AmpCβ-内酰胺酶的研究进展

随着现代医疗技术的发展，侵入性操作不断增加以及广谱β-内酰胺类抗生素特别是第三、四代头孢类抗生素及多种β-内酰胺类酶抑制剂在临床上的大量使用，使一些条件致病菌成为医院感染的重要病原菌。因产生各种β-内酰胺酶而导致细菌的耐药现象也日益普遍，特别是去阻遏持续高产和质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶（简称AmpC酶）具有很强的耐药性，给临床治疗带来很大的困难。

医院感染高产Amp CB-内酰胺酶阴沟肠杆菌的分子流行病学研究

目的 了解医院感染中高产 Am p Cβ-内酰胺酶阴沟肠杆菌的流行情况。方法 通过药敏实验和等电点分析筛选出高产 Am p Cβ-内酰胺酶的阴沟肠杆菌 ,然后通过诱导实验分析了其 Am p Cβ-内酰胺酶表型 ,最后 ,通过PFGE分型技术考察了其克隆构成情况。结果 在 35株阴沟肠杆菌中 ,2 8株 (80 % )高产 Am p Cβ-内酰胺酶 ,其中18株 (6 5 % )属完全去抑制型 ,10株 (35 % )属部分去抑制型 ;2 8株高产 Am p Cβ-内酰胺酶阴沟肠杆菌的染色体DNA指纹图呈 17种克隆的多克隆构成模式。结论 阴沟肠杆菌引起的医院感染中流行高产 Amp Cβ-内酰胺酶的菌株 ,完全去抑制型为其主要表型 ;其内源性感染方式使阴沟肠杆菌医院感染株呈多克隆构成模式。

β-内酰胺酶E166C突变型的原核表达、纯化及鉴定

目的本研究旨在构建β-内酰胺酶E166C突变体并于大肠杆菌中原核表达,纯化及鉴定该蛋白。方法利用体外PCR扩增获得β-内酰胺酶pen P突变质粒并通过DNA测序鉴定,将重组质粒转化至BL21(DE3)中,以IPTG诱导蛋白表达。菌液超声裂解后首先以镍柱纯化融合蛋白,蛋白水解酶HRV3C除去融合标签,然后用凝胶过滤层析色谱进一步纯化得到目标蛋白,最后应用SDS-PAGE和电喷雾质谱法鉴定纯化的目标蛋白。结果成功构建了β-内酰胺酶pen P-E166C突变质粒,并且先后通过亲和镍柱和凝胶过滤层析柱纯化获得了纯度非常高的单一蛋白,SDSPAGE和电喷雾质谱法确定蛋白的分子量与理论值一致。结论本课题获得的pen P的活性位点突变体E166C蛋白将用于以后进一步的研究,可以有助于我们从分子水平上去研究抗生素和β-内酰胺酶的相互作用。