西红花苷通过C/EBP-β/PGC-1α/UCP3途径对缺血缺氧损伤心肌的保护作用

目的探讨西红花苷对异丙肾上腺素所致心肌缺血缺氧模型大鼠的保护作用,并验证其作用机制是否与C/EBP-β/PGC-1α/UCP3信号通路有关。方法皮下注射异丙肾上腺素建立大鼠缺血缺氧模型后,分别灌胃给予西红花苷不同剂量干预(25、50、100mg/kg)。比较各组大鼠血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α、NO水平以及大鼠CI及心肌梗死面积;比较各组心肌Akt、ERK1/2、C/EBP-β、PGC-1α、UCP3蛋白及基因表达水平。结果与空白对照组比较,模型组大鼠存活率极显著降低(P<0.01),血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α、NO水平、CI及心肌梗死面积均极显著升高(P<0.01);心肌纤维排列紊乱且炎性细胞浸润明显;心肌Akt、ERK1/2蛋白表达均显著升高(P<0.05),C/EBP-β、UCP3蛋白及mRNA表达均极显著升高(P<0.01),PGC-1α蛋白及mRNA表达极显著降低(P<0.01)。与模型组比较,阳性对照组大鼠存活率显著升高(P<0.05),血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α、NO水平、心肌梗死面积均极显著降低(P<0.01),CI显著降低(P<0.05),心肌纤维排列整齐且炎性细胞浸润明显减轻;Akt、ERK1/2蛋白表达均极显著升高(P<0.01),C/EBP-β蛋白及mRNA表达均极显著降低(P<0.01),PGC-1α蛋白表达极显著升高(P<0.01)而mRNA表达显著升高(P<0.05),UCP3蛋白表达无差异而mRNA表达显著升高(P<0.05)。与模型组、对照组比较,西红花苷中、高剂量均可显著提高大鼠存活率(P<0.05);显著降低大鼠血清LDH-1、CK-MB、MDA、TNF-α及NO水平(P<0.05);显著降低CI及心肌梗死面积(P<0.05);减轻炎症浸润且提高心肌细胞完整程度;显著升高心肌Akt、ERK1/2蛋白表达水平(P<0.05);显著降低心肌C/EBP-β蛋白及mRNA表达水平(P<0.05),显著升高PGC-1α、UCP3蛋白及mRNA表达水平(P<0.05);其中高剂量组综合效果较好。结论西红花苷对大鼠缺血缺氧损伤心肌具有明显的保护作用,其机制可能与调节C/EBP-β/PGC-1α/UCP3信号通路相关。

复方大黄制剂对肥胖大鼠脂肪细胞瘦素及C/EBPα的影响

目的 :观察正常大鼠、肥胖大鼠和复方大黄制剂灌服 1个月肥胖大鼠脂肪细胞瘦素和C/EBPαmRNA表达的变化及C/EBPα对瘦素表达的调控。方法 :用大、中、小剂量分组 (2 0mg·10 0g-1;4 0mg·10 0g-1;12 0mg·10 0g-1)对肥胖大鼠进行复方大黄制剂灌服。制备脂肪细胞悬液后采用免疫组化ABC法及WesternBlot检测脂肪细胞瘦素表达水平。应用定量RT PCR技术检测脂肪细胞中C/EBPα基因mRNA表达的变化。结果 :肥胖大鼠灌服中剂量复方大黄制剂 30d后体重明显减轻 ;Lee’s指数明显降低。免疫组化ABC法及WesternBlot检测瘦素表达水平 ,发现脂肪细胞瘦素表达明显减弱。定量RT PCR结果发现 ,肥胖大鼠脂肪细胞中C EBPαmRNA表达水平较正常大鼠高 ,在中剂量复方大黄制剂灌服 1个月后 ,随着肥胖大鼠体重的减轻 ,脂肪细胞中C/EBPαmRNA水平也随之降低 ,与瘦素水平降低程度呈显著正相关 (r =0 98,P <0 0 1)。结论 :肥胖大鼠脂肪细胞的瘦素表达水平较正常大鼠高 ;灌服复方大黄制剂减肥有效的同时 ,脂肪细胞瘦素表达水平明显下降。肥胖大鼠脂肪细胞中C/EBPαmRNA表达水平在复方大黄制剂治疗后明显降低 ;其降低程度与脂肪细胞瘦素表达水平间呈显著正相关。

内质网应激凋亡途径对H9C2细胞缝隙连接蛋白43表达的影响及稳心颗粒的干预研究

目的:研究内质网应激凋亡途径对大鼠心肌H9C2细胞缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的影响及稳心颗粒的干预作用。方法:体外培养H9C2细胞,分为对照组、模型组、salubrinal(Sal)组、稳心颗粒组;采用毒胡萝卜素(TG)诱导内质网应激凋亡模型,以经典凋亡抑制剂Sal抑制凋亡,采用CCK-8比色分析法筛选药物浓度及时间,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blotting法检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP-同源蛋白(CHOP)、天冬氨酸胱氨酸特异性蛋白酶-12(Caspase-12)、Cx43的表达。结果:CCK-8结果提示,TG、Sal和稳心颗粒的最佳浓度分别为0.1、20μmol·L^-1和10 g·L^-1,作用时间均为24 h。流式细胞仪检测结果显示,与对照组比较,其余3组的细胞凋亡率显著增加;与模型组比较,Sal组及稳心颗粒组的细胞凋亡率都明显下降。Western blotting结果中,与对照组比较,模型组细胞GRP78、CHOP及Caspase-12蛋白表达水平显著增高,而Cx43蛋白表达水平显著降低;与模型组比较,Sal组和稳心颗粒组细胞CHOP、Caspase-12蛋白表达水平显著降低,Cx43蛋白表达水平显著升高,Sal组细胞GRP78蛋白表达差异无统计学意义,稳心颗粒组GRP78蛋白表达水平显著升高。结论:TG诱导的内质网应激凋亡途径会影响Cx43的表达,稳心颗粒可以通过抑制内质网应激凋亡途径调节H9C2细胞Cx43的表达水平。

N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊对幼鼠非酒精性脂肪肝病miRNA的影响

目的:初步研究N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊对幼鼠非酒精性脂肪肝病的保护作用,并且探讨其对mi RNA及相应的靶基因的影响。方法:采用高脂饲料喂养的方法复制幼鼠非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型。HE染色观察幼鼠肝组织脂肪变性程度;micro RNA芯片检测肝组织的mi RNA表达谱;荧光定量PCR对mi RNA进行验证;采用荧光定量PCR和Western blot法对目标mi RNA进行靶基因预测并进行验证。结果:根据检测结果,初步确定mi RNA199a-5p和mi RNA-378-5p是NAFLD的关键mi RNA,脂蛋白脂酶(lipoprotein lipase,Lpl)是mi RNA199a-5p的靶基因,固醇调节元件结合蛋白(sterol regulatory element binding proteins-1,Srebp1)、CCAAT增强子结合蛋白α(CCAAT enhancer binding protein alfa,C/EBP-α)是mi RNA-378-5p的靶基因。结论:推测N-乙酰半胱氨酸活性炭缓释微囊可能通过上调Lpl表达水平,下调Srebp1和C/EBP-α表达水平。这些基因与脂肪肝密切相关,可能对幼鼠NAFLD具有保护作用。

川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞的增殖和分化影响

目的研究川续断皂苷Ⅵ(asperosaponinⅥ,ASAⅥ)对3T3-L1前脂肪细胞的增殖及成脂分化影响,以进一步了解其药理作用。方法以3T3-L1前脂肪细胞为靶细胞,通过噻唑蓝(MTT)法观察不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响;不同浓度(0、10、25、50μmol·L-1)川续断皂苷Ⅵ干预3T3-L1细胞的成脂诱导分化,油红O染色检测3T3-L1细胞分化程度;试剂盒测定各组培养液中葡萄糖及游离脂肪酸含量;荧光定量PCR(Q-PCR)检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activatedreceptorγ,PPARγ)、CCAAT增强子结合蛋白(CCAAT/enhan-cer-binding proteinα,C/EBPα)mRNA表达水平。结果 MTT法测定表明不同浓度川续断皂苷Ⅵ对3T3-L1细胞增殖能力的影响不同,其中10μmol·L-1浓度组作用24 h后促增殖作用最明显,随着川续断皂苷Ⅵ浓度增加,促增殖效应降低;川续断皂苷Ⅵ能够剂量依赖性的抑制3T3-L1细胞成脂,减少细胞内脂滴聚集,抑制细胞对葡萄糖的吸收利用,减少游离脂肪酸形成,下调成脂过程中PPARγ和C/EBPαmRNA表达。结论川续断皂苷Ⅵ具有促进3T3-L1细胞增殖作用,并通过下调PPARγ和C/EBPα基因抑制3T3-L1细胞成脂分化。

转录因子C/EBP-β促进人子宫内膜基质细胞蜕膜化进程

目的:探讨转录因子C/EBP-β在人子宫内膜基质细胞体外蜕膜化过程中的表达变化及其作用。方法:采用8-Br-cAMP和MPA对人子宫内膜基质细胞体外蜕膜化处理,并通过瞬时转染的方法下调C/EBP-β的表达,分别收集蜕膜化处理不同时间及干扰前后的细胞及其培养上清液,采用Western blot和荧光适时定量RT-PCR分别在蛋白质水平和mRNA水平检测转录因子C/EBP-β在蜕膜化过程中的表达变化,采用化学发光法检测蜕膜化不同时间点培养液中泌乳素(PRL)的浓度及干扰前后PRL表达水平的变化。结果:免疫印迹结果显示人子宫内膜基质细胞在体外蜕膜化过程中C/EBP-β蛋白的表达随蜕膜化时间的延长逐渐升高(0.068、0.140、0.316、0.595),与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);荧光适时定量RT-PCR也证实C/EBP-βmRNA的表达随蜕膜化时间的延长明显增加(0.020、0.054、0.094、0.486),与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。化学发光法检测到在蜕膜化过程中细胞分泌的PRL水平随蜕膜化时间延长逐渐升高,差异有统计学意义(P<0.05),而转染C/EBP-βsiRNA后细胞分泌的PRL浓度则明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:转录因子C/EBP-β在人子宫内膜基质细胞体外蜕膜化进程中上升性表达,在蜕膜化过程中可能发挥着重要的促进作用。

转录因子C/EBP-β在人子宫内膜中的表达

目的:探讨转录因子C/EBP-β在人正常子宫内膜及早孕蜕膜中的表达及其变化规律。方法:采用免疫组化进行组织学定位,采用免疫印迹进行蛋白质定量,采用RT-PCR进行mRNA检测,在蛋白质水平和mRNA水平检测人正常月经周期子宫内膜及早孕蜕膜中转录因子C/EBP-β的表达变化。结果:C/EBP-β蛋白主要在人子宫内膜基质细胞核中表达,C/EBP-β蛋白及mRNA在增生期C/EBP-β仅有弱表达,分泌期显著增加(P<0.05),以分泌晚期表达最强,在早孕蜕膜组织中也有较强的表达(P<0.05)。结论:C/EBP-β在人正常子宫内膜分泌晚期及早孕蜕膜组织中呈现较强的表达,可能在胚胎着床及妊娠的维持中发挥着重要的调节作用。

转录因子C/EBP-β调节人子宫内膜基质细胞蜕膜化作用机理研究

目的探讨转录因子C／EβP—β调节人子宫内膜基质细胞蜕膜化的作用机制。方法采用8-Br—cAMP和MPA方法对人子宫内膜基质细胞体外蜕膜化实施处理分析，并通过瞬时转染方法调节转录因子C／EBP—β表达，然后分别收集蜕膜化处理不同时间及干扰前后的细胞，利用流式细胞仪检测细胞蜕膜化不同时间细胞分期的改变情况以及干扰前后细胞周期的变化，并采用Western blot和荧光定量实时PCR法（RT—PCR）分别在mRNA水平和蛋白质水平下检测细胞周期蛋白p57在转染siRNA组和对照组中的表达情况。结果子宫内膜基质细胞在体外蜕膜化中S期细胞的比例随着细胞蜕膜化时间的增长而减少，而G0／G1期细胞的比例随着细胞蜕膜化时间的增长呈现明显的上升趋势，G2／M期细胞的比例随着细胞蜕膜化时间的增长而显著下降，差异均有统计学意义（P〈0．05）；而转染C／EBP—β siRNA后再蜕膜化48h后的S期细胞比例变化范围为4．28％-6．88％，差异有统计学意义（P〈0．05）；G0／G1期细胞比例范围为86．07％～87．34％，G2／M期细胞比例范围为7．04％～8．38％，均呈逐渐下降趋势，但差异无统计学意义（P〉0．05）；且转染C／EBP—β siRNA以后，对人子宫内膜基质细胞中细胞周期蛋白p57的表达进行检测分析，发现p57的表达有明显的下降趋势，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论转录因子C／EBP—β在人子宫内膜基质细胞蜕膜化过程中通过调节细胞周期蛋白p57使细胞脱离其周期而分化为一种新的蜕膜细胞，在蜕膜化过程中发挥重要作用。