用时大幅度减少。经试验分析,该算法可以达到3倍的加速效果。

超广谱 β-内酰胺酶、AmpC酶细菌下呼吸道感染调查、耐药性监测(英文)

目的 了解我院呼吸内科病区下呼吸道标本中产超广谱 β -内酰胺酶 (ESBLs)、AmpC酶细菌检出及耐药情况 ,以指导临床医生合理使用抗生素。方法 收集我院呼吸病房 2 0 0 0年 1月～ 2 0 0 2年 1月期间 ,下呼吸道标本中分离出的肠杆菌科的细菌 ,用纸片扩散法检测细菌的耐药性 ,三维试验的方法检测ESBLs及AmpC酶。结果 共分离 2 0 1株肠杆菌科的细菌 ,产ESBLs细菌 32株 ,占 16 % ,产AmpC酶细菌 19株 ,占9.5 % ,药敏结果显示产ESBLs及AmpC酶细菌对 11种抗菌素的耐药率均高于非产ESBLs及AmpC细菌。结论 呼吸病区下呼吸道标本小肺炎克雷伯杆菌ESBLs检出率最高 ,达 13% ,阴沟肠杆菌AmpC酶的检出率较高。亚胺培南头霉素以及酶抑制剂是对产ESBLs细菌较为有效的药物 ,对产AsmpC酶的细菌 ,亚胺培南、头孢吡肟效果较好 ,对于氨基糖苷、喹诺酮、磺胺类抗菌素多重耐药呈上升趋势。

CGRP及NGF对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白磷酸化的影响

目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)及神经生长因子(NGF)对局灶性脑缺血再灌注大鼠海马cAMP反应元件结合蛋白(CREB)和磷酸化CREB(p-CREB)表达的影响。方法用线栓法阻塞大鼠右侧大脑中动脉制作局灶性脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学SABC法、Western blotting和图像分析方法检测大鼠手术侧海马CA1区CREB和p-CREB表达。结果缺血再灌注组海马CA1区CREB表达较假手术组减少,p-CREB表达高于假手术组(P<0.05);CGRP组和NGF组CA1区的CREB和p-CREB表达均高于缺血再灌注组(P<0.05);CGRP与NGF联合应用时CREB和p-CREB表达分别高于CGRP组和NGF组(P<0.05)。结论CGRP及NGF上调局灶性脑缺血再灌注大鼠海马CREB和p-CREB的表达,CGRP与NGF联合应用则作用更强,CGRP及NGF对缺血神经元的保护作用可能是通过上调神经元内CREB和p-CREB来实现的,CGRP与NGF对缺血神经元的保护有协同作用。

C++AMP视角下的计算机图像视频处理研究

随着计算机并行计算技术的不断更新与发展,数据处理规模也随之扩大,这直接提高了人们对相关工作者并行计算水平与能力的要求。在计算机图像视频处理中,各阶段都需要进行大量计算,而C++AMP并行计算,能够在很大程度上提升计算机处理效率与水平。而且获得清晰的图像边缘对于信息获取而言十分关键。因此,人们针对视频监控图像模拟无法有效识别的状况,制定了C++AMP视角下的图像边缘信息处理方式。据此,本文主要对C++AMP视角下的计算机图像视频处理进行深入探究。