基于生物信息学预测分析C/EBPα靶基因及其在急性髓系白血病中的潜在机制

急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)属于造血系统克隆性恶性疾病。为了寻求AML临床治疗的潜在靶点,预测急性髓系白血病相关转录因子C/EBPα在急性髓系白血病中的发病机制,利用基因表达数据库(gene expression omnibus,GEO)筛选出敲除Cebpa基因的实验组与正常造血干细胞间的差异表达基因,并对其进行基因本体(GO)功能分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析。结果显示:在86个差异表达基因中,共有44个上调基因和42个下调基因;差异基因具有参与RNA聚合酶Ⅱ启动子转录的正调控、造血、基因表达的正向调控等功能,并且参与JAK-STAT信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路的传导;而C/EBPα也与信号通路中的蛋白具有互作关系。由此预测异常表达的C/EBPα可能通过影响信号通路来干预急性髓系白血病的发病与预后。

朗德鹅C/EBPα基因的克隆及不同处理对其在肝脏中表达的影响

为研究C/EBPα基因与朗德鹅肝脏脂肪代谢的关系,本研究克隆了朗德鹅C/EBPα基因,预测其蛋白结构和功能,并通过实时荧光定量PCR技术检测了朗德鹅肝脏C/EBPα基因在对照组和填饲、填饲+T3、填饲+T3+甜菜碱、填饲+甜菜碱等4个不同处理组中的表达情况。结果发现:朗德鹅C/EBPα基因序列长为1 401bp,开放阅读框(ORF)为975bp,编码324个氨基酸的蛋白质,两侧分别是210bp的5′-UTR和397bp的3′-UTR;预测朗德鹅C/EBPα蛋白位于细胞核中,不含有信号肽,不含有跨膜区,含有bZIP功能结构域;不同填饲处理组肝脏组织中C/EBPα基因的表达显著或极显著高于对照组(P<0.05或P<0.01),其中填饲+T3+甜菜碱处理组显著高于其它3个填饲处理组(P<0.05),与对照组差异极显著(P<0.01)。推测C/EBPα基因在朗德鹅肝脏脂肪代谢过程中发挥作用。

复方大黄制剂对肥胖大鼠脂肪细胞瘦素及C/EBPα的影响

目的 :观察正常大鼠、肥胖大鼠和复方大黄制剂灌服 1个月肥胖大鼠脂肪细胞瘦素和C/EBPαmRNA表达的变化及C/EBPα对瘦素表达的调控。方法 :用大、中、小剂量分组 (2 0mg·10 0g-1;4 0mg·10 0g-1;12 0mg·10 0g-1)对肥胖大鼠进行复方大黄制剂灌服。制备脂肪细胞悬液后采用免疫组化ABC法及WesternBlot检测脂肪细胞瘦素表达水平。应用定量RT PCR技术检测脂肪细胞中C/EBPα基因mRNA表达的变化。结果 :肥胖大鼠灌服中剂量复方大黄制剂 30d后体重明显减轻 ;Lee’s指数明显降低。免疫组化ABC法及WesternBlot检测瘦素表达水平 ,发现脂肪细胞瘦素表达明显减弱。定量RT PCR结果发现 ,肥胖大鼠脂肪细胞中C EBPαmRNA表达水平较正常大鼠高 ,在中剂量复方大黄制剂灌服 1个月后 ,随着肥胖大鼠体重的减轻 ,脂肪细胞中C/EBPαmRNA水平也随之降低 ,与瘦素水平降低程度呈显著正相关 (r =0 98,P <0 0 1)。结论 :肥胖大鼠脂肪细胞的瘦素表达水平较正常大鼠高 ;灌服复方大黄制剂减肥有效的同时 ,脂肪细胞瘦素表达水平明显下降。肥胖大鼠脂肪细胞中C/EBPαmRNA表达水平在复方大黄制剂治疗后明显降低 ;其降低程度与脂肪细胞瘦素表达水平间呈显著正相关。

多发性骨髓瘤患者体内C/EBPα可能导致Hepcidin升高

本研究探讨多发性骨髓瘤患者外周血单核细胞hepcidin表达升高的可能机制。收集符合条件的初治多发性骨髓瘤患者的临床资料及采集外周静脉血,用ELISA法测定血清IL-6浓度,CD14+磁珠分选外周血单核细胞,实时定量PCR测定外周血单核细胞hepcidin,IL-6和C/EBPαmRNA。结果显示,入选17例初治多发性骨髓瘤患者的血红蛋白水平降低(97.8±27.5 g/L),呈现慢性病贫血特点,与对照者相比其外周血单核细胞hepcidin和C/EBPα表达明显升高(分别为P=0.0002,P=0.001),血清IL-6水平也明显高于正常对照(P=0.00003)。初始患者血清IL-6水平与单核细胞hepcidin,C/EBPα表达呈正相关(P<0.05),单核细胞C/EBPα表达与单核细胞hepcidin表达呈正相关(P<0.05)。结论:初治多发性骨髓瘤患者体内升高的IL-6可能通过上调C/EBPα诱导hepcidin表达。

鸡PPARγ和C/EBPα的蛋白表达及其对肉鸡腹脂含量的影响

利用IPTG诱导含有原核表达质粒pGEX-4T-1/PPARγ和pGEX-4T-1/C/EBPα的大肠杆菌BL21(DE3)菌株,表达GST-PPARγ和GST-C/EBPα融合蛋白,表达产物用Glutathione Sepharose 4B纯化,将纯化后的重组蛋白免疫肉仔鸡,检测其产生抗体情况及其对肉鸡腹脂含量的影响。SDS-PAGE结果显示融合蛋白GST-PPARγ在大肠杆菌胞内主要以包涵体的形式表达,分子量大约80ku;融合蛋白GST-C/EBPα在大肠杆菌胞内主要以可溶性蛋白形式表达,分子量大约62ku。主动免疫肉鸡结果表明PPARγ、C/EBPα及混合组鸡只均产生了较高水平的抗体,且PPARγ组肉鸡腹脂含量显著低于对照组。

新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系

为探讨新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα第一外显子突变与HPV16感染的关系。收集46例新疆维吾尔族宫颈癌标本,采用基因测序方法检测C/EBPα第一外显子的突变,利用PCR扩增方法分析HPV16病毒的感染,进行统计学分析。结果发现C/EBPα第一外显子突变的患者HPV16病毒感染率高。且C/EBPα第一外显子突变的患者与未突变的患者的HPV16病毒的感染率存在显著性差异。McNemanr检验P<0.05双侧。由此可知,新疆维吾尔族宫颈癌组织中C/EBPα基因第一外显子突变与HPV16病毒的感染相关。C/EBPα第一外显子突变可能是导致宫颈癌的一个重要因素。

C/EBPα在肝细胞癌中的表达及意义

目的检测肝细胞癌(HCC)标本中肝细胞核因子C/EBPα的表达,探讨其在肝癌发生、发展中的作用。方法采用逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)和免疫组化方法检测C/EBPα mRNA和蛋白质在肝癌组织和癌旁肝组织中的表达。结果 C/EBPα mRNA在癌旁肝组织中的相对表达量(0.737±0.268)明显高于肝细胞癌组织(0.258±0.190),差异有显著性(P<0.05)。C/EBPα mRNA的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。C/EBPα蛋白在癌旁肝组织中的阳性率(100.0%)明显高于肝细胞癌组织(38.4%),差异有显著性(P<0.05)。C/EBPα蛋白的表达与肿瘤分化程度有关(P<0.05)。结论 C/EBPα在肝细胞癌中表达下调在肝癌的发展过程中起重要作用。

原代培养大鼠脂肪前体细胞分化过程中PPARγ和C/EBPαmRNA的表达(简报)

脂肪前体细胞是一类具有增殖分化能力的单能干细胞，在体内多种因素的影响下，脂肪前体细胞聚脂分化为成熟脂肪细胞。研究表明，脂肪前体细胞的聚脂分化过程受到一系列基因的调控，其中，过氧化物酶体增殖体激活受体（peroxisome proliferatom-activated receptor gamma，PPARγ）与CCAAT增强子结合蛋白α（CCAAT／enhancer binding protein alpha，C／EBPα）是调控脂肪前体细胞分化的两个主控基因，

结肠癌组织中C/EBPα的表达及其对SW480细胞侵袭性的影响

目的综合分析结肠癌组织中转录因子CCAAT/增强子结合蛋白-α(C/EBPα)的表达,并研究C/EBPα的表达对结肠癌SW480细胞系侵袭性的影响。方法选取2014年1月至2015年9月在该院确诊为结肠癌的36例患者临床资料,利用免疫组织化学法分析36例结肠癌患者的结肠癌组织和正常组织中的C/EBPα表达情况。将结肠癌组中的C/EBPα表达情况设为研究组,正常组织中的C/EBPα表达情况设为对照组,每组均为18例。采用SPSS17.0统计学软件进行统计学分析,分析C/EBPα的表达与结肠癌临床病理参数之间的关系。在此基础上,利用蛋白免疫印迹法(Western blot)发现SW480细胞系为高表达C/EBPα肠癌细胞株;构建pCDGFP-C/EBPα真核表达质粒,通过细胞划痕实验研究其迁移能力的变化,并检测与肿瘤侵袭相关蛋白(KLF5、MMP-2、MMP-9、ECD)表达量的相关性。结果免疫组织化学法的相关研究结果显示,在正常组织中,C/EBPα的低表达率为6.21%;在结肠癌组织中,C/EBPα的低表达率为67.84%,两组数据比较差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示,低表达C/EBPα的患者的肿瘤直径越大、TMN分期越晚,过表达C/EBPα的SW480细胞的KLF5、MMP-2、MMP-9表达越低,而E钙黏蛋白(ECD)表达越高。结论低表达C/EBPα与结肠癌的TMN分期和转移有着密切关系,过表达C/EBPα能够显著降低结肠SW480癌细胞的侵袭性,对未来的研究方向有着重要的临床研究价值。

C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤中的表达及临床意义

目的:研究C/EBPα基因在老年多发性骨髓瘤(MM)中的表达变化及其临床预后意义。方法:自2015年2月-2017年10月在我院接受治疗的69例老年MM患者作为MM组,同时选取38例健康体检者作为对照组,采集2组人员骨髓并分离单个核细胞。采用RT-PCR方法检测样本中单个核细胞的C/EBPα基因表达水平,采用Western blot方法检测C/EBPα蛋白表达水平,采用免疫组织化学方法检测骨髓组织中的C/EBPα水平,探讨C/EBPα基因表达与MM患者临床特征及生存期的相关性。结果:MM患者中C/EBPα基因mRNA及其蛋白表达水平均明显低于对照组(P <0. 05)。C/EBPα表达水平与MM患者的ISS分期、CRP、Ca^(2+)、β2-MG、LDH及骨髓瘤细胞比例均有明显相关性(P <0. 05)。C/EBPα基因的表达与MM患者的性别、年龄、免疫球蛋白分型、Hb水平无相关性(P>0. 05)。通过免疫组织化学实验发现,对照组骨髓样本染色较深,CR、PR及复发的MM患者骨髓样本染色依次减轻。通过Western blot检测发现,CR组MM患者C/EBPα蛋白的水平均显著高于PR和复发组患者(P <0. 05)。KaplanMeier生存分析发现,C/EBPα基因高表达的患者组OS和DFS均优于低表达组(P <0. 05)。多因素Cox回归分析表明,CRP、骨髓瘤细胞比例及C/EBPα基因表达水平是影响OS及PFS独立因素(P <0. 05)。结论:C/EBPα基因在MM患者中表达水平较低,其低水平表达可能刺激MM的发生; C/EBPα基因表达与MM疾病发展密切相关。

骨髓增生异常综合征患者c/ebpα基因表达水平及其临床意义

本研究探讨骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)患者CCAAT/增强子结合蛋白α(CCAAT/enhancer binding protein alpha,C/EBPα)基因的表达及其在MDS发病、病情进展中的意义。应用Taqman探针的实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,RQ-PCR)方法检测33例MDS患者和14例正常对照者的骨髓单个核细胞中的c/ebpα mRNA的表达,分析其在MDS中的表达水平变化。结果表明,MDS低危组和高危组c/ebpα mRNA的表达水平均显著低于对照组(分别为t=3.310,p<0.01,t=6.260,p<0.001),且c/ebpαmRNA在MDS高危组中的表达水平较低危组降低(t=2.709,p<0.05)。MDS患者中c/ebpα mRNA表达水平与患者性别、年龄及血象无明显相关性,但MDS患者c/ebpαmRNA低表达组的骨髓中原始细胞比例明显高于c/ebpα mRNA高表达组(p<0.01)。结论:c/ebpα基因表达的下调与MDS的发病密切相关,c/ebpα基因可能是诱导MDS发病的重要分子生物学标志;c/ebpα表达下调的程度与MDS的病情进展有密切关系。

三氧化二砷联合维生素C对多发性骨髓瘤患者MMP-13、NF-κB-p65、C/EBPα表达及预后的影响

目的探讨三氧化二砷联合维生素C对多发性骨髓瘤患者基质金属蛋白酶(MMP)-13、核因子(NF)-κB-p65、CCAAT增强子结合蛋白(C/EBP)α表达及预后的影响。方法选择多发性骨髓瘤患者102例,依据随机表法随机分为观察组51例与对照组51例。对照组采用常规化疗方案,观察组采用三氧化二砷联合维生素C治疗。两组疗程均为12 w。比较两组治疗效果,治疗前后血浆MMP-13水平、NF-κB-p65蛋白阳性表达和C/EBPαmRNA表达及预后情况。结果观察组总有效率(86.27%)明显高于对照组(66.67%,P<0.05)。两组治疗后血浆MMP-13水平较治疗前均明显降低(观察组:t=18.270,对照组:t=10.805,均P<0.05);观察组治疗后血浆MMP-13水平明显低于对照组(t=10.549,P<0.05)。两组治疗后NF-κB-p65蛋白表达阳性率较治疗前均明显降低(观察组:χ2=28.990,对照组:χ2=11.492,均P<0.05);观察组治疗后NF-κB-p65蛋白表达阳性率明显低于对照组(χ2=5.830,P<0.05)。两组治疗后C/EBPαmRNA表达较治疗前均明显升高(观察组:t=24.277,对照组:t=8.913,均P<0.05);观察组治疗后C/EBPαmRNA表达明显高于对照组(t=8.570,P<0.05)。观察组PFS和OS均明显长于对照组(均P<0.05)。结论三氧化二砷联合维生素C对多发性骨髓瘤患者疗效良好,可下调MMP-13和NF-κB-p65蛋白表达,上调C/EBPα蛋白表达,且预后良好。

肾衰养真胶囊对胰岛素诱导的大鼠脂肪细胞瘦素及C/EBPα表达的影响

目的:探讨肾衰养真胶囊对胰岛素刺激的大鼠脂肪细胞瘦素(leptin)及瘦素基因启动子CCAAT框增强子结合蛋白(C/EBPα)mRNA表达的影响。方法:给予大鼠灌胃制备肾衰养真胶囊含药血清,应用含药血清处理经胰岛素刺激的脂肪细胞,采用放免法检测上清瘦素分泌水平,RT-PCR法检测细胞C/EBPαmRNA表达水平。结果:经胰岛素干预后脂肪细胞瘦素表达显著增加,加入肾衰养真胶囊含药血清后脂肪细胞瘦素、C/EBPα的表达显著受到抑制。结论:肾衰养真胶囊可通过抑制C/EBPα的表达从而削弱胰岛素刺激引起的瘦素的过度表达。

鸡肝细胞中C/EBPα基因的敲低及对糖脂代谢相关基因表达的影响

C/EBPα即CCAAT/增强子结合蛋白α基因,其编码的CCAAT/增强子结合蛋白是重要的转录调控因子,在细胞的分化和代谢过程中发挥着重要的调节作用。试验利用RNAi来敲低鸡LMH细胞系中C/EBPα基因的表达,以研究C/EBPα基因影响脂肪代谢的机制。根据鸡C/EBPα基因的mRNA序列,设计3对siRNA,用RNAi干扰技术来敲低鸡LMH细胞中的C/EBPα基因表达,然后用荧光定量PCR检测C/EBPα基因的表达情况,发现其中的C/EBPα-siRNA-161能够显著降低C/EBPα基因的表达;并将C/EBPα-siRNA-161转染LHM细胞后48 h后,利用荧光定量PCR检测LMH细胞中糖脂代谢相关基因(PCK1、SCD、GLUT2、PPARγ、INS、G6PC、IGF1、IGF2、INSR、STAT3)的表达,发现在LMH细胞中PCK1、G6PC、GLUT2基因的mRNA表达量下降,结果表明C/EBPα基因能影响糖代谢相关基因G6PC、GLUT2、甘油异生相关基因PCK1的表达,证实了C/EBPα基因对鸡肝细胞中的糖脂代谢具有调控作用,通过调控C/EBPα基因的表达将影响糖吸收及甘油异生。

神经病理性疼痛诱导小鼠脊髓CCAAT增强子结合蛋白α(C/EBPα)表达上调

目的:观察神经病理性疼痛小鼠脊髓中C/EBPα的表达,探讨其对疼痛行为的影响。方法:小鼠腰5脊神经结扎(L5 spinal nerve ligation,SNL)诱导神经病理性疼痛。在不同时间点取L5节段脊髓,通过实时定量PCR,Western blot和免疫荧光的方法,检测SNL术后脊髓中C/EBPα的表达变化;免疫荧光双标方法检测C/EBPα分别与神经元标志物Neu N、星形胶质细胞标志物GFAP,以及与小胶质细胞标志物CD11b的共定位情况;鞘内注射氯化锂观察对疼痛行为的影响。结果:SNL诱导小鼠脊髓内C/EBPα长时间表达上调;C/EBPα主要分布在脊髓神经元中,少量分布于星形胶质细胞,且大部分定位在细胞核。鞘内注射氯化锂缓解了神经病理性疼痛。结论:外周神经损伤诱导C/EBPα在脊髓背角神经元中表达。靶向抑制脊髓C/EBPα缓解神经病理性疼痛。

转录因子C/EBPα和SOX4在白血病中的研究进展

白血病是常见的恶性肿瘤,药物治疗是其传统治疗方法。由于基因突变导致耐药使其发病率和死亡率逐年升高。近来针对基因靶向治疗为白血病开辟了道路,在临床上有着良好应用前景。C/EBPα基因在调节细胞增殖与分化平衡中至关重要。SOX4主要参与胚胎发育、分化及器官形成。研究发现在白血病中,C/EBPα表达降低,SOX4表达升高,且SOX4是C/EBPα下游靶基因。C/EBPα和SOX4能够与多种因子相互作用参与白血病发病,且C/EBPα通过多种方式抑制SOX4表达,这可能为白血病靶向治疗以及延缓白血病发展进程提出了新思路。本文就两者在白血病发生发展中的机制及其关系作一综述。

C/EBPαp30 plays transcriptional regulatory roles distinct from C/EBPαp42

CCAAT/enhancer 有约束力的蛋白质α(C/EBP α) 是 transcriptional 禁止细胞增殖的规章的因素，和其他的翻译开始生产二多肽， C/EBP α p 30 并且 C/EBP α p 42。由表示介绍， C/EBP α p 30specifically 禁止了基因的一个唯一的集合，这被揭示，包括 MPP11， p84N5 和 SMYD2，它没被 C/EBP α p 影响 42 在两根 QSG-7701 hepatocyte 房间线和 QGY-7703 hepatoma， cells.Semi 量的 RT-PCR 分析独立地证实了这些结果。Chromatinimmunoprecipitation 试金显示出 30 比 C/EBP α p 更强烈绑了在这些基因的倡导者的那 C/EBP α p 42。在 C/EBP α是调整的 down 的临床的 hepatoma 在样品，所有三基因明确地由 30 在上面的 C/EBP α p 禁止了调整。然而， MPP11， p84N5 和 SMYD2genes 的压抑可能直接不涉及 C/EBP α p 30-mediated 生长抑制。我们的数据建议 30 调整的那 C/EBP α p 目标基因的一个唯一的集合并且多于 C/EBP α p 的 dominant-negativeregulator 42。

融合蛋白AML1-ETO对C/EBPα基因表达的影响

背景:已有研究显示AML1-ETO可以通过包括抑制C/EBPα的功能在内的机制引起分化的阻滞。目的:观察AML1-ETO对髓系分化相关基因C/EBPα表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用。方法:应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937、U937-MOCK和U937-A/E1细胞表面抗原CD11b、CD14的表达;荧光实时定量PCR检测C/EBPαmRNA的表达;免疫印迹法检测C/EBPα蛋白的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与C/EBPα基因启动子之间直接的相互作用情况。结果与结论:AML1-ETO转染细胞的细胞表面分化抗原CD11b和CD14的表达明显下降,且转染了AML1-ETO的U937细胞系中,C/EBPα的mRNA与蛋白水平均下调,转染细胞沉淀富集的DNA中含有C/EBPα基因的启动子序列。结果提示C/EBPα是AML1-ETO的直接靶基因,AML1-ETO能下调C/EBPα的表达。

不同品种猪PPARγ和C/EBPα基因表达规律与肌内脂肪含量的相关

【目的】研究PPARγ和C/EBPα基因在猪不同组织、月龄和品种中mRNA的表达规律,结合屠宰试验分析PPARγ和C/EBPα mRNA表达水平对肌内脂肪沉积的影响。【方法】选取3—7月龄的江口萝卜猪、从江香猪和大白猪为试验材料,提取心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌和皮下脂肪的总RNA,应用实时荧光定量PCR技术检测PPARγ和C/EBPα基因在3个品种不同月龄各组织中mRNA的相对表达量,同时测定背最长肌中的肌内脂肪含量。【结果】PPARγ、C/EBPα在大白猪3-7月龄各组织中均有表达,其中肝、小肠、背最长肌、皮下脂肪的表达水平较高,心、脾、肺、肾的表达水平较低。其中PPARγ在小肠、背最长肌、皮下脂肪中3、4月龄分别与6、7月龄的表达量差异极显著(P<0.01),C/EBPα在肝、肺、小肠、皮下脂肪中3月龄与6、7月龄均差异极显著(P<0.01);PPARγ、C/EBPα在江口萝卜猪心、脾、肺、肾、背最长肌的表达量最低,在皮下脂肪中最高,具有组织特异性。其表达量随月龄递增而上升,皮下脂肪的增加幅度最大。其中PPARγ在小肠、背最长肌、皮下脂肪中3、4月龄与6、7月龄的表达量差异极显著(P<0.01)。C/EBPα在小肠、皮下脂肪中3月龄与5、6、7月龄的表达量均差异极显著(P<0.01);PPARγ、C/EBPα在从江香猪心、肝、脾、肺、肾、小肠、背最长肌的表达量较低,在皮下脂肪的表达量最高,PPARγ的表达量随月龄增加而上升的幅度较小,C/EBPα的表达量在各组织中的表达量随时间增加而上升。其在小肠、皮下脂肪、背最长肌中3、4月龄与6、7月龄的表达量差异极显著(P<0.01);PPARγ和C/EBPα基因在各组织均有表达,组织间的表达量存在差异,其中在肝、小肠、皮下脂肪中为高丰度表达。随着月龄的增加,PPARγ和C/EBPα基因mRNA的表达模式基本相同,总体呈现上升趋势,6、7月龄的表达水平较高,即随着月龄的增加而逐渐上升,到生长后期维持一个相对稳定水平。总体上皮下脂肪的表达量最高,其次肝、肺、小肠、背最长肌中较高,心、脾、肾中的表达量最低;不同品种间PPARγ、C/EBPα在相同月龄各组织中的表达量存在差异,总体上大白猪中肝、小肠、皮下脂肪中PPARγ和C/EBPα mRNA的表达量分别与江口萝卜猪、从江香猪差异显著;肌内脂肪含量随着月龄的增加持续上升,不同品种间肌内脂肪含量存在差异,其中江口萝卜猪和从江香猪较高。不同品种猪PPARγ和C/EBPα基因的表达量与肌内脂肪含量的相关性分析表明,不同时期基因的表达量与肌内脂肪含量呈不同程度正相关。【结论】猪PPARγ和C/EBPα基因在不同组织、时期和品种中的表达差异可能与脂质代谢和脂肪沉积有关。

miR-328通过C/EBPα表达上调抑制K562细胞增殖

目的:本研究旨在探讨miR-328(microRNA-328)对慢性髓系白血病(CML)急变期细胞株K562增殖的影响及C/EBPα的介导作用。方法:构建miR-328靶向基因及抑制基因的真核表达载体hsa-miR-328及hsa-miR-328-inhibitor,并分别通过脂质体lipofectamineTM2000介导转染至K562细胞;通过荧光显微镜观察细胞转染情况;通过实时荧光定量RT-PCR检测miR-328、C/EBP mRNA的表达水平;Western-Blot方法测定C/EBPα蛋白的表达;CCK-8检测细胞增殖的情况。结果:本研究通过成功构建重组真核表达载体hsa-miR-328、hsa-miR-328-inhibitor;将载体转染K562细胞,24 h后在荧光显微镜下可见荧光细胞,表明载体成功转入K562细胞,48 h和72 h后可见荧光细胞数逐渐增多。实时荧光定量RT-PCR证实miR-328在K562细胞中成功表达,而miR-328对细胞C/EBPαmRNA表达无明显影响;通过Western blot检测发现miR-328恢复C/EBPα蛋白表达;细胞活力检测提示miR-328抑制K562细胞的增殖。结论:成功构建并转染miR-328基因至K562细胞,miR-328通过恢复C/EBPα的表达抑制K562细胞的增殖。