过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株的构建

目的构建过表达及敲减LncRNA RP11-521C20.3的非小细胞肺癌A549稳转细胞株。方法根据lncRNA RP11-521C20.3基因序列,设计合成引物并进行扩增。将目的基因与Sbf I和EcoRI酶切的载体连接,构建pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE重组质粒,转染293T细胞,包装含lncRNA RP11-521C20.3质粒重组体的慢病毒。构建shRNA(RP11-521C20.3),连接到AgeI和EcoRI双酶切后的pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE载体上,经鉴定后转染293T细胞。再利用慢病毒介导,构建重组质粒pcSLenti-pA-RP11-521C20.3-CMV-SFH-EGFP-P2A-Puro-WPRE和pSLenti-U6-shRNA(RP11-521C20.3)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPRE,导入A549细胞。最后采用RT-qPCR技术在基因水平检测lncRNA RP11-521C20.3的表达。结果OV-lncRNA RP11-521C20.3组(过表达组)的lncRNA RP11-521C20.3 mRNA表达量高于NC-lncRNA RP11-521C20.3组(过表达对照组)(P<0.001),差异倍数为(20.43±0.69)。sh-lncRNA RP11-521C20.3组(敲减组)的lncRNA RP11-521C20.3mRNA表达量低于sh-NC组(敲减对照组)(P<0.001),差异倍数为(0.21±0.08)。结论成功构建了lncRNA RP11-521C20.3过表达及敲减稳转细胞株。为后续研究lncRNA RP11-521C20.3在慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用奠定重要基础。

23种国产柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d含量的RP-HPLC测定

目的:建立RP-HPLC法,分离和测定中国23种61个产地的柴胡属植物样品中柴胡皂苷a、c、d的含量。方法:采用C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速1 mL·min～1,检测波长210 nm。结果:不同品种柴胡以及相同品种、不同产地柴胡中的柴胡皂苷a、c、d含量差异悬殊。结论:本研究所建立的HPLC方法适用于柴胡属植物中柴胡皂苷a、c、d定量分析,结果准确可靠。

RP-HPLC法对不同产地蝙蝠葛几种主要生物碱的测定

目的：研究不同产地蝙蝠葛几种主要生物碱在质与量上的区别。方法：采用有机溶剂提取生药，应用ＲＰ－ＨＰＬＣ方法对东北产和咸宁产蝙蝠葛根茎中几种主要脂溶性生物碱进行定性定量测定。结果：东北生药中含量最高的生物碱前３位依次是蝙蝠葛苏林碱、蝙蝠葛碱和ｇｕａｔｅｇａｕｍｅｒｉｎｅ；而咸宁药材则为蝙蝠葛碱、蝙蝠葛诺林碱及蝙蝠葛新诺林碱，不含蝙蝠葛苏林碱。结论：不同产地蝙蝠葛药材所含生物碱在质和量两方面均有显著差异。

RP-HPLC法同时测定金银花中的2种三萜皂苷

目的：建立同时测定金银花中三萜皂苷成分忍冬苦苷A和忍冬苦苷C含量的方法。方法：采用反相高效液相色谱法,A lltech C18柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,流动相甲醇-乙腈-0.1%磷酸,检测波长210 nm。结果：忍冬苦苷A和忍冬苦苷C分别在0.15-2.25μg（r=0.999 9）和0.11-1.65μg（r=0.999 1）,呈现良好线性关系,平均加样回收率分别为99.9%,98.3%。结论：忍冬苦苷A和忍冬苦苷C在不同地区的金银花药材中含量差异较大。

RP－HPLC法分析白花前胡中Pd－Ia和紫花前胡中Pd－C－I的含量

建立了ＲＰ－ＨＰＬＣ测定白花前胡根中３′（Ｒ）－ａｎｇｅｌｏｙｌｏｘｙ－４′（Ｒ）－ａｃｅｔｏｘｙ－３′，４′－ｄｉｈｙｄｒｏｓｅｓｅｌｉｎ（Ｐｄ－Ｉａ）和紫花前胡根中３′（Ｒ）－ｓｅｎｅｃｉｏｙｌｏｘｙ－４′（Ｓ）－ｈｙｄｒｏｘｙ－３′，４′－ｄｉｈｙｄｒｏｘａｎ－ｔｈｙｌｅｔｉｎ（Ｐｄ－Ｃ－Ｉ）含量的方法。色谱柱为ＯＤＳ，甲醇－水（７１２９ｖ／ｖ）为流动相，流速为０．４ｍｌ／ｍｉｎ，紫外检测波长３２０ｎｍ，线性范围分别为０．０２～０．０６μｇ和０．０１～０．０５μｇ，相关系数分别为ｒ＝０．９９９０和ｒ＝０．９９９６，平均回收率分别为９９．５３％和１００．９３％。本法结果准确，步骤简便，灵敏度高，分析速度快，重现性好，为常用中药前胡的质量检测提供了现代可靠手段。

RP-HPLC法测定巫山淫羊藿中4种成分的含量

目的:用 HPLC 梯度洗脱法测定巫山淫羊藿中4种主要成分的含量,考察了淫羊藿属苷 A、双藿苷 A、朝藿定 C 和淫羊藿苷在巫山淫羊藿不同部位中的分布。方法:采用 RP-HPLC 法测定,以 BECKMAN COULTER_(TM)-C_(18)(10μm,4.6 mm×250mm)为色谱柱,流动相为乙腈-水,梯度洗脱(0 min,乙腈-水比例为20:80;5 min,比例为30:70;10 min,比例为50:50),流速为1 mL·min^(-1),检测波长270 nm。结果:淫羊藿属苷 A 在0.188μg～1.880μg,淫羊藿苷在0.214μg～2.140μg,双藿苷 A在0.240μg～2.400μg,朝藿定 C 在0.282μg～2.820μg范围内呈良好线性关系;重复性实验的 RSD 分别为1.2%,1.3%,1.2%,1.2%。巫山淫芋藿不同部位双藿苷 A 和朝藿定 C 的含量较大,同一植株的不同部位中朝藿定 C 的分布为根>叶>茎。双藿苷 A 的分布为根>茎>叶,淫羊藿属苷 A 和淫羊藿苷含量较少。结论:巫山淫羊藿根中的化学成分以朝藿定 C 为最高,双藿苷 A 为次,而巫山淫羊藿叶中也以朝藿定 C 含量为最高。

RP-HPLC测定不同生长期狗枣猕猴桃叶中狗枣猕猴桃黄酮C的含量

目的:通过测定不同生长期狗枣猕猴桃叶中狗枣猕猴桃黄酮C的含量,为确定狗枣猕猴桃的采收期提供科学依据。方法:采用反相高效液相色谱法,使用ZORBAX Extend C_(18)柱(46mm×250mm,5μm),流动相甲醇-水(51:49),流速1.2mL·min^(-1),检测波长267nm,柱温25℃。结果:不同生长期狗枣猕猴桃叶中狗枣猕猴桃黄酮C的含量发生变化。该成分在6月中旬含量最高;6月末到7月中旬含量有所下降,但降幅不大,7月末至8月中旬含量明显降低。结论:6月中旬为狗枣猕猴桃的最佳采收期。

不同糖耐量人群的PAI-1、C-RP水平及其与体脂等的关系

对50例NGT,69例IGT,46例T2DM患者研究显示:(1)T2DM与IGT、NGT相比,C-RP和PAI水平升高,IGT与NGT相比也如此。(2)BMI≥25与BMI<25相比,PAI-1和C-RP均升高,见于NGT,IGT和T2DM组。(3)PAI-1与C-RP水平的升高随血糖异常从NGT到IGT再到T2DM而逐渐加重,且与体脂正相关。

RP-HPLC法测定秦艽不同器官中獐牙菜苦苷含量的研究

［目的］建立秦艽不同器官中獐牙菜苦苷含量测定的RPHPLC方法。［方法］定量分析秦艽不同器官中獐牙菜苦苷含量。［结果］獐牙菜苦苷 在0.20～1.8 μg范围内成良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为98.6%（RSD=1.32%）。麻花秦艽叶中獐牙菜苦苷的含量最高，茎中含量最低。［结论］该研究可为秦艽药材的合理开发利用提供依据。

RP-HPLC法测定银杏外种皮中银杏内酯C含量

[目的]采用反相高效液相色谱法(RP-HPLC)法测定银杏外种皮中银杏内酯C含量。[方法]采用Waters ODSC18柱(250.0 mm×4.6 mm);以乙腈∶水=40∶60为流动相;流速1.0 ml/min;柱温30℃;检测波长为210 nm。以银杏内酯C标准品为对照,采用外标法定量测定。[结果]银杏外种皮中银杏内酯C含量为0.043%;该方法平均回收率为101.06%,RSD为2.25%。[结论]该方法结果准确、可靠,便于操作,为银杏外种皮中银杏内酯C含量的测定以及进一步开发银杏外种皮资源提供了理论依据。

慢性鼻窦炎和血浆C-RP、NO和ET-1的表达水平与脑梗死之间的相关性

目的通过对比分析探讨慢性鼻窦炎和血浆生化检测指标与脑梗死发生的相关性。方法将入选的4575例研究对象分别分为:(1)脑梗死组和非脑梗死组,比较两组慢性鼻窦炎的发病情况;(2)单纯慢性鼻窦炎组(A组)、单纯脑梗死组(B组)、慢性鼻窦炎合并脑梗死组(C组)及非慢性鼻窦炎非脑梗死组(正常对照组,D组),检测各组患者血浆中C-RP、NO和ET-1的表达水平。结果脑梗死组中慢性鼻窦炎的发病率(12.30%)明显高于非脑梗死组(8.4%)(P<0.01);A组、B组和C组的C-RP、NO和ET-1的表达水平均明显高于D组(P<0.01),其中C组的表达水平最高(P<0.01)。结论慢性鼻窦炎与血浆中C-RP、NO和ET-1的高表达均与脑梗死的发生具有相关性。

RP—HPLC测定不同产地盾叶薯蓣中3种甾体皂苷的含量

目的:建立反相高效液相色谱法测定鲜盾叶薯蓣根茎中盾叶皂甘 G(zingiberenin G)、盾叶皂苷 A(zingiberenin A)和纤细皂苷(gracillin)的含量。方法:采用 Phenoxent Luna C_(18)(2)色谱住(5μm,250 mm×4.6mm),以乙腈-水为流动相梯度洗脱[0～10min,乙腈从25%→35%;10～15min,乙腈为35%;15～25 min,乙腈从35%→55%;25～35min,乙腈为55%],流速1.0 mL·min^(-1),拄温30℃,检测波长206 nm。结果:样品中各待测组分均能良好分离。盾叶皂苷 G、盾叶皂苷 A 和纤细皂苷的线性范围均为1.0～12.5μg(相关系数为0.9998～0.9999)。平均回收率(n=6)分别为98.1%,99.4%,98.7%;RSD 分别为1.0%,1.8%,0.7%。结论:本方法简便易行、准确可靠,可用于盾叶薯蓣中皂苷的测定和质量控制。

用RP-HPLC法考察头孢噻利与维生素C的配伍稳定性

目的考察注射用硫酸头孢噻利(第4代头孢类抗生素)与维生素C注射液在5%葡萄糖注射液中的配伍稳定性。方法用反相高效液相色谱法,测定注射用硫酸头孢噻利与维生素C配伍后两者的含量变化,观察和检测配伍液的外观及pH值的变化。结果室温下配伍液8 h内,外观、pH值及含量无明显变化。结论注射用硫酸头孢噻利与维生素C注射液在5%葡萄糖注射液中配伍后于室温下8 h内可使用。

慢性淋巴细胞白血病患者长链非编码RNA RP5-180C18.1的表达及其预后评价作用

目的 分析慢性淋巴细胞白血病(CLL)患者长链非编码RNA RP5-180C18.1的表达及其在CLL的诊断及预后中的作用。方法 收集本院就诊的CLL患者骨髓液并对患者进行随访,采用q PCR方法检测RP5-180C18.1的相对表达量。结果 与对照组比较,RP5-180C18.1在CLL患者高表达(P=0.013);与IGHV突变型CLL患者比较,RP5-180C18.1在IGHV野生型CLL患者中表达更高(P=0.023);与ZAP70低表达CLL患者比较,RP5-180C18.1在ZAP70高表达CLL患者中表达更高(P=0.002);然而,RP5-180C18.1在CD38高、低表达患者中无统计学差异(P=0.206);RP5-180C18.1高表达CLL患者预后更差,总生存期及无进展生存期更短(P分别为0.048、0.041)。结论 RP5-180C18.1表达可作为CLL诊断及预后分析指标。

RP(C18)-HPLC法测定药物片剂中秋水仙碱的含量

在AccQ·TagC18柱上,用内含0 05mol·L-1KH2PO4 H3PO4缓冲溶液的CH3OH∶H2O=40∶60(V/V)(pH=5 5)作流动相,流速为1 0ml·min-1,以紫外 可见检测器于254nm处进行检测,开发了一种RP(C18) HPLC法测定药物片剂中秋水仙碱含量的方法,并对系统的专一性和实用性进行了验证。

用RP-HPLC法测定维C银翘片中绿原酸和甘草酸的含量

建立了测定维C银翘片中绿原酸和甘草酸含量的RP-HPLC法,本法线性关系良好,绿原酸的平均回收率为101.4%,RSD为2.68%;甘草酸的平均回收率为98.2%,RSD为2.80%.方法简便、准确、重现性好,可用于维C银翘片的质量控制和评价.

RP-HPLC法测定毛鸡骨草中芹菜素-6,8-C-二葡糖苷含量

目的建立测定毛鸡骨草药材中芹菜素-6,8-C-二葡糖苷含量的方法。方法用反相高效液相色谱法,色谱柱为Lichrospher C18(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为甲醇-0.1%三氟乙酸(35:65),流速1.0 mL/min,检测波长272 nm,柱温为室温。结果芹菜素-6,8-C-二葡糖苷在0.010 2～0.102 0 mg/mL范围内线性关系良好(r=0.999 8);平均回收率(n=6)99.3%,RSD 2.43%。结论所建方法简捷、快速,结果准确,可为评价毛鸡骨草药材的质量提供可靠的依据。

双重滤过血浆置换对类风湿关节炎RF、C-RP、ESR影响的研究

目的探讨双重滤过血浆置换对类风湿关节炎RF、C-RP、ESR的影响。方法 28例患者均给予双重滤过血浆置换治疗,每次间隔7 d,连续3次。同时,患者既往应用药物激素或非甾体抗炎药和(或)免疫抑制剂在双重滤过血浆置换治疗1次后,视病情逐渐减量。结果 RF、C-RP、ESR均明显下降。结论双重滤过血浆置换可明显降低类风湿关节炎患者RF、C-RP、ESR水平。

RP-HPLC测定夏橙中Vc含量

建立了一种利用反相高效液相色谱测定橙橘中Vc含量的方法。采用Agilent1100高效液相色谱仪,Zorbaxeclipse XDB C18150.0 mm×4.6 mmi.d色谱柱,以0.05 mol/L磷酸二氢钾缓冲溶液-甲醇（95∶5）作为流动相,流速1.00 ml/min,于265 nm波长检测。在一定浓度范围内,Vc的峰面积与其浓度呈良好的线性关系（相关系数为0.999 8）,相对标准偏差为0.22%;方法回收率为91.6%-104.1%。

RP-HPLC法同时测定益肺佳营养液中维生素C和维生素B_6的含量

目的 :建立了同时测定益肺佳营养液中维生素C和维生素B6含量的方法。方法 :高效液相色谱法。固定相为十八烷基硅烷键合硅胶 ;流动相为 0 .0 1mol/L磷酸二氢钾溶液 (用磷酸调节PH至 2 .5)。检测波长 :①维生素C紫外检测 ,波长 2 4 2nm ;②维生素B6荧光检测 ,激发波长 2 90nm ,发射波长 395nm。结果 :线性范围 :维生素C 2 0 .5～1 0 2 .3μg/ml,r =0 .9999;维生素B60 .2 8～ 1 .4 2 μg/ml,r=0 .9999。方法回收率 :维生素C为 99.1 %,n =5,RSD为0 .4 8%;维生素B6为 1 0 0 .2 %,n =5,RSD为 1 .2 1 %。结论 :该方法操作简便快速 ,灵敏度高 ,结果准确 ,适用于该制剂中维生素C和维生素B6的含量测定。